浅探快速尿细菌培养方法的建立

张艳霞 长沙市中医医院（长沙市第八医院） （湖南 长沙 410199）

浅探快速尿细菌培养方法的建立

张艳霞 长沙市中医医院（长沙市第八医院） （湖南 长沙 410199）

尿路感染是人类最常见的感染之一，是尿道内有大量微生物繁殖而引起的尿路炎症，通常伴随有菌尿和脓尿。可发生于各个年龄段的人群。典型的临床表现为发热、尿频、尿急、尿痛、排尿困难和耻骨上压痛，临床表现可因患者的年龄和健康状况不同而异。诊断尿路感染最常用的方法是进行尿液标本的细菌学检查，而传统的细菌培养方法需要3～4d才能出鉴定药敏结果。在药敏结果出来之前，医生只能根据经验用药，这就增加了医生对患者病情掌握的不确定性。目前临床微生物鉴定药敏试验的方法有两种，第一种方法是沿用100多年前由Gram、Pasteur、Koch及Petri等创造的传统的微生物学鉴定方法。用常规的手工方法即通过细菌的形态、生理、生化性状等对细菌进行分类鉴定，并用纸片法进行药敏试验。目前使用最广泛的方式，但过程繁琐，费时费力。另一种方法是借助商品化的鉴定系统，免除了繁琐的手工操作，通过细菌在反应板上的生化反应自动判读结果，确定细菌种类。因操作较为简单，功能齐全，而市场上此类仪器也较多，也已大量应用于临床，但整个鉴定药敏时间仍需3～4d。而临床医生在往往在治疗患者的过程中，更多的是关注革兰阳性球菌、革兰阴性杆菌或真菌及其药敏，而非细菌具体种类。

1.目的

通过自动微生物分析系统，优化细菌培养条件，寻找一种快速而准确的尿培养及细菌鉴定、药敏方法，从而在24～48h内报告细菌鉴定药敏结果。提高时效的同时，准确率较高，为医生提供及时可靠的诊断依据。

2.方法

2.1 定制微生物鉴定药敏卡片

结合自动微生物药敏分析系统，采用96孔板定制微生物鉴定药敏卡片，分为革兰染色阳性球菌药敏卡片、革兰染色阴性杆菌药敏卡片、真菌鉴定药敏卡片。结合临床常用抗生素的使用并充分考虑其MIC，如：革兰染色阴性

杆菌药敏卡片的药物包括AMP、AMC、PIP、TZP、MEM、ATM、CXM、FEP、CAZ、CRO、CFP、CSL、FOS、AMK、SXT、NIT、LVX、TGC，主要涉及的细菌含肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌以及其他非发酵菌。革兰染色阴性杆菌药敏卡片的药物包括AMP、AMC、PIP、TZP、MEM、ATM、CXM、FEP、CAZ、CRO、CFP、CSL、FOS、AMK、SXT、NIT、LVX、TGC，并充分考虑可能的MIC。主要涉及的细菌含肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌以及其他非发酵菌。

2.2 细菌培养鉴定及药敏试验操作步骤

①按照《全国临床检验操作规程》要求，取中段尿10mL置于15mL离心管中，接种血平板、中国蓝平板，将平板置于CO2浓度为5%的、温度为37˚C的培养箱中培养；②将标本以4000r/min离心10min，弃上清，取底层0.2mL尿沉渣加入装有5mL肉汤培养基的小培养瓶中，混匀，置于220r/min、37˚C的振荡培养箱中培养8h；③取出离心管，4000r/min离心10min，取少许沉渣涂片，革兰染色并镜检，并初步报告镜检结果，如无菌生长、革兰阳性球菌、革兰阴性杆菌、真菌等；④根据镜检结果选着药敏卡片，并按标准操作规程操作药敏试验，置于37˚C培养箱12h后上机检测；⑤取血平板、中国蓝平板上生长细菌染色镜检，并判断是否与之前结果一致。如一致，报告药敏结果。如不一致，取平板上分离出的细菌再进行药敏。

3.结果

在培养8h后，能初步判断细菌革兰染色情况，在24h内报告细菌革兰染色情况及药敏结果。如前后革兰染色结果不一致，则48h内报告鉴定药敏结果。

4.结论

尿路感染在药敏结果报告之前，往往是临床医生根据经验用药，容易造成误用从而影响治疗效果。通过改良试剂、耗材、操作步骤等从而缩短药敏报告时间，很多程度依靠于药敏试验，这种改良的快速尿细菌培养方法相比传统鉴定药敏方法，能缩短鉴定药敏药敏时间，为临床提供有价值诊断依据。但在具体的操作过程中，影响因素较多，如留取操作不规范，污染标本；标本内细菌总量不一致，影响8h时结果判断。

1006-6586(2017)16-0022-02

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2017-06-16