平卧菊三七叶中黄酮提取工艺的研究

2017-09-23 12:54肖慧
科学与财富 2017年26期
关键词:平卧芦丁回归方程

肖慧

摘 要:本实验以平卧菊三七的叶为实验材料,通过对提取温度、提取时间、料液比进行单因素实验,探讨了不同提取工艺对黄酮得率的影响。通过单因素实验得出:最佳提取温度为80℃、最佳提取时间3h、最佳提取料液比为1:30。

关键词:平卧菊三七 叶 黄酮 工艺优化 得率

前言

平卧菊三七是菊三七属。是一种攀援草本,有臭气,淡褐色或紫色,有条棱。它可以用于治支气管肺炎,肺结核,其成份黄酮类有多种生物学活性在抗氧化作用方面、抗肿瘤活性,黄酮类物质对冠心病、心绞痛、高血脂,心血管疾病有很好的疗效。

由于平卧菊三七有诸多的药用性质,且其药用性质主要来自于其中的黄酮成分,为此本试验以平卧菊三七的叶为原料,采用分光光度法测提取物黄酮类化合物的含量,为平卧菊三七经济价值的综合利用以及产品的开发提供参考依据。

1、试验材料与方法

1.1试验材料

1.1.1主要试验试剂

乙醇——分析纯 硝酸铝——分析纯 氢氧化钠——分析纯 石油醚——分析纯

1.1.2 试验原料

平卧菊三七 采自江西农业大学中草药资源开发教学基地

1.1.3主要试验仪器

UV-2100型可见光分光分度计 尤尼柯(上海)仪器有限公司

Adventurer AR2140电子天平 OHAUS CORP USA

40目标准筛 上虞市大地分样筛厂

HH-4,HH-2数显恒温水浴锅 国华电器有限公司

L-20B型高速冷冻离心机 上海安亨科学仪器厂等

1.2试验方法

1.2.1平卧菊三七叶的预处理

将干燥的平卧菊三七的叶用粉碎机粉碎,过40目筛后得到的叶粉用石油醚脱色脱脂3h,然后放入通风橱中让其风干至恒重,得到样品。

1.2.2 平卧菊三七叶中黄酮提取工艺流程

平卧菊三七叶→预处理(清洗-晒干-粉碎)→乙醇溶液提取→过滤→定容→测吸光度→计算黄酮得率

1.2.3平卧菊三七叶提取黄酮的单因素试验设计

1.2.3.1料液比对平卧菊三七叶黄酮得率的影响

在酒精浓度80%,且温度80℃,时间3h条件下采用不同料液(1:20,1:30,1:40,1:50,1:60)分别提取,研究料液比对平卧菊三七叶黄酮得率的影响。

1.2.3.2提取温度对平卧菊三七叶黄酮得率的影响

在1.2.3.1得出最佳料液比,且时间3h下采用不同温度(50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、95℃)分别提取,研究不同温度对平卧菊三七叶黄酮得率的影响。

1.2.3.3提取时间对平卧菊三七叶黄酮得率的影响

在1.2.3.1,1.2.3.2得出最佳料液比,温度,在不同提取时间情况(1h、2h、3h、4h、5h)分别提取一次,研究不同時间对平卧菊三七叶黄酮得率的影响。

1.2.4平卧菊三七叶黄酮得率的测定的方法

平卧菊三七叶黄酮测定时以芦丁作为参照物,精密称取105℃干燥恒重的芦丁标准品10mg,加80%乙醇溶解,定容到25ml容量瓶中,摇匀,精密吸取标液0.0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2ml分别置10ml试管中,加5%NaNO2 1ml,放置6min后加10%AL(NO3)3 1ml放置6min,再加4%NaOH10ml,加水到刻度,摇匀,放置15min,用分光光度计进行测定,绘制标准曲线。

称取1g平卧菊三七叶粉未,用酒精提取过滤取滤液1ml到25ml容量瓶中,加水5ml摇匀,加入浓度5%NaNO2 1ml混匀放置6min,加5%AL(OH)3溶液1ml混匀,放置6min,加入4%NaOH 10ml,再加定容到25ml,摇匀后放置15min,再用分光光度计在波长510nm处测定吸光度,根据回归方程计算样品中总黄酮总量[10]。

黄酮利率(%)=C*25*10-6*100/(W*P)

C:黄酮浓度:W:平卧菊三七叶粉末重量;P:料液比

2、结果与分析

2.1 标准曲线的绘制及回归方程的建立

配制浓度分别为0、8、16、24、32、40、48μg/ml的芦丁标准溶液,于510nm下测得芦丁相应的吸光值,吸光度分别为: 0、 0.067、 0.154、0.222、0.274、0.337、0.448。通过线性回归得到回归方程为: y=0.0089x+0.0001 (其中x:浓度,y:吸光度),决定系数R2=0.9922.

由芦丁标曲回归方程的相关系数R=0.9961>R0.01(5)=0.874 ,可知芦丁浓度与芦丁吸光度值之间建立的回归方程极显著,可以通过所测得的提取液的吸光度值算出黄酮含量。

2.2平卧菊三七叶黄酮的单因素试验结果

2.2.1料液比对平卧菊三七叶黄酮得率的影响

在酒精浓度80%,时间3h,80℃条件下进行料液比单因素实验结果为:料液比1:20,黄酮得率4.57%,料液比1:30,黄酮得率5.64%,料液比1:40,黄酮得率5.54%,料液比1:50,黄酮得率5.18%,料液比1:60,黄酮得率4.42%。

由此可见,随着液料比的升高,提取率也随之升高,其中在到达30:1时提取率最高,随着液料比的升高,黄酮得率降低,所以1:30是黄酮提取的最适合料液比。

2.2.2温度对平卧菊三七叶黄酮得率的影响

在酒精浓度80%和2.2.1所得黄酮最适合提取的料液比分别是1:30,时间是3h条件下进行温度单因素实验结果为:温度50℃,黄酮得率3.96%,温度60℃,黄酮得率4.46%,温度70℃,黄酮得率4.72%,温度80℃,黄酮得率5.57%,温度5.16℃,黄酮得率4.42%。

由此可见,随着温度的升高,提取率也随之升高,其中在到达80℃时提取率最高,80℃以后随着温度的升高,黄酮得率降低,所以80℃是黄酮提取的最适合温度。

2.2.3时间对平卧菊三七叶黄酮得率的影响

在酒精浓度80%和2.2.1、2.2.2所得黄酮最适合提取的料液比、温度分别是1:30,80℃条件下进行时间单因素实验结果为:提取时间1h,黄酮得率5.59%,提取时间2h,黄酮得率6.33%,提取时间3h,黄酮得率7.09%,提取时间4h,黄酮得率6.88%,提取时间5h,,黄酮得率6.52%。

由此可见,随着时间的增加,提取率也随之增加,其中在到3h时提取率最高,以后随着提取时间的增加,黄酮得率降低,所以3h是黄酮提取的最适合时间。

3、结论

提取平卧菊三七叶黄酮的最佳提取温度为80℃、最佳提取时间为3h、最佳提取料液比为1:30。

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