Aurora kinases在宫颈癌发病机制中的探索

肖晋军

Aurora kinases在宫颈癌发病机制中的探索

肖晋军

目的 通过分析Aurora激酶A、B在正常宫颈组织，CIN及宫颈癌组织中的表达，探讨Aurora激酶A、B在宫颈癌发生、发展中的作用。方法 （1）选取深圳市30例宫颈癌患者，我院CIN患者30例，宫颈健康者30例，并取组织标本作研究。（2）采用荧光定量法测定Aurora激酶A、B在不同宫颈组织的表达及与HPV16、、HPV18感染关系。（3）采用细胞仪分析30例宫颈癌患者组织标本中Aurora激酶A、B在表达与不表达时细胞的增殖率，凋亡率，并对患者采用化疗药物顺铂治疗后观察癌细胞的增殖率，凋亡率。结果 HPV16、HPV18及Aurora激酶在正常宫颈组织中的表达情况较低，HPV16、HPV18在宫颈癌中表达情况极高，表达率分别为96．67%、100．00%，CIN中表达其次，表达率分别为66．67%、70．00%，约占致癌型别的70%左右，差异具有统计学意义（P＜0．05）。Aurora激酶A在宫颈癌组织标本存在高表达，Aurora激酶B高表达与肿瘤的恶性侵袭相关，差异具有统计学意义（P＜0．05）。观察组宫颈癌细胞中Aurora激酶A、Aurora激酶B表达情况低于对照组，差异均具有统计学意义（P＜0．05）。对宫颈癌患者采用Aurora激酶抑制剂VX-680或化疗药物顺铂治疗后，癌细胞的增殖率显著下降、凋亡率显著升高，Aurora激酶未表达组癌细胞增殖率低于表达组、凋亡率高于表达组，差异具有统计学意义（P＜0．05）。结论 Aurora激酶在女性宫颈癌细胞中存在显著高表达的现象,通过对宫颈癌患者采用Aurora激酶抑制剂VX-680或化疗药物顺铂治疗后，宫颈癌细胞的增殖率显著下降、凋亡率显著升高。

Aurora激酶；HPV；宫颈癌

宫颈癌作为常见妇科恶性肿瘤疾病的一种，由宫颈病变进一步发展所致，分为宫颈上皮内瘤变和浸润癌，严重危及患者的生命[1]。有研究表明[2]，高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染时诱发宫颈癌及宫颈癌前病变的主要原因。Aurora kinases（Aurora激酶）家族是一种丝/苏氨酸蛋白激酶，有研究表明宫颈癌变患者的Aurora激酶存在明显DNA扩增，RNA基因蛋白水平也显著增高[3-4]。本研究为进一步探索分析Aurora kinases在宫颈癌中发病机制，选取宫颈癌标本、CIN组织及正常宫颈组织纳入本次研究，分析后现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.2 方法

采用荧光定量FQ-PCR法检测HPV16、HPV18在不同宫颈组织（宫颈癌、CIN及正常宫颈）的表达，应用杭州Linegene荧光定量PCR检测仪对组织标本进行HPVDNA定性检测，HPV-16、HPV-18型检测按照试剂盒（S20040032，深圳匹配生物技术开发有限公司）说明书进行操作，比较宫颈癌、CIN及正常宫颈之间表达的差异。另采用免疫组化检测Aurora激酶A、Aurora激酶B在不同宫颈组织的表达，观察分析Aurora激酶A、Aurora激酶B在不同宫颈组织的表达及与HPV16、HPV18感染的关系。

将选取的30例宫颈癌患者中分为观察组、对照组，每组各15例，采用Aurora激酶抑制剂VX-680进行治疗的设为观察组，未采用Aurora激酶抑制剂VX-680进行治疗的设为对照组，采用Western-blot检测两组中宫颈癌细胞中Aurora激酶A和Aurora激酶B表达的差异，通过流式细胞仪，采用流式细胞仪分析宫颈癌细胞中Aurora激酶A、B在表达与不表达时细胞的增殖率，凋亡率，采用宫颈癌Elisa试剂盒（Human nasopharyngeal carcinoma，NPC ELISA试剂盒）说明书进行操作。再将两组宫颈癌标本用化疗药物顺铂处理后，通过流式细胞仪观察Aurora激酶表达与不表达情况下宫颈癌细胞的增殖率，凋亡率，对比分析Aurora激酶受抑制后癌细胞对顺铂敏感性的不同。

1.3 评价指标

（1）比较宫颈癌、CIN及正常宫颈组织标本HPV16、HPV18的表达情况之间的差异，同时观察分析Aurora激酶A、Aurora激酶B在不同宫颈组织的表达及与HPV16、HPV18感染的关系。

