狭叶锦鸡儿根化学成分及抗肿瘤活性研究

苏比努尔买乌兰　潘兰　贾新岳　张涛　贾晓光　邹忠梅

[摘要]采用硅胶柱色谱、sephadex LH20凝胶柱色谱、制备HPLC等多种色谱技术，从狭叶锦鸡儿（Caragana stenophylla）根80%乙醇提取物的二氯甲烷部位中分离得到14个单体化合物，依据理化性质及波谱数据分别鉴定为：2（4hydroxy3methoxylphenyl）3methoxylbenzofuran6ol （1）、mucodianin C （2）、羟基二甲氧苯基苯并呋喃醇 （isopterofuran，3）、芒柄花素 （formononetin，4）、阿夫罗摩辛 （afromosin，5）、毛蕊异黄酮 （calycosin，6）、刺槐素 （acacetin，7）、3O甲基山柰酚 （3Omethylkaempferol，8）、甘草素 （liquiritigenin，9）、异甘草素 （isoliquiritigenin，10）、variabilin （11）、白藜芦醇 （resveratrol，12）、浙贝素 （zhebeiresinol，13）、2，3dicarboxy6，7dihydroxy1（3′，4′dihydroxy）phenyl1，2 dihydronaphthalen （14）。其中化合物1是新化合物（苯并呋喃衍生物类化合物），命名为mucodianin S，化合物2，3，11，13，14为首次从锦鸡儿属中分离得到，化合物4～10为首次从狭叶锦鸡儿中分离得到。采用MTT比色法对部分单体化合物进行体外抗肿瘤活性测试，实验结果表明化合物2对人类肿瘤细胞系HepG2，HeLa具有显著的生长抑制活性，其IC50分别为（1618±095），（375±008） μmol·L-1。

[关键词]狭叶锦鸡儿； 化学成分； 结构鉴定； 抗肿瘤活性

[Abstract]Fourteen compounds were isolated from the 80% ethanol extract of Caragana stenophylla root， by using a combination of various chromatographic approaches， including silica gel sephadex LH20 column chromatography， and preparative HPLC On the basis of their physical and chemical properties and spectroscopic data， their structures were elucidated as 2（4hydroxy3methoxy lphenyl）3methoxyl benzofuran6ol （1）， mucodianin C （2）， isopterofuran （3）， formononetin （4）， afromosin （5）， calycosin （6）， acacetin （7）， 3Omethylkaempferol （8）， liquiritigenin （9）， isoliquiritigenin （10）， variabilin （11）， resveratrol （12）， zhebeiresinol （13）， and 2， 3dicarboxy6， 7dihydroxy1（3′， 4′dihydroxy）phenyl1， 2dihydronaphthalen （14） Compound 1 is a new benzofuran derivative， named as mucodianin S； compounds 2， 3， 11， 13， 14 were isolated from the genus Caragana for the first time， and compounds 410 were firstly isolated from Caragana stenophylla. MTT assay was used to determine their cytotoxicity of the isolated compounds against human tumor cell lines， and 2 showed cytotoxicity against human hepato cellular cancer （HepG2） and human cervical （HeLa） lines， with IC50 values of （1618±095）， （375±008） μmol·L-1， respectively

[Key words]Caragana stenophylla； chemical constituents； structure identification； antitumor activity

錦鸡儿属Caragana Fabr植物属于豆科，该属植物全世界大约有100多种，中国有66种，具有抗炎、镇痛、抗肿瘤、抗菌、抗氧化、抗骨质疏松、防治心血管类疾病等药理活性[12]。狭叶锦鸡儿C stenophylla Pojark是豆科锦鸡儿属灌木，分布于我国内蒙古高原的荒漠和草原地区、新疆、东北、河北、山西、陕西、宁夏、甘肃西北部。《药用植物辞典》记载狭叶锦鸡儿的根、花等部位均可以入药，具有祛风、平肝、止咳的功效[34]。目前从狭叶锦鸡儿石油醚及乙酸乙酯萃取物中分离到二苯乙烯类、黄酮类、萜类、有机酸及酯类化合物，并发现乙酸乙酯萃取物具有一定的乙酰胆碱酯酶抑制活性[5]。本研究从狭叶锦鸡儿根80%乙醇提取物的二氯甲烷萃取物中分离鉴定了14个单体化合物（图1），其中化合物1为新化合物。

1材料

核磁共振仪（Bruker AvanceDRX500型，德国）；高分辨率质谱仪（Waters SYNAPT HDMS型，美国）；高效液相色谱仪（Waters 2535型，美国）；高效液相色谱柱（YMCPack ODSA型，10 mm×250 mm，5 μm，日本）；柱色谱硅胶（100～200目，青岛海洋化工厂）；GF254薄层色谱硅胶（青岛海洋化工厂）；Sephadex LH20（40～70 μm，Pharmacia Biotech AB，瑞典）；所试剂为分析纯和色谱纯；

