广西地区原发性肝癌患者血清微囊藻毒素-LR水平研究

胡新梅，农清清*，赵惠柳，廖 娟，朱雪凤，李江恒，费梦雪，贾雪姣

·论著·

广西地区原发性肝癌患者血清微囊藻毒素-LR水平研究

胡新梅1，2，农清清1，2*，赵惠柳3，廖 娟1，朱雪凤1，李江恒1，费梦雪1，贾雪姣1

目的 探讨广西地区原发性肝癌患者血清微囊藻毒素-LR(MC-LR)的水平及其相关影响因素。方法 选取2014年12月—2016年6月广西医科大学附属肿瘤医院收治的来自广西地区的144例原发性肝癌患者作为肝癌组，另选取同期本院体检健康者158例作为对照组。调查两组一般人口学特征、日常生活方式、饮食习惯等，并采集静脉血，采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清乙型肝炎病毒(HBV)感染标志物，包括乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎核心抗体(HBcAb)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗体(HBeAb)，以及MC-LR水平和谷胱甘肽(GSH)含量。结果 肝癌组血清MC-LR水平为(0.078±0.039)μg/L，高于对照组的(0.061±0.041)μg/L(t=3.351，P<0.01)。肝癌组和对照组中不同性别、年龄、民族、HBsAg阳性、吸烟、饮酒情况者血清MC-LR水平比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；对照组中不同HBV感染者血清MC-LR水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；肝癌组和对照组中不同食鱼生、沟塘水饮用史者血清MC-LR水平比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。肝癌组GSH含量为(9.1±5.1)μg/L，低于对照组的(15.2±8.1)μg/L(t=-6.899，P<0.001)。按照对照组血清MC-LR的中位数(0.042 μg/L)进行暴露程度分层，肝癌组低暴露和高暴露人群GSH含量比较，差异无统计学意义(t=-1.290，P=0.200)；对照组低暴露人群GSH含量高于高暴露人群(t=2.090，P=0.038)。结论 广西地区原发性肝癌患者血清MC-LR水平高于健康人群，GSH含量低于健康人群。MC-LR高暴露的健康人群血清GSH含量低于MC-LR低暴露人群。食用鱼生、长期饮用沟塘水可升高血清MC-LR水平。

肝肿瘤；微囊藻毒素类；谷胱甘肽

肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，1964年、1990年和2000年中国人口肝癌标化死亡率分别为22.17/10万、26.59/10万和32.21/10万，广西肝癌粗死亡率为34.39/10万(男性和女性分别为55.30/10万和13.21/10万)[1]，南宁地区肝癌死亡率高达48.13/10万[2]，已经严重威胁我国居民的生命健康。肝癌的发生、发展受多种因素的影响，俞顺章等[3]将微囊藻毒素(MC)、肝炎病毒和黄曲霉毒素列为我国南方原发性肝癌高发的三大环境危险因素。MC具有强烈的肝毒性，有80多种同分异构体，其中MC-LR毒性最大，研究最广[4]。因此，本研究通过测定广西地区原发性肝癌患者血清MC-LR水平，初步探索MC-LR与原发性肝癌发生的关系，为广西地区原发性肝癌的防治提供依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2014年12月—2016年6月广西医科大学附属肿瘤医院收治的来自广西地区的144例原发性肝癌患者作为肝癌组，其均经病理、临床诊断确诊。原发性肝癌诊断标准：(1)病理诊断：肝组织学检查证实为原发性肝癌；肝外组织的组织学检查证实为肝癌。(2)临床诊断：如无其他肝癌证据，甲胎蛋白(AFP)对流法阳性或放射免疫法≥400 μg/L，持续4周以上，并排除妊娠、活动性肝病、生殖腺胚源性肿瘤及转移性肝癌；影像学检查有明确肝内实质性占位病变，排除肝血管瘤和转移性肝癌，并具有下列条件之一：①AFP≥200 μg/L；②典型的原发性肝癌影像学表现；③无黄疸而碱性磷酸酶或谷氨酰转肽酶明显增高；④远处有明确的转移性病灶或有血性腹腔积液，或腹腔积液中发现癌细胞；⑤明确的乙型肝炎阳性的肝硬化[5]。排除复发患者以及放、化疗后患者。同期选取本院体检健康者158例作为对照组。所有研究对象在同一地区居住10年以上，且均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 一般情况调查 研究对象按照统一的自制表格，由经过培训的调查员，采用面访的调查方式按照调查表内容逐一询问，填写表格。调查内容包括：一般人口学特征、日常生活方式、饮食习惯等。其中，曾饮用沟塘水10年以上为“沟塘水饮用史”。所有研究对象隔夜空腹抽取肘静脉血5 ml，不抗凝，待血液凝固后，于4 ℃、以3 000 r/min离心10 min，离心半径为18.5 cm，分离血清后保存于-80 ℃，待检。