（2）观察比较加入Aurora激酶抑制剂VX-680及未加入Aurora激酶抑制剂VX-680两种情况下，宫颈癌细胞中Aurora激酶A和Aurora激酶B的表达情况。

（3）分析宫颈癌细胞中Aurora激酶A、B在表达与不表达时细胞的增殖率，凋亡率，对比分析Aurora激酶受抑制后癌细胞对顺铂敏感性的差异。

1.4 统计学方法

落实建筑行业项目管理机制，综合考虑项目登记的建筑业工程，能够准确掌握建筑项目的进度，并对项目本身的申报纳税状况以及开具发票的情况进行有效监控。但是，增值税管理模式是将纳税人作为主体，综合考虑机构所在区域的纳税基本原则，而所在区域的国税机关要负责构建相应的监控机制。但这种方式已经远远超出了现阶段增值税管理的范围，直接增加了税务机关的工作难度，很难对异地工程项目信息进行有效掌握，进而引发了虚开发票或增加了税源流失风险，直接制约了建筑行业税收征管工作的开展。

所收集数据采用SPSS 18.00进行数据处理。计数资料以率表示，采用χ2检验及Fisher精确概率法。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 宫颈癌、CIN及正常宫颈组织标本HPV16、HPV18的表达情况之间的差异

HPV16、HPV18及Aurora激酶在正常宫颈组织中的表达情况较低，HPV16、HPV18在宫颈癌中表达情况最高，CIN中表达其次，差异具有统计学意义（P＜0.05）。Aurora激酶A在宫颈癌组织标本存在高表达，Aurora激酶 B 高表达与肿瘤的恶性侵袭相关，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2 宫颈癌细胞中Aurora激酶的表达情况

观察组宫颈癌细胞中Aurora激酶A表达率（40.00%）、Aurora激酶B表达率（33.33%）明显低于对照组（86.67%、93.33%），差异具有统计学意义（χ2=5.167 5、9.186 6，P=0.023 0、0.002 4）。

2.3 宫颈癌细胞在Aurora激酶的表达与否情况下的增殖率、凋亡率

对宫颈癌患者采取Aurora激酶抑制剂VX-680或采用标本用化疗药物顺铂进行治疗后，癌细胞的增殖率显著下降、凋亡率显著升高，Aurora激酶未表达组癌细胞增殖率低于表达组、凋亡率高于表达组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

3 讨论

3.1 宫颈癌、CIN及正常宫颈组织标本HPV16、HPV18的表达情况之间的差异

我市女性人口比例很大，宫颈癌是女性生殖系统第二大恶性肿瘤，近年来其发病呈年轻化趋势。每年有近50万新发病例，宫颈癌的发生发展是一个复杂的过程，癌变发展的危险性随着CIN的发展而升高[5]。有研究显示[6]，宫颈癌变患者的Aurora激酶存在明显DNA扩增，Aurora激酶与宫颈癌发病机制具有一定联系。

研究结果显示，HPV16、HPV18及Aurora激酶在正常宫颈组织中的表达情况较低，HPV16、HPV18在宫颈癌中表达情况最高，CIN中表达其次，差异具有统计学意义（P＜0.05）。Aurora激酶A在宫颈癌组织标本存在高表达，Aurora激酶B高表达与肿瘤的恶性侵袭相关，差异具有统计学意义（P＜0.05）。Aurora激酶A、Aurora激酶B作为Aurora激酶家的成员，在不同的模式生物中，结构和功能高度保守。近年来，随着极光激酶相关研究的不断深入，人们逐渐认识到极光激酶在细胞有丝分裂以及肿瘤形成中的重要功能[7]。在细胞有丝分裂中, 极光激酶参与了诸如中心体成熟分离、纺锤体组装和维持、染色体分离以及胞质分裂等多个事件[8]。通过本次研究，用数据证明Aurora激酶A、B在宫颈癌组织中高表达情况，这将成为宫颈癌早期诊断的生物学指标。通过Aurora激酶A、B在宫颈癌组织中表达情况，结合目前现有HPV检测，这不但有效提高了宫颈癌的早期诊断率，还可产生检验收益[9]。

3.2 宫颈癌细胞在Aurora激酶的表达与否情况下的增殖率、凋亡率

本研究对宫颈癌患者采用Aurora激酶抑制剂VX-680或化疗药物顺铂治疗后，流式细胞仪分析结果显示癌细胞的增殖率显著下降、凋亡率显著升高，其中Aurora激酶的表达与否对癌细胞的增殖与凋亡情况有所影响，显示通过抑制Aurora激酶表达与顺铂治疗，可以加速宫颈癌细胞的凋亡，这为临床开发新的宫颈癌治疗手段提供新的思路[10]。

综上所述，Aurora激酶在女性宫颈癌细胞中存在显著高表达的现象,属于一种新的癌基因。通过对宫颈癌患者采用Aurora激酶抑制剂VX-680或化疗药物顺铂治疗后，宫颈癌的增殖率显著下降、凋亡率显著升高，这为临床开发新的宫颈癌治疗手段提供新的思路。

