龙脷叶提取物的抗氧化活性研究

陆秋娜++李兆叠++郑鸿娟++黄春阳++齐梁煜++黄月维++黄锁义

摘要：通过采用清除DPPH·和Fe3+还原力的不同体外抗氧化模型，根据试验结果评价龙脷叶乙酸乙酯提取物和乙醇提取物的体外抗氧化活性。结果表明，龙脷叶乙酸乙酯提取物和乙醇提取物对DPPH·均具有较强的清除作用，乙酸乙酯提取物的半数抑制浓度（IC50）为1.387 mg/mL，乙醇提取物的IC50为0.349 mg/mL。提取物均对Fe3+有还原能力，且随着提取液浓度的提高而增强，呈剂量效应关系。

关键词：龙脷叶；提取物；抗氧化活性

中图分类号：R282.71 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）01-0089-02

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.01.022

Investigation of Antioxidant Activity of Sauropus spatulifolius Beille Extract

LU Qiu-na1a，LI Zhao-die1a，ZHENG Hong-juan1a，HUANG Chun-yang1a，

QI Liang-yu1a，HUANG Yue-wei1a，HUANG Suo-yi1b，2

（1a.College of Clinical Medicine；1b. College of Pharmacy，Youjiang Medical University for Nationalities，Baise 533000，Guangxi， China；

2.Key Laboratory of Guangxi Universities on National Medicine in Youjiang River Basin，Baise 533000，Guangxi， China）

Abstract：Aiming to investigate antioxidant activity of ethyl acetate extract and alcohol extract of Sauropus spatulifolius Beille， clearing ability of the extracts on DPPH· and reduction of Fe3+ were measured to evaluate its antioxidant activity. The results showed that，ethyl acetate extract and alcohol extract of S. spatulifolius Beille had strong scavenging effects on DPPH· free radical，half inhibitory concentrations （IC50） of ethyl acetate extract was 1.387 g/L，while IC50 of alcohol extract was 0.349 g/L. The two extracts all had the reduction ability on Fe3+，the effects increased with the increasing of extract concentration，which showed corresponding does-response relationship.

Key words： Sauropus spatulifolius Beille； extract； antioxidant activity

龍脷叶为大戟科植物龙脷叶（Sauropus spatulifolius Beille）的干燥叶[1]，主要产于中国云南、四川、广东和广西等地。文献报道龙脷叶中主要含有单萜、倍半萜、香豆素、黄酮苷等多种生物活性成分[2]。龙脷叶常用于治疗上呼吸道炎症引起的咳嗽、咽痛、急性支气管炎等症[3]。

龙脷叶是中国药典2010年版一部收载品种，正文中暂无含量测定项，目前关于龙脷叶的薄层色谱鉴别[4]和挥发油的气-质联用分析[5]已有报道，但还暂无龙脷叶的抗氧化性研究，为了龙脷叶的开发和利用，本试验采用清除DPPH·和Fe3+还原力的不同体外抗氧化模型，比较龙脷叶乙酸乙酯提取物和乙醇提取物的不同抗氧化活性。评价龙脷叶这两种提取物的抗氧化活性，以期进一步优化龙脷叶的综合利用价值，为加快龙脷叶药品的临床应用和开发新型功能食品提供依据。

1 材料与方法

1.1 原料与试剂

龙脷叶购自广西百色市，经右江民族医学院民族医学教研室覃道光副教授鉴定，粉碎后备用。

乙酸乙酯、无水乙醇、DPPH（美国Signe公司）、盐酸、磷酸盐缓冲液、铁氰化钾、三氯乙酸（TCA）和三氯化铁等试剂均为分析纯，试验用水为蒸馏水。

1.2 仪器

高速万能粉碎机（FW100）（天津泰斯特仪器有限公司）；电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；电热式恒温水浴锅HHS-21-4（江苏金坛宏凯仪器厂）；SHZ-D（III）循环水式多用真空泵（巩义市子华仪器有限公司）；FA1204B电子天平（上海天美天平仪器有限公司）；752N紫外可见分光光度计（上海精科实业有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 龙脷叶提取物的制备 称取龙脷叶干燥粉末50 g，分别加入10倍量蒸馏水或75%的乙醇室温浸泡1 h，加热回流提取2 h，抽滤取滤液，旋转蒸发除去溶剂，烘干制成浸膏。称定质量，分别用相应溶剂稀释成不同浓度的龙脷叶乙酸乙酯提取液和乙醇提取液。