1.2.2 实验室检查

1.2.2.1 乙型肝炎病毒(HBV)感染标志物的检测 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清HBV标志物，包括乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎核心抗体(HBcAb)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗体(HBeAb)。试剂盒购自上海荣盛生物药业有限公司，操作步骤按照试剂盒说明书进行。

1.2.2.2 血清MC-LR水平及谷胱甘肽(GSH)含量的检测 采用ELISA检测血清MC-LR水平以及GSH含量。MC-LR检测试剂盒购自美国Beacon公司，GSH检测试剂盒购自南京建成生物科技有限公司，操作步骤均按照试剂盒说明书进行。

2 结果

2.1 一般资料 肝癌组男125例，女19例；年龄25～83岁，平均年龄(49.6±9.3)岁，≤30岁3例，31～40岁20例，41～50岁55例，51～60岁51例，≥61岁15例。对照组男126例，女32例；年龄21～71岁，平均年龄(48.3±9.2)岁，≤30岁7例，31～40岁20例，41～50岁60例，51～60岁63例，≥61岁8例。两组性别、年龄构成比较，差异均无统计学意义(χ2=2.674、4.477，P>0.05)。

2.2 两组HBV感染标志物阳性率比较 肝癌组HBsAg阳性率为85.42%(123/144)，高于对照组的10.76%(17/158)，差异有统计学意义(χ2=168.860，P<0.01)。肝癌组HBV感染(包括HBsAg、HBsAb、HBcAb、HBeAg、HBeAb任一阳性)率为100.00%(144/144)，高于对照组的45.57%(72/158)，差异有统计学意义(χ2=99.964，P<0.01)。

2.3 两组血清MC-LR水平比较 肝癌组血清MC-LR水平为(0.078±0.039)μg/L，高于对照组的(0.061±0.041)μg/L，差异有统计学意义(t=3.351，P<0.01)。

2.4 不同人口学资料对血清MC-LR水平的影响 肝癌组和对照组中不同性别、年龄、民族、HBsAg阳性、吸烟、饮酒情况者血清MC-LR水平比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；对照组中不同HBV感染者血清MC-LR水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；肝癌组和对照组中不同食鱼生、沟塘水饮用史者血清MC-LR水平比较，差异均有统计学意义(P<0.05，见表1)。

表1 不同人口学资料对血清MC-LR水平的影响±s，μg/L)

注：a为F值；-为无此数值；MC-LR=微囊藻毒素-LR，HBsAg=乙型肝炎表面抗原，HBV=乙型肝炎病毒

2.5 两组血清GSH含量比较 肝癌组GSH含量为(9.1±5.1)μg/L，低于对照组的(15.2±8.1)μg/L，差异有统计学意义(t=-6.899，P<0.001)。

2.6 按MC-LR暴露程度分层后肝癌组与对照组GSH含量的比较 MC-LR暴露程度按照对照组血清MC-LR的中位数分为低暴露(MC-LR<0.042 μg/L)和高暴露(MC-LR≥0.042 μg/L)。肝癌组中低暴露(n=34)人群GSH含量为(7.9±4.2)μg/L，高暴露(n=110)人群GSH含量为(9.7±5.5)μg/L，两者比较，差异无统计学意义(t=-1.290，P=0.200)。对照组中低暴露(n=79)人群GSH含量为(16.2±6.7)μg/L，高于高暴露(n=79)人群的(14.1±9.3)μg/L，差异有统计学意义(t=2.090，P=0.038)。

