柳州地区成人血清和尿中淀粉酶生物参考区间的建立

靳华+蒙雨明

摘要：目的 以本实验室血清淀粉酶（AMY）和尿淀粉酶生化项目为例，探讨建立适合本实验室的生物参考区间的方法。方法 应用美国临床实验室标准化研究院（CLSI）C28-A2文件推荐方法，结合IS015189：2003（E）《医学实验室--质量和能力的专用要求》条款要求，同时参考试剂生产厂家的说明书、权威书籍期刊或转移其他医院实验室的生物参考区间，进行验证，验证不通过的项目。收集本地区120例健康成人参考个体建立适用于本实验室的生物参考区间，定期进行临床评审。结果 血清以及尿AMY现用生物参考区间验证未通过验证，须自行建立生物参考区间。血清AMY自建生物参考区间为39-152U/L，尿AMY自建参考区间：男性56～897 U/L，女性34～758 U/L。结论 采用本研究方法建立实验室生物参考区间能确保生物参考区间符合临床要求，结果可靠、准确。方法科学、实用。

关键词：血清淀粉酶；尿淀粉酶；成人；参考区间；建立

Abstract：Objective To explore a suitable method for our laboratory to establish the biological reference interval，taking serum amylase （AMY） and urine amylase as examples. Methods According to the items of ISO15189：2003（E） "the medical laboratory- The quality and the ability of special-purpose"and the methods recommended by （CLSI） C28-A2， a reference reagent manufacturers instructions， or transfer authority books ，other hospital laboratories biological reference interval， then experimental verification，when validation project is not passed， collected 120 healthy adult individuals in the region establish reference applicable to the biological laboratory reference intervals， regular clinical assessment. Results Serum AMY and urinary AMY active biology reference interval validation does not pass， must establish a new biology reference.The new serum AMY interval was 39-152U / L， the urine AMY interval was： male 56-897 U / L， female 34-758 U / L. Conclusion The study established clinical laboratory methods can effectively guarantee the biological reference interval test indicators of biological reference intervals reliable， accurate， scientific， practical， biological reference intervals to ensure compliance with clinical requirements.

Key words：Serum amylase；Urine amylase；Adult；Biology reference interval；Establishement

生物參考区间是解释检验结果分析检验信息的一个基本尺度和依据[1]。实验室给临床提供检验项目可靠的生物参考区间，才能使临床对患者或健康体检者的诊断治疗有明确的指引[2]。我国目前所使用的参考区间大多来自教科书和试剂盒说明书，这些参考区间大多源自国外二三十年前对白种人的研究。由于不同地区的人群在遗传学、生活环境和饮食习惯上都存在差异，所以这些建立在白种人体系上的参考区间在我国应用时可能在某些项目上存在一定的偏差。为此国际临床化学和检验医学联合会（International Federation of Clinical Chemistry，IFCC），建议每个临床实验室都能建立符合本地人群特征的参考区间，或者至少能够验证由其他途径获得的参考区间[3]。ISO15189中明确要求，应定期评审生物参考区间[4] 。美国临床实验室标准化研究院 （Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）亦指出每个实验室应该建立自己的参考区间[5]如验证现有参考区间不再适用，应采取纠正措施。在我科执行ISO15189认可的过程中，我们结合ISO15189条款要求和美国临床实验室标准协会CLSI C28-A2文件[6]推荐方法，建立一个适合本实验室的生物参考区间，保证生物参考区间的可靠、适用，为临床提供准确的诊治依据。

1资料与方法

1.1一般资料

1.1.1验证样本 以IFCC推荐方法收集2011年7月～9月360例健康参考个体样本，均来源于我院体检中心健康体检者。所有入选者均排除胰腺炎、腮腺炎等引起淀粉酶异常的相关疾病，近期无手术，未服用药物，采样前一天受检者无饮酒及剧烈运动，空腹采样。其中男性180例，年龄21岁～63岁，平均年龄40岁，女性180例，年龄20～59岁，平均年龄38岁。

1.1.2检测仪器试剂 罗氏公司P800生化分析仪、罗氏诊断公司配套试剂、校准品、质控品。

1.1.3质量控制 仪器通过性能验证，检测中应用罗氏低值与高值质控品对样本分析进行质量控制，检测系统正常。

1.2方法

1.2.1检测20例样本，检测结果95%在现用的参考区间之内，即20例中有19例在范围内，只有5%，即1例结果在参考区间之外，则说明现用参考区间有效。如果有大于2例检测数据在参考区间之外，则可进一步进行建立生物参考区间实验。

1.2.2继续收集至120例健康参考个体，测得结果后进行离群值的判断。可通过1/3规则进行判断。疑似离群值和其相邻位置数值的差值（D）和数据全距（R）相除，D与R的比值应≤1/3，如>1/3则该点考虑为离群点。如有2个或以上疑似离群值，若比值>1/3，则所有结果都不应保留；如比值<1/3，则可保留所有数据。当有离群值去除后，可将其他数据补足。

