铁皮石斛增殖培养基配方筛选试验初报

郜李彬 曹征宇 顾韵莉 周亚辉 （上海市浦东新区农业技术推广中心 201201）

铁皮石斛增殖培养基配方筛选试验初报

郜李彬 曹征宇 顾韵莉 周亚辉 （上海市浦东新区农业技术推广中心 201201）

为提高铁皮石斛的增殖系数，达到快速繁殖铁皮石斛的目的，进行了铁皮石斛增殖培养基配方筛选试验。结果表明，适当浓度的BA配合一定量的NAA和马铃薯汁能够使铁皮石斛组培苗的增殖系数达到6.4；经试验筛选和观察，最佳增殖培养基配方为MS+NAA 0.5mg/L+BA 1.0mg/L+马铃薯汁100mg/L。

铁皮石斛；增殖培养；培养基；配方筛选

铁皮石斛为兰科多年生附生草本植物，属国家二级保护的贵重濒危药材，具有独特的药用价值，历代医学经典均奉其为“药中之上品”。现代医学研究表明，铁皮石斛能显著提高人体免疫力，可抗衰老、抗疲劳、耐缺氧，且具有辅助抑制肿瘤等功效。由于受到特殊的生物学及生态学特性的限制，铁皮石斛对生长环境条件的要求非常苛刻，野生铁皮石斛的自然繁殖能力极低、生长缓慢，目前已禁止采摘。利用植物组织培养技术[1]，可快速有效地对铁皮石斛进行繁殖[2]。为提高铁皮石斛的增殖系数，笔者以铁皮石斛组培苗为试验材料[3]，采用不同种类和不同梯度的植物生长调节素和添加不同种类的植物营养液，进行了铁皮石斛增殖培养基配方筛选试验，以期达到快速繁殖铁皮石斛的目的[3-5]。现将相关试验结果汇报如下。

1 材料与方法

1.1 试验材料

铁皮石斛组培苗。

1.2 试验方法

在无菌操作台上，先切除铁皮石斛组培苗基部残叶、褐化老化部分，后按照2叶1心的标准切割分离成单株，接种入30种增殖培养基中，接种深度为0.5cm，每个培养基重复10次，放入无菌培养室培养40d。培养条件：光照时间为12h，光照强度为2000 Lx，培养温度为（20±2）℃。

增殖培养基配方分别为：（1）MS（CK），（2）MS+马铃薯汁100mg/L，（3）MS+香蕉汁100mg/L，（4）MS+BA 0.5mg/L，（5）MS+BA 0.5mg/L+马铃薯汁100mg/ L，（6）MS+BA 0.5mg/L+香蕉汁100mg/L，（7）MS+NAA 0.5mg/L+BA 0.5mg/L，（8）MS+NAA 0.5mg/L+BA 0.5mg/L+马铃薯汁100mg/L，（9）MS+NAA 0.5mg/L+BA 0.5mg/L+香蕉汁100mg/L，（10）MS+NAA 1.0mg/L+BA 0.5mg/L，（11）MS+ NAA 1.0mg/L+BA 0.5mg/L+马铃薯汁100mg/L，（12）MS+NAA 1.0mg/L+BA 0.5mg/L+香蕉汁100mg/L，（13）MS+BA 1.0mg/L，（14）MS+BA 1.0mg/ L+马铃薯汁100mg/L，（15）MS+BA 1.0mg/L+香蕉汁100mg/L，（16）MS+NAA 0.5mg/L+BA 1.0mg/L，（17）MS+NAA 0.5mg/L+BA 1.0mg/L+马铃薯汁100mg/L，（18）MS+NAA 0.5mg/L+BA 1.0mg/L+香蕉汁100mg/L，（19）MS+NAA 1.0mg/L+BA 1.0mg/ L，（20）MS+NAA 1.0mg/L+BA 1.0mg/L+马铃薯汁100mg/L，（21）MS+NAA 1.0mg/L+BA 1.0mg/L+香蕉汁100mg/L，（22）MS+BA 3.0mg/L，（23）MS+BA 3.0mg/L+马铃薯汁100mg/L，（24）MS+BA 3.0mg/ L+香蕉汁100mg/L，（25）MS+NAA 0.5mg/L+BA 3.0mg/L，（26）MS+NAA 0.5mg/L+BA 3.0mg/L+马铃薯汁100mg/L，（27）MS+NAA 0.5mg/L+BA 3.0mg/ L+香蕉汁100mg/L，（28）MS+NAA 1.0mg/L+BA 3.0mg/L，（29）MS+NAA 1.0mg/L+BA 3.0mg/L+马铃薯汁100mg/L，（30）MS+NAA 1.0mg/L+BA 3.0mg/ L+香蕉汁100mg/L。30种培养基中均加入3%蔗糖和0.7%琼脂，pH5.6～5.8。

