铜仁珍珠花生中5种有机氯农药残留检测方法研究

安凤颖　张儒令　陶菡

摘要 为建立铜仁市地理标志特色农产品铜仁珍珠花生有机氯农药残留检测方法，2016年对铜仁珍珠花生中5种有机氯农药残留检测方法进行探索。珍珠花生样品经粉碎后经乙腈液液提取、浓缩、净化，采用气相色谱法-ECD检测器检测。结果表明：5种有机氯类农药添加浓度为0.005～5.000 mg/kg时，加标回收率为89.61%～107.03%，RSD为3.29%～20.03%。方法的添加回收率数据及RSD数据说明本试验方法的准确度、精密度均达到农药残留检测的要求。

关键词 珍珠花生；气相色谱法；有机氯农药；残留；贵州铜仁

中图分类号 TS207.5+3 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）03-0109-02

铜仁珍珠花生是贵州珍宝，2015年获得农产品地理标志保护。产自梵净山区的铜仁珍珠花生，颗粒小巧圆润、色泽红亮、味香浓郁，是历代皇家贡品。1991年上市贸易的花生达3 902 t，2015年达34 300 t，成为铜仁市出口农副产品中出口量较多的产品[1]。因此，铜仁珍珠花生中农药残留量检测对于保障人们饮食健康及铜仁市花生进出口贸易具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 主要仪器。气相色谱仪7890A，安捷伦科技（中国）有限公司；电子天平：FA/JA系列，上海越平科学仪器有限公司；旋转蒸发仪：RE-522AA，上海亚荣生化仪器厂；循环水式真空泵：SHZ-D （Ⅲ），上海亚荣生化仪器厂；调速多用振荡器：HY-4型，上海浦东物理光学仪器厂；氮吹仪：HP-5016SY，上海济成分析仪器有限公司；阿修罗系列超纯水机：AXLC1815-2，阿修罗科技发展有限公司；涡旋混合器：QL-901，江苏海门市麒麟医用仪器厂；烧杯、离心管、漏斗、滴管等分析常用玻璃仪器。

1.1.2 花生样品。2016年在碧江区12个村抽样74个珍珠花生样品，即随机选取农户进行购买。样品进行日光晒干，测定其水分含量。

1.2 提取剂选择

液液萃取法应用最为广泛，且成本低，提取效果良好。采用5种试剂（乙腈、甲醇、二氯甲烷、丙酮-正己烷、丙酮-石油醚）作为提取剂，进行优化。5种有机氯农药残留萃取中平均回收率：乙腈>二氯甲烷>丙酮-正己烷>丙酮-石油醚>甲醇；相对标准偏差平均值：丙酮-石油醚>丙酮-正己烷>二氯甲烷>乙腈。选择乙腈作为铜仁珍珠花生中有机氯农药残留的提取剂，平均回收率为100.15%，平均RSD为7.90%。

1.3 样品前处理

样品粉碎机粉碎均匀，电子天平称取10 g，加入50 mL乙腈提取液，组织匀浆3 min，加入1～3 g NaCl充分震荡，静置30 min以上（发生乳化现象可用离心机离心5～10 min），吸取上层清液10 mL入50 mL烧杯中，80 ℃恒温水浴通氮气蒸发至近干，加入2 mL正己烷。佛罗里硅土柱依次用5 mL正己烷+丙酮（90∶10）、5 mL正己烷预淋洗，用5 mL正己烷+丙酮（90∶10）重复1次转移至10 mL的比色管中，正己烷定容呈5 mL（大于5 mL用氮吹仪吹降5 mL以下），装瓶待测[2]。

1.4 固相萃取选择

5种有机氯农药残留净化处理平均回收率：SPE-Florisil>SPE-SIL>不处理>SPE-CARB/NH2>中性氧化铝>SPE-PSA；相对标准偏差平均值：SPE-CARB/NH2>SPE-PSA>不处理>SPE-SIL>中性氧化铝>SPE-Florisil。综合考虑，选择SPE-Florisil作为铜仁珍珠花生中有机氯农药残留的净化柱，处理平均回收率为98.44%，平均RSD为5.06%。

Florisil固相萃取容量在1 000 mg，6 mL时，净化效果明显，5种有机氯农药平均回收率为99.69%，平均RSD为7.88%，根据农药残留安全检测良好实验室标准选择5种有机氯农药残留净化处理为Florisil固相萃取容量在1 000 mg，6 mL较为理想[3]。