1.2.3绘制直方图 可直接观察数据的分布特征。此时可运用百分位数法确定改组数据2.5%和97.5%位数的参考限，从而建立参考区间。在获取与分析对象标本前，需要考虑到为对象中亚组建立独立区间的可能性。当有足够的临床证据证明以及具备生理学意义时，才需要为性别或者不同年龄组分别建立独立的参考区间。z检验公式：

式中n1和n2分别为各自亚组中参考值的数目，x1和x2是两个亚组观测值的均值，s1和s2为两组的标准差。通过计算z值判断是否需要分组：如标准差s2为较大s，应检查它是否>1.5倍的s1，即s2/（s2-s1）是否>3。若计算z值超过z*值或较大s2>1.5 s1，则都须考虑分组。

1.2.4 ISO15189中要求临床实验室建立参考区间后应联系临床医生提供在实际临床工作中对于此项目的意见，至少一年定期进行评审一次，便于发现问题，持续改进。

2结果

2.1应用CLSI C28-A2文件推荐方法，对20例健康参考个体进行验证，检测结果超出现用采用试剂说明书的参考区间，显示现用AMY生物参考区间不适用，见表1。

按CLSI C28-A2文件要求，收集120健康参考个体。结果见表2，表3，表4。结合观察图1、图2、图3，

从图1、图2可看出血清AMY、男性尿AMY分布大致呈正态分布，而图3女性尿AMY分布呈右偏态分布，对三组数据采用百分位数法确定2.5%和97.5%位数的参考限，经计算取第3和118位数值，得出血清AMY参考区间为：39～152U/L，尿AMY：男56～852 U/L，女 38～716 U/L。

2.2本例3组数据经观察计算未发现离群值。

2.3查询试剂说明书和文献资料显示[7]，同时临床证据显示血清AMY不存在明显的生物差异。则该项目不无需作z检验确定分组。而尿AMY要按性别分组计算参考区间。本例中每组参考个体数为120，则临界值z*=3，将表3、表4数据带入计算z=6.09>z*=3，所以尿AMY需按性别分组分别统计。

3讨论

近年来，随着各种全自动生化分析仪器的普及应用，大大提高了检验速度与精确性，但对于各项目的参考区间我们却还多是沿用試剂厂商提供的或是《全国临床检验操作规程》及教科书上的，未考虑到民族及地域、性别、年龄等差异，而在柳州地区，对本地区的生化项目的参考区间的研究极少，亟需对本地区进行多项目的参考区间调查。本实验室对血清AMY和尿AMY现用生物参考区间进行验证，验证不通过，需重新建立区间。原用参考区间血清AMY：28～100 U/L，男性尿AMY：16～491 U/L，女性尿AMY：21～447 U/L。其中对于尿AMY通过参阅相关文献和临床效用需按性别分组，进行z-检验也支持分组。新建立参考区间血清：39～152 U/L男性尿AMY：56～897 U/L，女性尿AMY：34～758 U/L，两者差异明显。造成结果差异的因素是多方面的，方法学的不同，研究人群的地域、民族、生活习惯等不同可能导致了本研究结果的不同。血清和尿AMY在临床常用于胰腺炎和急腹症的诊断，其值对于胰腺炎的发病时间和其他急腹症的鉴别诊断有较大参考价值。这时为临床提供准确适用的参考区间则相当重要，如果参考区间不准确，会给临床医生带来困惑，导致漏诊误诊，延误治疗，甚至造成严重后果，由此可见实验室建立生物参考区间工作意义重大。对于尿AMY在一定程度上会受到采样范围和参考个体尿量的影响，如有必要，应建立使用相同检测系统的多中心参考区间[8]，以期将干扰因素减少。同时，依据ISO15189要求我们也定期邀请临床医生进行临床评审，综合临床资料获取对相关疾病的最新诊治讯息以弥补检验科单方建立参考区间的不足。本研究调查了柳州地区健康成年人群血清和尿AMY参考值水平，并建立参考区间，至今临床反映良好，该方法实用科学。当然本地区的自然环境和人们生活饮食习惯也在不断的变化当中，建立参考区间将是一项长期工作，还需不断的加大样本量，累积数据，尽可能排除影响因素，经过一系列科学的评估才能更具地域代表性，更适用于当地人群。

参考文献：

[1]魏有仁.参考值的几个基本问题[J].中国实验诊断学，1997，1（1）：44-46.

[2]冯仁丰.临床检验质量管理技术基础[M].上海：上海科技文献出版社，2004：136.

[3]曾洁，陈文祥，申子瑜.参考区间研究现状概述[J].中华检验医学杂志，2010，33（6）：570-573.

[4]ISOl5189：2003（E）.医学实验室--质量和能力的专用要求[S].

[5]Insitiute CALS.Defining，establishing，and verifying reference intervals in the clinical laboratory；approved guideline[M].3 rd ed.Wayne：Clinecal and Laboratory S tandards Institute，2008.

[6]Clinical and Laboratory Standards Institute.How to Define and Reference Intervals in the Clinical Laboratory[S].Wayne，PA：C28-A2，CLSI，2000.

[7]叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京：东南大学出版社，2006：11.

[8]钟堃，王治国，王薇.采用多中心相同检测系统建立人体参考区间[J].中华检验医学杂志，2010，33（8）：790-792.编辑/申磊