2 结果与分析

经过40d的增殖培养后，每个培养基中随机选取5瓶进行增殖系数的统计。结果表明（见表1、2），除CK、配方（2）和配方（3）外，其余27种增殖培养基中的铁皮石斛单株苗均有不同程度的增殖生长。其中，配方（17）中的铁皮石斛组培苗增殖系数最高，达6.4，增殖效果最好，在5%和1%差异显著性水平下均显著高于其他配方；配方（8）的增殖效果也较为理想，增殖系数达3.8；配方（20）、（26）、（16）之间的增殖效果差异不大，在3.2～3.4之间；其余培养基配方的增殖效果不太理想，增殖系数都在2.8以下。

3 结论与讨论

3.1 植物生长调节素对铁皮石斛组培苗增殖生长的影响

本试验采用了BA和NAA 2种植物生长调节素，各设定了3个梯度，试验结果表明，BA和NAA对铁皮石斛组培苗的增殖生长非常重要，CK、配方（2）和配方（3）中由于不含有植物生长调节素，这3种培养基配方中的铁皮石斛组培苗均未出现增殖生长。

试验结果表明，BA对铁皮石斛组培苗的增殖生长最为重要，在BA浓度为1.0mg/L时，增殖效果最好，较低的BA浓度（0.5mg/L）促进分叉丛生的效果不佳，过高的BA浓度（3.0mg/L）反而抑制了组培苗的增殖生长。同时，适量的NAA配合BA能够更好地促进铁皮石斛组培苗的增殖生长，在NAA浓度为0.5mg/L时，增殖效果最好。此外，过高浓度的NAA配合BA会导致植株生长膨胀，苗形不佳，不适合下一步生长。

表1 不同培养基配方中铁皮石斛增殖系数统计

表2 不同培养基配方中铁皮石斛增殖系数新复极差比较

3.2 植物营养液对铁皮石斛组培苗增殖生长的影响

本试验采用马铃薯汁和香蕉汁作为植物营养液，浓度均为100mg/L。试验结果表明，马铃薯汁的增殖效果明显好于香蕉汁，在其他条件相同的情况下，培养基中添加马铃薯汁的铁皮石斛组培苗增殖系数显著高于添加香蕉汁的培养基。

3.3 铁皮石斛外植体诱导最佳培养基配方

试验结果表明，铁皮石斛组培苗增殖培养的最佳培养基配方为MS+NAA 0.5mg/L+BA 1.0mg/L+马铃薯汁100mg/L。

[1] 谭文澄,戴策刚.观赏植物组织培养技术[M].北京:中国林业出版社,1991.

[2] 张泉锋,毛碧增.铁皮石斛培养的产业化研究[J].中草药,2004, 35(4):438-440.

[3] 白美发,黄敏.铁皮石斛组培技术研究[J].安徽农业科学,2008, 36(36):15802-15803.

[4] 郑宽瑜,邓君浪,赵辉.铁皮石斛组培快繁技术体系研究[J].云南农业科技,2009(增刊):57-59.

[5] 谢明娟.铁皮石斛组培快繁技术[J].北京农业,2013(30): 115-116.

2016-12-07