沙棘籽油对肺孢子虫肺炎大鼠免疫功能的影响*

陈建芳，闫 艳，高 静，于桂霞，周 蕾

(包头医学院病原生物学实验室，内蒙古 包头014060)

沙棘籽油对肺孢子虫肺炎大鼠免疫功能的影响*

陈建芳，闫 艳，高 静，于桂霞，周 蕾

(包头医学院病原生物学实验室，内蒙古 包头014060)

目的:探讨沙棘籽油对肺孢子虫肺炎(pneumocystis pneumonia，PCP)大鼠免疫功能的影响，为沙棘籽油的临床应用提供理论依据。方法:用地塞米松建立大鼠PCP动物模型，观察沙棘籽油对其免疫器官指数的影响，观察沙棘籽油对其腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响，通过溶血空斑实验检测其抗体形成细胞数量。结果:沙棘籽油能增加PCP大鼠胸腺指数和脾脏指数，提高PCP大鼠巨噬细胞的吞噬能力和抗体形成细胞数量。结论:沙棘籽油可增强PCP大鼠的免疫功能。

沙棘籽油;肺孢子虫肺炎;大鼠;免疫功能

肺孢子虫肺炎(pneumocystis pneumonia，PCP)是免疫缺陷者的常见感染性疾病，多见于艾滋病、器官移植、长期大量应用免疫抑制剂者，其病原体肺孢子虫在正常宿主体内呈隐性感染状态，当免疫功能下降或受损时增殖而致病，甚至导致宿主死亡［1］。目前临床用于治疗PCP的主要药物为复方新诺明、戊烷脒等，虽然疗效较好，但某些患者存在严重的副作用或耐药性，因此，寻求新的高效低毒的抗肺孢子虫药物成为研究焦点之一。沙棘作为我国传统中药，具有高效、生长广泛、无毒副作用的优势，在治疗心血管疾病、抗氧化、抗炎症、抗肿瘤等方面具有广阔的应用前景［2］。沙棘籽油从沙棘的种子中提取，含有维生素C、维生素E、黄酮、多酚等多种生物活性物质，对心血管系统、血液系统、免疫系统、消化系统、呼吸系统等具有广泛的药理作用，还具有抗氧化、抗放射、抗炎、抗过敏等作用［3］。本实验通过观察沙棘籽油对PCP大鼠免疫功能的影响，以期为临床防治PCP提供理论依据和实验参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 健康雌性Wistar大鼠，体重180～220 g，购自本校实验动物中心，5只/笼，适应性饲养1周开始试验，清洁环境下饲养，喂饲按标准配方配制的普通颗粒饲料，不限制饮水量，7 d更换1次垫料。

1.1.2 主要试剂 沙棘籽油(内蒙古宇航人科技有限公司，批号120812);地塞米松磷酸钠注射液(郑州卓峰制药有限公司产品，批号130217);四环素(内蒙古赤峰蒙欣药业有限公司产品，批号130301)。

1.2 方法

1.2.1 PCP模型的建立 按参考文献［4］建立大鼠PCP动物模型。在大鼠腹股沟皮下注射地塞米松磷酸钠2 mg/次，2次/周，连续6周，同时在饮水中加入1 mg/mL四环素以预防继发性细菌感染。连续注射地塞米松磷酸钠6周后随机选取2只大鼠处死，制作肺组织印片，用吉姆萨染液染色，镜检见肺孢子虫包囊，证明PCP模型建立成功。实验过程中，因造模大鼠免疫能力下降，除正常对照组外，PCP模型组和沙棘籽油治疗组各死亡2只、沙棘籽油预防组死亡1只。

1.2.2 实验分组及给药 随机分为对照组、PCP模型组、沙棘籽油预防组和沙棘籽油治疗组4组，10只/组。除对照组外，其余3组均用地塞米松造模，PCP模型组不给任何治疗药物。沙棘籽油预防组在造模第1周开始，同时用沙棘籽油连续灌胃6周，1 mL/只，每周3次，连续6周;沙棘籽油治疗组在造模第7周开始用沙棘籽油连续灌胃1周，2 mL/只，1次/d;其余2组用等量生理盐水灌胃。各组在试验第8周采集胸腺、脾脏、血液、腹腔液等标本进行相关项目检测。