二氧化碳培养箱（日本三洋公司）；XDS 1B倒置显微镜（日本Nikon公司）；低温离心机（德国Eppendorf）；全自动酶标仪（BIORAD，美国）；MTT（美国 Sigma公司）；1640培养基（美国Gibico公司）；胎牛血清；DMSO；胰蛋白酶。人宫颈癌细胞HeLa，人肝癌细胞HepG2，人肺癌细胞A549均购自协和细胞资源中心。

狭叶锦鸡儿根于2014年6月采自新疆奇台县半截沟（经度E43°39′3042″，纬度N89°44′1573″），经新疆维吾尔自治区中药民族药研究所贾晓光研究员鉴定为C stenophylla的根，凭证标本存放于新疆维吾尔自治区中药民族药研究所标本室。

2提取分离

狭叶锦鸡儿根134 kg，干燥、粉碎后用80%乙醇浸泡24 h，加热回流提取3次，每次2 h，合并提取液并减压浓缩，用水混悬后，依次用二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，萃取液减压浓缩后得二氯甲烷萃取物163 g，乙酸乙酯萃取物92 g，正丁醇萃取物335 g。

二氯甲烷萃取物（160 g）经硅胶柱色谱（100～200目），用石油醚乙酸乙酯系统（100∶0，100∶1，50∶1，25∶1，10∶1，8∶1，6∶1，4∶1，2∶1，1∶1，1∶3，乙酸乙酯）洗脱，经TLC检识，合并后得7个流分（FrⅠ～Ⅶ）。FrⅣ（137 g） 经硅胶柱色谱（100～200目），用石油醚丙酮系统（10∶1～丙酮）洗脱得5个流分（FrⅣAE） 和化合物4（49 mg）。FrⅣD经硅胶柱色谱（100～200目），用二氯甲烷甲醇系统（100∶0，500∶1，400∶1，300∶1，200∶1，100∶1，80∶1，60∶1，40∶1，10∶1，甲醇）洗脱得4个流分（Fr ⅣD1D4）；FrⅣD2经Sephadex LH20柱色谱（二氯甲烷甲醇1∶1）洗脱得化合物2（38 mg）；FrⅣD3经Sephadex LH20柱色谱（二氯甲烷甲醇1∶1）洗脱和制备HPLC得化合物1（26 mg） 和3（5 mg）；FrⅣD4经硅胶柱色谱（100～200目），用二氯甲烷甲醇系统（100∶0～甲醇）洗脱，进一步经Sephadex LH20柱色谱（二氯甲烷甲醇1∶1）洗脱得化合物7（55 mg）。FrⅣC （38 g） 经Sephadex LH20柱色谱（二氯甲烷甲醇1∶1）洗脱得化合物11（4 mg）。FrⅤ（76 g） 经硅胶柱色谱（100～200目），用二氯甲烷甲醇系统（100∶0甲醇）洗脱得6个流分（FrⅤAF） 和化合物5（352 mg）。FrⅤC经Sephadex LH20柱色谱（二氯甲烷甲醇1∶1）洗脱和制备HPLC得化合物10（24 mg）。FrⅤD经制备HPLC得化合物8（3 mg） ，化合物9（25 mg） 和化合物12（7 mg）。FrⅤE经Sephadex LH20柱色谱（二氯甲烷甲醇1∶1）洗脱和制备HPLC得化合物14（13 mg）。FrVI（19 g） 经硅胶柱色谱（100～200目），用二氯甲烷甲醇（100∶0～甲醇）洗脱5个流分（FrVIAE）；Fr VIB经硅胶柱色谱，Sephadex LH20柱色谱（二氯甲烷甲醇1∶1）洗脱得化合物13（3 mg）；FrVID经硅胶柱色谱，Sephadex LH20柱色谱（二氯甲烷甲醇1∶1）洗脱得化合物6（3 mg）。

3结构鉴定

化合物1浅紫色粉末，易溶于甲醇。HRESIMS显示准分子离子峰m/z 309072 4 [M+Na]+（计算值309073 9），结合1H，13CNMR谱数据确定化合物分子式为C16H14O5，不饱和度为10。

本研究对狭叶锦鸡儿根中分离到的部分化合物进行体外抗肿瘤活性测试。其中化合物2对人类肿瘤细胞系HepG2，HeLa具有显著的生长抑制活性，其IC50分别为（1618±095），（375±008） μmol·L-1。

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[責任编辑丁广治]