辣木叶提取物降低高尿酸血症小鼠尿酸水平及机理研究

梁文娟 和劲松 田洋 赵德锟 王洪玲

摘要[目的]研究辣木叶醇提物对血清尿酸（UA）、肌酐（Cre）、血尿素氮（Bun）、腺苷脫氨酶（ADA）以及肝脏黄嘌呤氧化酶（XOD）的影响。[方法]连续7 d灌胃给予辣木叶醇提物和别嘌呤醇（0.01 g/kg），诱导小鼠产生高尿酸血症，对比各组小鼠血清中UA、Cre、Bun、XOD和ADA的含量变化。[结果]与模型组比较，辣木叶提取物的低、中、高剂量组（1.0、2.0、4.0 g/kg）均可降低高尿酸血症小鼠UA、Cre、Bun、ADA、XOD的水平。[结论]辣木叶醇提物具有降尿酸作用，抑制 XOD 活性是其降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的机制之一。

关键词辣木叶；高尿酸血症；尿酸水平；机理

中图分类号S789.4文献标识码

A文章编号0517-6611（2017）17-0108-02

Abstract[Objective] The research aimed to study the effect of M.oleifera leave extract（MOLE）on the level of serum uric acid（UA），creatinine（Cre），blood usea nitrogen（Bun），adenosine deaminase（ADA）and liver xanthine oxidase（XOD）.[Method]Intragastric administration of MOLE（1.0，2.0，4.0 g/kg）and allopurinol（0.01 g/kg）for 7 days，the level of UA，Cre，XOD and Bun in hyperuricemia mice induced by potassium oxonate was respectively analyzed.[Result]Compared with model group，each dosage group could degrade the levels of serum UA，Cre，Bun，ADA and XOD activities in hyperuricemia mice.[Conclusion]The MOLE could obviously reduce the level of serum uric acid，and the effect is related to its inhibition of hepatic XOD activities.

Key wordsMoringa oleifera leaves； Hyperuricemia； Level of uric acid（UA）；Mechanism

基金项目云南省应用基础研究计划项目青年项目（2016FD023）；云南省教育厅科学研究基金项目（2015Y188）；云南农业大学自然科学青年基金项目（2015ZR09）。

作者简介梁文娟（1985—），女，云南昆明人，讲师，博士，从事天然产物化学成分和药效物质研究。*通讯作者，讲师，博士，从事中药及民族藥药效物质基础研究。

收稿日期2017-05-09

痛风是因遗传性或获得性病因导致嘌呤代谢紊乱所引起的一类疾病，是由尿酸盐结晶沉积于机体组织所引起的有一种或多种病变的临床综合征[1-2]。当黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XOD）活性增强，体内尿酸浓度升高会形成高尿酸血症，别嘌呤醇、非布司他是现有黄嘌呤氧化酶抑制剂的代表药物，但均伴随皮疹、肝肾功能异常等不良反应[3-4]，寻找高效、低毒的XOD抑制剂具有现实意义。研究发现，天然产物如虎杖、土茯苓、土连翘、荷叶、山楂、落叶松和桑叶的提取物和单体具有XOD抑制作用[5-8]；2015年FDA 批准上市的新药 Lesinurad，当与XOD抑制剂联用可治疗高尿酸血症并能缓解痛风症状[1]；通过筛选抑制XOD作用的植物资源，系统研究其物质基础和作用机制，有望研制出高效、低毒、作用机制明确的先导化合物。

辣木（Moringa oleifera）为辣木科（Moringaceae）辣木属（Moringa）热带落叶乔木，具有解痉、镇痛、降压、消炎、抑制肿瘤和拮抗阿尔兹海默症中氧化应激的活性[9-11]，其化学成分类型丰富，其中辣木叶总黄酮含量高达 6.2%，又以黄酮和黄酮醇类物质最高。有文献报道，黄酮类化合物（如桑色素[12]、槲皮素[13]、水飞蓟素[13]）具有抗痛风作用。该研究探索云南产辣木叶醇提物对氧嗪酸钾盐诱导的高尿酸血症的治疗作用及其降尿酸作用和作用机理，以拓展辣木的开发利用前景，同时寻找新的抗痛风及降尿酸的活性成分。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1试验动物。湖南斯莱克景达实验动物有限公司体重（20±3）g的SPF级昆明种雄性小鼠60只，试验动物使用许可证号SCXK（湘）2011-0003，动物试验期间室温（24±2）℃。

1.1.2药品及试剂。

辣木叶采自云南普洱，经中国科学院张东书副研究员鉴定为Moringa oleifera Lam.。氧嗪酸钾盐和别嘌呤醇购买于Sigma-Aldrich，批号分别为STBD5759V和081M1112V；尿酸测定试剂盒、尿素氮测定试剂盒和肌酐试剂盒购自希森美康医用电子（上海）有限公司，批号分别为YZB1JAP4561-2012（398308）、YZB1JAP5441-2012（332213）和YZB1JAP4550-2012（252203）；腺苷脱氨酶测试盒、黄嘌呤氧化酶测试盒、考马斯亮蓝测试盒购自南京建成生物工程研究所，批号分别为2015122、20151210、20151208。

1.1.3仪器。

DY89-II型电动匀浆机，宁波新芝生物科技股份有限公司；旋转蒸发仪，河南巩义予华公司；高速冷冻离心机，美国Beckman公司；

UV-2100紫外分光光度仪，北京瑞利分析仪器公司。

1.2方法

1.2.1辣木叶样品的制备。

称取干燥辣木叶100.0 g，粉碎后加入600 mL 70%乙醇，超声提取2次，每次2 h，将提取液合并浓缩至375.0 mL，得辣木叶高剂量组（4.0 g/kg，按生药计，下同）；按照同样方法得到辣木叶低、中剂量组（1.0、2.0 g/kg）。