1.2.3 免疫器官指数测定 试验前称量大鼠体重，在进行腹腔巨噬细胞吞噬试验的同时，取大鼠的胸腺和脾脏，用滤纸吸干称重，以胸腺或脾脏重量(mg)与体重(g)之比计算出胸腺指数、脾脏指数。

1.2.4 腹腔巨噬细胞吞噬功能测定 试验前3 d向大鼠腹腔注射无菌肉汤2 mL，试验前向大鼠腹腔注射2%的鸡红细胞悬液1 mL，轻揉腹部。30 min注射Hanks液2 mL，轻揉腹部，脱颈处死大鼠，从腹腔中吸取腹腔液涂片，瑞氏染色后镜检，计数100个巨噬细胞，并计算巨噬细胞吞噬百分率。

1.2.5 抗体形成细胞数量测定 采用溶血空斑试验，将大鼠经腹腔无菌注射10%绵羊红细胞悬液1 mL，免疫后4 d脱颈处死大鼠，剖腹取脾，放入加Hanks液平皿内，剪碎研磨过滤，制成5×106/mL脾细胞悬液。取脾细胞悬液0.1 mL、补体0.1 mL、20%绵羊红细胞悬液0.1 mL、Hanks液0.7 mL混匀后加入玻片小室内，用凡士林封口。置于37℃温箱中孵育1～1.5 h。肉眼计数玻片小室内的溶血空斑数量，即抗体形成细胞数量。

1.3 统计学处理 实验数据应用SPSS 13.0软件进行统计分析，以表示，采用单因素方差分析进行显著性分析。

2 结果

2.1 沙棘籽油对大鼠免疫器官指数的影响 PCP模型组大鼠免疫器官指数低于对照组(P＜0.05)，提示地塞米松抑制大鼠免疫功能致免疫器官萎缩;与PCP模型组相比，沙棘籽油预防组和治疗组大鼠胸腺指数、脾脏指数均升高(P＜0.05);预防组和治疗组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，提示沙棘籽油能增加PCP大鼠胸腺指数和脾脏指数。见表1。

表1 沙棘籽油对大鼠胸腺指数和脾脏指数的影响(±s)

表1 沙棘籽油对大鼠胸腺指数和脾脏指数的影响(±s)

a为与对照组相比P＜0.05，b为与PCP模型组相比P＜0.05

组别 n 胸腺指数(mg/g) 脾脏指数(mg/g) 10 0.98±0.11 4.43±0.96 PCP模型组 8 0.45±0.09a 3.01±1.03a沙棘籽油预防组 9 0.92±0.16b 4.23±1.05b沙棘籽油治疗组 8 0.80±0.18b 4.07±0.82对照组b

2.2 沙棘籽油对大鼠巨噬细胞吞噬功能的影响 PCP模型组大鼠腹腔巨噬细胞吞噬率低于对照组(P＜0.05)，提示地塞米松可抑制大鼠巨噬细胞吞噬功能;与PCP模型组相比，沙棘籽油预防组和治疗组大鼠腹腔巨噬细胞吞噬率均升高(P＜0.05);预防组和治疗组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，提示沙棘籽油可增强PCP大鼠巨噬细胞吞噬功能。见表2。

表2 沙棘籽油对大鼠巨噬细胞吞噬功能的影响(±s)

表2 沙棘籽油对大鼠巨噬细胞吞噬功能的影响(±s)

a为与对照组相比P＜0.05，b为与PCP模型组相比P＜0.05

组别 n 巨噬细胞吞噬百分率(%) 10 51.70±5.48 PCP模型组 8 37.63±3.66a沙棘籽油预防组 9 49.56±6.97b沙棘籽油治疗组 8 44.25±4.83对照组b