3 讨论

根据全国死因调查显示，我国恶性肿瘤病死率逐年上升。全世界每年约50万人因肝癌死亡，我国每年约为12万人[6]。21世纪初，广西肝癌粗死亡率为34.39/10万，自20世纪70年代以来，广西肝癌死亡率一直占据本地区恶性肿瘤的首位[7]，成为威胁广西居民身体健康的主要因素之一。过去认为，原发性肝癌的发生与肝炎病毒感染、黄曲霉毒素的摄入有关[3]。近年来研究发现，原发性肝癌的发生可能也与饮用水中的MC污染有关[8]。MC是由生长于富营养化水体中的铜绿微囊藻、水华鱼腥藻、颤藻等产生的一组具有肝脏毒性的单环多肽毒素，其中以MC-LR含量最多且对人体危害最大[9]。

本研究检测广西地区原发性肝癌人群血清MC-LR水平，结果显示肝癌组血清MC-LR水平高于对照组。进一步分层分析后发现，性别、年龄、民族、HBsAg、HBV、吸烟、饮酒等因素对人群血清MC-LR水平无明显影响。然而，无论是肝癌组还是对照组，食鱼生的人群血清MC-LR水平显著高于不食鱼生的人群。广西南宁地区居民有喜食鱼生的风俗习惯，常见的鱼生种类主要为鲤鱼、鲫鱼、草鱼等淡水鱼。有研究发现，鱼类、虾蟹长期暴露于MC时，体内会出现MC的生物富集。徐海滨等[10]对我国淡水湖泊MC污染水品及其在鱼体内的动态变化进行研究，结果显示鱼肌肉和肝脏中均检测出MC，10月份鱼的肌肉中MC水平达(1.81±0.03)ng/g，肝脏中MC水平高达(31.66±4.36)ng/g。刘婉婧等[11]研究表明，MC进入人体的途径主要是通过饮用水和食用MC污染的水产品(鱼、虾等)。此外，本研究还发现，有沟塘水饮用史的人群血清MC-LR水平也显著高于无沟塘水饮用史的人群，这可能与沟塘水中MC含量较高有关。李砚等[12]在原发性肝癌高发地区应用流行病学、生态学、病例-对照等方法，研究慢性暴露于MC与肝癌的关系，发现饮用沟塘水的人群肝癌发生率是饮用深井水人群的8倍；沟塘水中MC水平高达1.158 μg/L，高于我国生活饮用水卫生标准规定的限值1 μg/L。董传辉等[13]发现海门、泰兴淮安和扬中地区的沟塘水MC检出率为16.7%～42.8%。陈刚等[14]对海门市不同类型的饮用水中MC水平的检测表明，沟塘水中的最高水平达300 ng/L，水MC污染与肝癌的发生密切相关。有研究表明，20世纪80年代中期以前，广西南宁市崇左县、扶绥县地表水严重缺乏，导致农业、人畜饮水紧张，居民主要饮用沟塘水，常人畜共用，有机污染严重[15]。因此，推测南宁地区肝癌人群血清MC-LR水平较高的原因可能与过去长期饮用沟塘水有关。

正常情况下，机体可以保持氧化应激和抗氧化应激平衡，保护组织细胞免受氧化损伤。GSH是细胞内主要的抗氧化物质，具有多种生物学功能，可以清除细胞内自由基和过氧化氢，保护细胞免受氧化应激损伤。研究认为，GSH可能在MC-LR的解毒过程中起了至关重要的作用[16]。本研究发现，在肝癌组中MC-LR高、低暴露人群的GSH含量无差异；但对照组中MC-LR高暴露人群GSH含量低于MC-LR低暴露人群，提示MC-LR进入机体后，在肝脏出现病变的早期，MC-LR已经开始消耗机体内的GSH，使机体抗氧化防御能力下降。目前，对于MC引起的严重肝损伤尚无有效的治疗措施。因此，今后除加强饮用水中MC水平的监测，还需要针对肝癌高发区MC高暴露人群加强健康教育及健康促进工作，纠正不良的生活习惯，从而有效减少MC的暴露及损伤。

本研究背景：

随着农业、工业的发展，水中微囊藻毒素(MC)污染加剧。MC-LR可以直接污染水源，然而常规水处理工艺对MC-LR的去除效果有限。MC-LR能够在水生生物体内蓄积，并经过食物链进入人体，威胁人类健康。本研究初步探讨肝癌发生与MC污染的关系，为今后肝癌的预防和控制提供科学依据，提醒人们对MC污染造成的危害引起足够的重视。