[1] 苏青，杨瑾，许璐洁，等． 宫颈上皮内瘤变427例临床病理分析[J]．陕西医学杂志，2016，45（10）：1402-1403，1406．

[2] Elit LM，Hirte H． Management of advanced or recurrent cervical cancer: chemotherapy and beyond[J]． Expert Rev Anticancer Ther，2014，14（3）：319-332．

[3] 刘晶，黄照权． Aurora 激酶在肿瘤中的作用研究进展[J]． 华夏医学，2016，29（5）：118-121．

[4] 梁指荣，杨洁飞，苏锡康． 多种肿瘤标记物检测在宫颈癌诊治中的意义[J]． 国际检验医学杂志，2016，37（1）：21-23．

[5] Takagi M，Sakatmoto T，Suzuki R，et al． Plant aurora kinases interact with and phosphorylate transcrition factors[J]． J Plant Res，2016，129（6）：1165-1178．

[6] 滑芳，李琴，宋菲菲，等． Aurora A激酶抑制剂VX-680对人宫颈癌细胞化疗敏感性的影响[J]． 山东医药，2014，54（41）：11-13．

[7] Gavriilidis P，Giakoustidis A，Giakoustidis D． Aurora kinases and potential medical applications of aurora kinase inhibitors：a review[J]．J Clin Med Res，2015，7（10）：742-751．

[8] 滑芳，谢磊，李义飞，等． 宫颈癌和癌前病变中 Aurora A 表达及与 HPV16 感染的关系[J]． 中国现代医学杂志，2013，23（35）：38-41．

[9] 闫洁，付敏，梁慧，等． Aurora-A、MCM7及HPV16E7在子宫颈上皮内瘤变和子宫颈鳞癌中的表达及意义[J]． 徐州医学院学报，2015，35（2）：85-89．

[10] D'Assoro AB，Liu T，Quatraro C，et al． The mitotic kinase Aurora--a promotes distant metastases by inducing epitihelial-tomesenchymal transition in ERα(+) breast cancer cells[J]． Oncogene，2014，33（5）：599-610．

Study on the Pathogenesis of Aurora Kinases in Cervical Cancer

XIAO Jinjun Shenzhen Xili People's Hospital of Nanshan District, ShenzhenGuangdong 518000, China

Objective To investigate the expression of Aurora kinase A and B in normal cervical tissues, CIN and cervical cancer tissues, and to explore the role of Aurora kinase A and B in the genesis and development of cervical carcinoma. Methods A total of 30 patients with cervical cancer in Shenzhen were selected, and a total of CIN patients in our hospital in were selected, and a total of 30 patients with cervical cancer were enrolled in this study. Fluorescence quantitative method was used to detect the expression of Aurora kinase A and B in different cervical tissues and the relationship with HPV16, HPV18 infection. The FCM analysis of 30 cases of patients with cervical cancer tissue specimens of Aurora kinase A, B expression and the expression of cell proliferation rate, apoptosis rate, and for patients with cisplatin was observed after treatment of cancer cell proliferation rate, apoptosis rate. Results The expression of HPV16, HPV18 and Aurora kinase in normal cervical tissues. The low expression of high HPV16 and HPV18 in cervical cancer, the expression rates were 96.67%, 100.00%, followed by the expression of CIN, expression rates were 66.67%, 70.00%, accounting for about 70% of the left and right type of cancer, the difference was statistically significant (P＜ 0.05). Aurora kinase A was highly expressed in cervical cancer tissues, and the high expression of Aurora kinase B was associated with malignant invasion of tumor. The difference was statistically significant (P ＜ 0.05). The expression of Aurora kinase A and Aurora kinase B in cervical cancer cells in the observation group was significantly lower than that in the control group, the difference was statistically significant (P＜ 0.05). For patients with cervical cancer by Aurora kinase inhibitor VX-680 or cisplatin treatment, cancer cell proliferation rate decreased significantly, the apoptosis rate was significantly increased, Aurora kinase expression group not cancer cell proliferation rate is lower than the expression group, apoptosis rate was higher than that of group, the differences were statisticallysignificant (P＜ 0.05). Conclusion Aurora kinase significantly high expression of the phenomenon in women cervical cancer cells, the cervical cancer patients with Aurora kinase inhibitor VX-680 or cisplatin treatment, cervical cancer cell proliferation rate decreased significantly, the apoptosis rate was significantly increased.

aurora kinase; HPV; cervical cancer

R361

A

1674-9316（2017）08-0122-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．08．075

广东省深圳市南山区资助科技计划区属事业单位研发项目（2015055）

深圳市南山区西丽人民医院妇产科，广东 深圳 518000