1.5 色谱柱选择

采用4根色谱柱HP-5、HP-35、DB-1、DB-1701不同極性、不同填料的柱子，对10种混合农药进行分离，选择峰型分离较好、峰面积以及峰高较好的作为色谱分析柱。花生样品中氯氰菊酯浓度0.06 mg/kg、百菌清浓度0.032 mg/kg、甲氰菊酯浓度0.01 mg/kg、三氯杀螨醇浓度0.01 mg/kg、三唑酮浓度0.032 mg/kg时，检测可选择HP-5或HP-35作为分析柱，峰面积和峰高区别不大[4-5]。

1.6 仪器条件选择

仪器检测条件的其他优化：进样温度、检测器温度、分流比等条件优化，适当调整，直到得出峰形分离较好，峰面积大，峰高较好，作为铜仁珍珠花生农药残留检测色谱分析条件。

有机氯农药标准品随进样口温度升高保留时间均提前，但变化不明显；出峰面积与进样口温度升降无明显关系，5种有机氯农药在进样口温度为200 ℃时，峰面积最大。综合5种农药出峰面积与保留时间，选择进样口温度为200 ℃，可以保证5种有机氯农药分离度较好。

5种有机氯农药农药标准品随检测器温度升高保留时间均提前，但变化不明显；出峰面积与检测器温度升降无明显关系，5种有机氯农药在进检测器温度为320 ℃时，峰面积最大。根据5种农药出峰面积与保留时间，选择检测器温度为320 ℃，可以保证5种有机氯农药分离度较好。

5种有机氯农药标准品保留时间与分流比上升无明显关系，分流比为50∶1时，分离效果较好，峰面积最大，保留时间也较短，选择分流比为50∶1作为有机氯农药气相分离条件。

1.7 色谱条件

安捷伦7890A，检测器u-ECD；色谱柱：HP-5柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm）或者HP-35（30 m×0.32 mm×0.25 μm）；进样口温度200 ℃；载气：氮气 （纯度99.999%），流速1 mL/min；辅助气：氮气（纯度99.999%），流速60 mL/min，进样体积1.0 μL；检测器温度320 ℃。分流进样，分流比50∶1。

2 结果与分析

2.1 方法灵敏度考察

分析方法的灵敏度是指该方法对单位浓度或单位质量的待测物质的变化所引起的响应量变化的程度，通常以方法的最低检出浓度（LOQ）表示。最低检出浓度是指用添加方法能测出待测物在样品中的最低含量（以mg/kg为单位表示），要求低于或等于该农药在该种作物上的最大残留限量（MRL）值即可。5种农药添加最低检测出限和线性关系如表1所示。氯氰菊酯、三唑酮、百菌清、三氯杀螨醇、甲氰菊酯的最低检出浓度分别为0.004 5、0.001 2、0.003 2、0.008 0、0.001 5 mg/kg，均低于相应最大残留限量。

2.2 方法准确度的考察

准确度是指分析结果与假定的真值之间相符合的程度。它反映的是分析方法或测定系统存在的系统误差和随机误差的综合指标。在农药残留分析时，评价准确度的方法常常使用添加回收率来表征。铜仁珍珠花生添加农药回收率如表2所示，可以看出，氯氰菊酯在添加浓度0.005、0.050、0.500 mg/kg时，添加回收率分别为95.75%、102.55%、90.25%。三唑酮在添加浓度0.020、0.200、2.000 mg/kg时，添加回收率分别为94.72%、97.01%、100.90%。百菌清在添加浓度0.005、0.050、0.500 mg/kg时，添加回收率分别为89.61%、99.29%、98.96%。三氯杀螨醇在添加浓度0.050、0.500、5.000 mg/kg时，添加回收率分别为95.36%、107.03%、91.27%。甲氰菊酯在添加浓度为0.010、0.100、1.000 mg/kg时，添加回收率分别为96.04%、94.38%、106.06%。

3 结论

建立铜仁市地理标志特色农产品铜仁珍珠花生中5种有机氯农药残留检测方法，经过考察方法的灵敏度、准确度都达到了农药残留检测的要求，可以作为铜仁珍珠花生中敌敌畏、乐果、杀螟硫磷、倍硫磷、毒死蜱农药残留检測方法。

4 参考文献

[1] 铜仁市2015年国民经济和社会发展情况[R/OL].（2016-04-25）[2016-11-11].http：//www.tjch.org/tigb/201604/32875.html.

[2] 农业标准出版研究中心.蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定：NYT 761-2008[S].北京：中国农业出版社，2010.

[3] 岳永德，朱鲁生.农药残留分析[M].北京：中国农业出版社，2004.

[4] 马金凤，刘雪，赵志强，等.凝胶渗透色谱-气相色谱质谱法测定花生中6种除草剂农药残留[J].化学分析计量，2012（4）：43-46.

[5] 朱臻怡，冯民，何健，等.固相萃取-气相色谱法同时测定花生中18种有机氯农药残留[J].化学分析计量，2010（1）：19-22.