作者贡献：农清清进行文章的构思与设计、对文章整体负责；农清清、赵惠柳进行研究的实施与可行性分析、负责文章的质量控制及审校；胡新梅、廖娟、朱雪凤、李江恒、费梦雪、贾雪姣进行数据收集；胡新梅、廖娟进行数据整理；胡新梅进行统计学处理、结果的分析与解释、撰写论文；胡新梅、农清清进行论文的修订。

本文无利益冲突。

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(本文编辑：贾萌萌)

Levels of Serum Microcystin-LR of Patients with Primary Liver Cancer in Guangxi

HUXin-mei1,2,NONGQing-qing1,2*,ZHAOHui-liu3,LIAOJuan1,ZHUXue-feng1,LIJiang-heng1,FEIMeng-xue1,JIAXue-jiao1

1.DepartmentofEnvironmentalHygiene,SchoolofPublicHealth,GuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China2.KeyLaboratoryofPreventionandControlofHighlyPrevalentDiseasesinGuangxiUniversities,Nanning530021,China3.DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedTumorHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China

*Correspondingauthor：NONGQing-qing,Professor;E-mail：nnqq26@163.com

Objective To preliminarily study the levels of serum microcystin-LR (MC-LR) and its related influencing factors of patients with primary liver cancer in Guangxi.Methods A total of 144 patients with primary liver cancer admitted in the Affiliated Tumor Hospital of Guangxi Medical University from December 2014 to June 2016 were selected as liver cancer group and 158 healthy subjects underwent physical examination in our hospital during the same period were selected as the control group.The general demographic characteristics,daily lifestyle,eating habits of the two groups were investigated.The venous blood samples were collected and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect infection markers of serum hepatitis B virus (HBV),including hepatitis B surface antigen (HBsAg),hepatitis B surface antibody (HBsAb),hepatitis B core antibody (HBcAb),hepatitis B e antigen (HBeAg),hepatitis B e antibody (HBeAb),and MC-LR levels and glutathione (GSH) contents.Results The levels of serum MC-LR〔(0.078±0.039)μg/L〕 in liver cancer group were significantly higher than those in the control group〔(0.061±0.041)μg/L〕 (t=3.351,P<0.01).There were no significant differences in serum MC-LR levels among patients of different gender,age,nationality,HBsAg-infected,smoking and drinking status between the two groups (P>0.05).There was no significant difference in serum MC-LR level of different HBV-infected patients in control group (P>0.05).There was significant difference in the serum levels of MC-LR of patients having different history of eating sashimirawfishin and drinking pond water between the two groups (P<0.05).The content of GSH in liver cancer group〔(9.1±5.1)μg/L〕 were significantly lower than those in the control group (15.2±8.1)μg/L (t=-6.899,P<0.001).The degree of exposure was stratified according to the median (0.042 μg/L) of serum MC-LR in the control group,there was no significant difference in GSH contents between people with low degree of exposure and people with high degree of exposure in the liver cancer group (t=-1.290,P=0.200),and the GSH contents of people with low degree of exposure were higher than those with high degree of exposure in the control group (t=2.090,P=0.038).Conclusion The levels of serum MC-LR in patients with liver cancer in Guangxi are significantly higher than those of healthy subjects,while their GSH contents are higher than those of healthy subjects.The serum GSH contents in healthy subjects of high degree of MC-LR exposure are lower than those of low degree of MC-LR exposure.Eating sashimirawfish and long-term drinking pond water can improve the serum MC-LR levels.

Liver neoplasms;Microcystins;Glutathione

国家自然科学基金资助项目(81360420，81660529)；广西自然科学基金资助项目(2015GXNSFAA139120)

R 735.7

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2017.11.011

2016-12-16；

2017-02-13)

1.530021广西南宁市，广西医科大学公共卫生学院环境卫生学教研室

2.530021广西南宁市，广西高校高发疾病预防与控制研究重点实验室

3.530021广西南宁市，广西医科大学附属肿瘤医院检验科

*通信作者：农清清，教授；E-mail：nnqq26@163.com

胡新梅，农清清，赵惠柳，等.广西地区原发性肝癌患者血清微囊藻毒素-LR水平研究[J].中国全科医学，2017，20(11)：1330-1334.[www.chinagp.net]

HU X M,NONG Q Q,ZHAO H L,et al.Levels of serum microcystin-LR of patients with primary liver cancer in Guangxi[J].Chinese General Practice，2017，20(11)：1330-1334.