1.3.2 清除DPPH自由基能力测定[6] 取5支10 mL具塞比色管，各加入新配制的6×10-4 mol/L DPPH溶液0.5 mL，分别加入不同质量浓度的样品溶液 1.0 mL，混匀后用无水乙醇定容至10 mL，室温下暗光反应30 min，以无水乙醇调零，在517 nm处测定其吸光度（A），平行3次。按下式计算清除率。

清除率=[（A1-A2）/A1]×100%，式中，A1为空白吸光度（t=0）；A2为反应30 min后吸光度。

1.3.3 还原Fe3+的能力测定[7] 在10 mL具塞比色管中依次加入浓度为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL的样品液2.5 mL，0.2 mol/L磷酸盐缓冲液（pH 6.6）和1%铁氰化钾各2.5 mL，混匀后置于50 ℃水浴中反应20 min，加入10%三氯乙酸溶液2.5 mL，混匀，如溶液浑浊则离心（3 000 r/min离心10 min），取上清液2.5 mL，加蒸馏水2.5 mL和0.1%三氯化铁溶液2.5 mL，混匀，静置10 min，以相应试剂为参比，于700 nm处测定吸光度（n=3）。

2 结果与分析

2.1 清除DPPH自由基能力

以自由基清除率为50%时样品的浓度（IC50）来衡量样品对自由基的清除能力。IC50越小，表明样品清除自由基的能力越强。结果见表1和图1，结果表明龙脷叶提取物对DPPH自由基具有一定的清除能力，且乙醇提取物的清除率优于乙酸乙酯提取物。

2.2 还原Fe3+的能力测定结果

结果见图2，得龙脷叶乙酸乙酯提取物和乙醇提取物清除羟基自由基的回归方程分别为y=0.269x+0.058 1（R2=0.991 7），y=0.457 x+0.040 3（R2=0.988 2），提示龙脷叶不同提取液对还原Fe3+均具有较强的能力，且乙醇提取物还原能力优于乙酸乙酯提取物。

3 小结

通过对清除DPPH自由基作用和还原Fe3+能力的考察，证实龙脷叶提取物是一种有效的自由基清除剂，在消除自由基过程中使溶液中自由基数目减少，龙脷叶乙酸乙酯提取物和乙醇提取物均具有较强的抗氧化活性，且在相对低浓度下乙醇提取物的抗氧化作用总体比乙酸乙酯提取物强。在正常情况下，细胞内自由基的产生与清除处于动态平衡状态，随着年龄的增长，这种平衡逐渐遭到破坏，结果自由基的浓度超过了阈值，链式的自由基反应使得DNA、蛋白质尤其是多不饱和脂肪酸等大分子物质发生变性和交联，损伤细胞器、细胞膜等结构，导致生物体的氧化应激伤害，最终出现衰老与死亡[8]。由此，清除体内自由基、抗氧化是预防机体衰老及多种疾病的重要措施。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[2] 何 鹏，王国才，李药兰，等.高效液相色谱法测定龙脷叶中山柰酚-3-O龙胆二糖苷的含量[J].中南药学，2014，12（8）：811-813.

[3] 黄 燕，谭建宁，马雯芳.龙脷叶提取物体外抑菌活性初步研究[J].大众科技，2014，16（2）：68-70.

[4] 陈 珍.龙脷叶薄层色谱鉴别[J].科技風，2014（18）：197.

[5] 汪小根，邱蔚芬.龙脷叶挥发油的气-质联用分析[J].食品与药品，2007，9（5）：19-20.

[6] 李涂蓝，林明霞，黄锁义，等.薏苡茎总碱抗氧化性研究[J].中国野生植物资源，2013，32（6）：16-18.

[7] 林明霞，李涂蓝，潘冬贵，等.鸡骨草醇提物体外抗氧化自由基作用究[J].中国现代应用药学，2013，30（10）：1047-1050.

[8] FINKEL T. Signal transduction by reactive oxygen species[J].J Cell Biol，2011，194（1）：7-15.