1.2.2小鼠高尿酸血症模型建立。

60只小鼠适应7 d后，随机分组，每笼10只，分为正常组、模型组、阳性药组、辣木叶提取物低剂量组、辣木叶提取物中剂量组、辣木叶提取物高剂量组。其中正常组、模型組灌以生理盐水，阳性药组以别嘌呤醇混悬于0.5% CMC-Na中，给药剂量为0.01 g/kg。灌胃量均为0.015 mL/g。连续7 d，每天灌胃1次。参考文献方法造模[14]，于最后1次给药前1 h对小鼠腹腔注射氧嗪酸钾盐（混悬于浓度0.5% CMC-Na溶液），剂量为0.4 g/kg，以造成小鼠急性高尿酸血症，正常组按照同样剂量腹腔注射0.5% CMC-Na。给药1 h后，眼眶取血，全血5 000 r/min离心10 min，取上清，于4 ℃冰箱保存待检测。于冰台上分取肝脏及肾脏组织，-70 ℃冻存待检测。自动生化分析仪检测UA、Cr、Bun、肝脏XOD、 ADA活性。采用SPSS 18.0 软件进行分析，用均数±标准差（ ±S）表示。组间比较采用t 检验，以P<0.05 为差异有统计学意义。

2结果与分析

2.1辣木叶70%乙醇提取物对高尿酸血症小鼠UA水平的影响

由表1可见，与空白组比较，氧嗪酸钾盐造模成功后小鼠血清尿酸水平显著升高（P<0.01）。给药7 d后，与模型组比较，阳性药别嘌呤醇（0.01 g/kg）和辣木叶高剂量组（4.0 g/kg）均可显著降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平（P<0.01），中剂量組（2.0 g/kg）小鼠血清尿酸水平有所下降（P<0.05），表明辣木叶醇提物的降尿酸作用随剂量增加呈增强的趋势。

2.2辣木叶70%乙醇提取物对高尿酸血症小鼠肌酐及尿素氮的影响

由表2可知，与模型组相比，别嘌呤醇组可以显著地降低高尿酸血症小鼠肌酐水平（P<0.01），但对尿素氮无抑制作用；辣木叶的低、中、高剂量均可降低高尿酸血症小鼠肌酐（P<0.01）和尿素氮的水平（P<0.05）。

2.3辣木叶70%乙醇提取物对高尿酸血症小鼠肝脏XOD及ADA 的影响由表3可知，

与模型组相比，别嘌呤醇组和辣木叶70%乙醇提取物中剂量组（2.0 g/kg）显著降低高尿酸血症小鼠肝脏XOD 水平（ P<0.01）；辣木叶70%乙醇提取物低、高剂量对XOD也有一定的抑制作用（P<0.05），但其抑制程度与其相同剂量组对血清尿酸的抑制程度并不平行。别嘌呤醇组和辣木叶低、 中、 高剂量组对模型小鼠肝脏 ADA 活性均有较强的抑制活性（P<0.05，P<0.01），且随剂量增加有增强的趋势。

3讨论与小结

痛风伴随尿酸过多及尿酸排泄减少，其水平升高是痛风的生化基础。该研究发现辣木叶的中、高剂量组（2.0 和4.0 g/kg）具有一定的降尿酸活性，表明辣木叶具有抗痛风的功效。黄嘌呤氧化酶（XOD）是嘌呤核苷代谢途径的限速酶，是调控尿酸生成的最终环节，在高尿酸血症的发病中占主导地位，该研究表明辣木叶70%乙醇提取物低、中、高剂量组（1.0、2.0、4.0 g/kg）对高尿酸血症小鼠肝脏XOD均有一定抑制作用，但其抑制XOD活性与降尿酸作用并不平行，推测其降尿酸作用除抑制XOD活性外还可能存在其他机制。

肾脏在尿酸排泄过程中起着重要作用，因此高尿酸症常伴有肾功能损伤，血肌酐和尿素氮是检验肾功能的重要指标，可以反映肾小球滤过和肾小管重吸收功能的强弱。辣木叶提取物的低、中、高剂量组（1.0、2.0、4.0 g/kg）均可降低高尿酸血症小鼠肌酐和尿素氮的水平（P<0.01，P<0.05），表明辣木叶提取物具有一定的肾脏保护功能，辣木在印度传统医学中有用于治疗肾结石的记载，研究发现辣木根的水提物具有保护肾脏的功能，能够降低结石模型组中试验大鼠尿酸和血尿素氮的水平[15]，这与该研究结果吻合。

前期发现辣木叶中黄酮和黄酮醇类物质含量较高，有研究表明黄酮类化合物（芦丁、槲皮素等）对XOD 活性具有抑制作用，其中槲皮素可能通过抑制肝脏中XOD 和ADA的活性来减少尿酸的生成，从而降低血尿酸[8]。目前关于辣木叶提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用及其降低高尿酸血症血尿酸水平的研究较少。辣木叶中化学成分丰富，种类繁多，除含有传统中药和天然产物中具有较好黄嘌呤氧化酶抑制活性的黄酮、黄酮醇类物质，还含有一系列具有抗菌消炎活性的硫代氨基甲酸酯类、异硫氰酸酯类、氰基类、吡咯生物碱类等含氮化合物[9-11]。因此，辣木叶中具体的抗痛风活性物质基础及其作用机制值得进一步研究。

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