2.3 沙棘籽油对大鼠抗体形成细胞数量的影响 PCP模型组大鼠溶血空斑数量低于对照组(P＜0.05)，提示地塞米松可降低抗体形成细胞数量;与PCP模型组相比，沙棘籽油预防组和治疗组大鼠溶血空斑数量均增加(P＜0.05);预防组和治疗组比较差异有统计学意义，预防组高于治疗组(P＜0.05)，提示沙棘籽油可提高大鼠的抗体形成细胞数量，预防组效果强于治疗组。见表3。

表3 沙棘籽油对大鼠抗体形成细胞数量的影响(±s)

表3 沙棘籽油对大鼠抗体形成细胞数量的影响(±s)

a为与对照组相比P＜0.05，b为与PCP模型组相比P＜0.05，c为与沙棘籽油预防组相比P＜0.05

组别 n 溶血空斑数(个/106脾细胞) 10 353.50±65.32 PCP模型组 8 97.50±38.73a沙棘籽油预防组 9 279.44±68.71b沙棘籽油治疗组 8 213.13±30.58对照组bc

3 讨论

3.1 沙棘籽油能提高大鼠免疫器官指数 免疫器官是免疫系统的重要组成部分，其发育情况直接影响机体的免疫功能。通过测定大鼠免疫器官的重量，可初步反映对机体免疫功能的影响［5］。本试验结果表明，PCP模型组大鼠胸腺指数和脾脏指数低于对照组，沙棘籽油预防组和治疗组大鼠胸腺指数和脾脏指数与PCP模型组相比均升高，说明地塞米松可抑制大鼠免疫器官的发育，沙棘籽油能增加PCP大鼠胸腺指数和脾脏指数，沙棘籽油可通过对免疫器官的作用起到调节免疫功能的作用。

3.2 沙棘籽油能增强大鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能巨噬细胞在体内具有非特异性吞噬作用及抗原提呈作用。本试验试图探讨沙棘籽油对巨噬细胞是否具有免疫促进作用，通过检测腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞来反映巨噬细胞的吞噬能力。结果表明，PCP模型组大鼠巨噬细胞吞噬率低于对照组，与PCP模型组相比，沙棘籽油预防组和治疗组大鼠巨噬细胞吞噬率均增高，说明地塞米松致大鼠巨噬细胞吞噬功能下降，沙棘籽油能增强大鼠巨噬细胞吞噬功能，提示沙棘籽油具有对巨噬细胞的免疫促进作用，能够增强机体的非特异性免疫功能。

3.3 沙棘籽油能提高大鼠抗体形成细胞数量 抗体是体液免疫应答的重要效应分子，与相应的抗原特异性结合发挥多种生物学效应。通过溶血空斑试验检测脾中抗体形成细胞的数量，可推算出分泌特异性抗体的B细胞数量，从而反映机体体液免疫功能状态。有研究表明，沙棘提取物可提高小鼠脾脏中抗体生成细胞数量、提高血清中抗体IgG、IgA、IgM及补体C3、C4水平［6］。本试验结果表明，PCP模型组大鼠抗体生成细胞数量低于对照组，说明地塞米松致大鼠抗体生成细胞数量降低;与模型对照组相比，沙棘籽油预防组和治疗组抗体生成细胞数量均升高，沙棘籽油对PCP大鼠的预防效果强于治疗效果，提示沙棘籽油可提高地塞米松致免疫功能低下大鼠的抗体生成细胞数量，表明沙棘籽油具有增强机体体液免疫功能的作用。

本研究结果证明，沙棘籽油可提高PCP大鼠免疫器官指数，增强其腹腔巨噬细胞的吞噬功能，提高其抗体产生细胞数量，提示沙棘籽油有增强机体免疫功能的作用，可用于PCP的预防和治疗，但其具体作用机制有待进一步的研究。

［1］ Miller RF，Huang L，Walzer PD.Pneumocystis Pneumonia Associated with Human Immunodeficiency Virus［J］.Clin Chest Med，2013，34(2):229-241.

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2015-09-22)

包头市医药卫生基金(2011S2012-07-6)