微波辅助提取香椿叶中黄酮成分工艺研究

摘要：对微波辅助条件下乙醇溶液提取香椿叶中黄酮成分进行了研究，以总黄酮提取量为考察目标，综合单因素影响确定通过L9（34）正交实验初步确定最佳提取工艺条件为：甲醇浓度50%，微波频率取700 W，料液比1∶25，回流25 min，获得的黄酮提取收率5.34%。

关键词：香椿；黄酮；微波；提取工艺

中图分类号：O629.9

文献标识码：A 文章编号：1674-9944（2016）20-0120-02

1 引言

香椿，其春季所发嫩芽是传统的菜肴，不但营养丰富还具有食疗保健作用，具有泻毒下火、保护肝脏、抵抗炎症、降低血压、解除痉挛等多种生理活性功效[1～3]。经现代科学研究，香椿树嫩叶中富含具有广泛生物活性和重要药用价值的黄酮类化合物，其提取物具有抗氧化、抗菌、抵抗炎症、降压、抗癌等多种生理活性功效药理作用[4～7]。但是，目前香椿在秋季落叶的利用研究极少，拟在传统的热回流提取工艺之上对微波辅助提取香椿老叶中黄酮的工艺进行研究[8]，丰富香椿老叶黄酮提取的工艺方法，将为香椿老叶黄酮成分提取及分析的相关研究奠定理论基础。

2 实验部分

2.1 仪器与试剂

实验仪器与试剂有：UV2550紫外分光光度计（日本岛津），芦丁分析标准品（阿拉丁），香椿（秋后老叶，达州万源），其余试剂均为分析纯。

2.2 检测标准曲线的绘制

精密称取芦丁分析标准品20.0 mg，使用30%乙醇溶解并定容至100 mL制备的芦丁标准贮备液（0.2 mg/mL）。准确移取0，1.0 mL， 2.0 mL， 4.0 mL， 6.0 mL， 8.0 mL， 10.0 mL标准储备液至7支25 mL容量瓶中。然后分别先加30%乙醇至体积一半，后加入0.7 mL质量分数为5%的亚硝酸钠溶液，摇匀后放置5 min，再分别加入0.7 mL质量分数为10%的硝酸铝溶液，摇匀后放置5 min，最后加入1 mol/L的氢氧化钠溶液5 mL并用30%的乙醇定容至刻度，放置10 min。以未添加芦丁储备液的溶液为空白，在510 nm测定吸光度值，以吸光度Y为纵坐标，黄酮浓度为横坐标，绘制标准曲线（图1）。

2.3 香椿老叶黄酮的提取与含量测定

将香椿老叶去梗后放入干燥箱内30℃干燥至恒重，经中药粉碎机粉碎后放入干燥器备用。准确称取1.00 g 香椿叶粉末移入烧瓶中，加入一定量的乙醇溶液，在一定的微波功率和一定的温度下提取一定的时间，将提取液减压抽滤除去滤渣，转移至100 mL容量瓶并用30%乙醇定容至刻度，摇匀。取10 mL定容后溶液的于转子中，用离心机以10000 r/min的速度离心5 min，精确量取4 mL离心后的上层清液于25 mL容量瓶，再加入质量分数为5%的Na（NO2）溶液0.7 mL，摇匀使其充分反应后等待5 min，然后加入质量分数为10%的Al（NO3）3溶液0.7 mL，摇匀使其充分反应后等待5 min，然后加入1 mol/L的NaOH溶液5 mL混匀使其充分反应，最后用30%的乙醇定容至刻度，放置10 min作为待测溶液测其吸光度。

2.4 正交试验

2.4.1 正交试验因素水平

利用提前对微波辅助下提取香椿叶中的黄酮成分进行了单因素实验计算后，确立了以乙醇水溶液浓度、微波辐射功率、微波辐射时间、料液比4个因素，每个因素3个水平，进行L9（34）正交试验（表1）；将总黄酮提取率为最后考察指标，结合实际情况确定最佳提取工艺。

2.4.2 正交试验结果

按上述因素与水平设计实验方案，并进行正交试验，结果如表2所示。

由表2可知，各因素的极差大小关系为RA>RB>RC>RD ，因此各因素对香椿叶总黄酮提取的影响顺序为A>B>C>D，即乙醇浓度>微波功率>微波时间>料液比，乙醇浓度的极差为0.194，影响程度最大；料液比极差为0.035，影响程度最小。综合以上各因素的影响，确定提取香椿叶中黄酮成分的最佳工艺为即乙醇浓度50%，微波频率700 W，微波时间25 min，料液比1∶25。

3 结果与讨论

从实验结果上看，乙醇浓度、微波功率、微波辐射时间、料液比几个因素对香椿叶中黄酮成分的提取都有着明显的影响。根据正交试验我们确定最佳提取工艺条件为乙醇浓度50%，微波频率700 W，微波时间25 min，料液比1∶25。经在最佳工艺条件下提取验证黄酮提取率为5.34%，我们对香椿叶提取物经过一次D101大孔树脂纯化富集后黄酮含量即可达26.7%，经高效液相色谱对其成分分析表明组分简单且主要成分集中，这些表明了香椿老叶黄酮成分的后续开发利用具有很好的前景。

参考文献：

[1]裴宋雨，任志勇，焦振彬，等.香椿微卫星富集文库构建及特性分析[J].种子，2015，34（2）： 13～16.

[2]郝继伟.浅谈虎目叶的资源价值与利用[J].江苏农业科学，2003（5）：102～103.

[3]李曙轩.中国农业百科全书-蔬菜卷[M].北京：农业出版社，1990.

[4]张仲平，牛 超，孙 英.虎目叶黄酮类成分的分离与鉴定[J].中药材，2001，24（10）：725～726.

[5]田迪英，杨荣华.虎目叶的抗菌作用研究[J].食品工业科技，2002，23（11）：21～22.

[6]张京芳，王冬梅，周 丽，等. 虎目叶抗氧化物提取工艺优化与抗氧化活性分析[J]. 农业机械学报， 2007，38（8）：97～100.

[7]曹玮国，刘志勤，邵云.黄酮类化合物药理作用的研究进展[J].西北植物学报，2003，23（12）：2214～2247.

[8]杜惠蓉， 王 辉. 香椿叶中黄酮成分提取工艺技术研究[J]. 应用化工，2015，44 （12）： 2243～2244.