五参口服液联合电针内关穴对糖尿病心肌病大鼠心率变异性及心肌细胞凋亡的影响

肖凤英 崔金涛 张压西 贺 劲 李 敏 张 军

(武汉市中医医院，湖北 武汉 430014)

五参口服液联合电针内关穴对糖尿病心肌病大鼠心率变异性及心肌细胞凋亡的影响

肖凤英 崔金涛 张压西 贺 劲 李 敏 张 军

(武汉市中医医院，湖北 武汉 430014)

目的观察五参口服液联合电针内关穴对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心率变异性(HRV)及心肌细胞凋亡的影响。方法50只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、五参组、内关组和五参+内关组各10只，采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立DCM大鼠模型，治疗8 w后，对HRV进行对照分析，处死大鼠，迅速取出心肌，心肌细胞凋亡指数检测采用TUNEL法测定。结果与正常组比较，模型组各HRV时域指标〔24 h平均值的标准差(SDNN)、RR间期平均值标准差(SDANN)、HRVindex、相邻RR间期值的均方根(RMSDNN)、相邻R-R间期>50 ms的个数点总窦性心搏个数的百分比(PNN50)〕及各HRV频域指标〔总功率、极低频(VLF)、低频(LF)、高频(HF)〕均明显降低(P<0.05)，心肌细胞凋亡指数明显升高(P<0.05)；与模型组比较，五参组时域指标RMSDNN及频域指标HF显著升高(P<0.05)，内关组及五参+内关组各指标均显著升高(P<0.05)，内关组及五参+内关组心肌细胞凋亡指数明显降低(P<0.01)；与内关组比较，五参+内关组各HRV指标显著升高(P<0.05)。结论五参口服液联合电针内关穴治疗DCM大鼠能明显提高大鼠HRV各指标，且能显著降低心肌细胞凋亡指数，心肌细胞凋亡的改善可能是提高HRV的机制之一。

糖尿病心肌病；五参口服液；内关穴；心率变异性；心肌细胞凋亡

糖尿病性心肌病(DCM)是引起糖尿病患者最终死亡的常见慢性心血管并发症，临床上缺乏理想有效的治疗手段。研究表明〔1〕，DCM心脏自主神经功能紊乱(CAN)，在所有反映交感活性的心率变异性(HRV)参数变化上具有一致性，表现为时域指标及频域指标降低。由此，本文旨在通过观察第五批名老中医崔金涛教授经验方五参口服液联合电针内关穴治疗DCM对大鼠HRV及心肌细胞凋亡的影响，并对其相关机制进行探讨。

1 材料与方法

1.1实验动物 清洁级健康雄性Wistar大鼠70只，体质量(160～180)g，由华中科技大学实验动物中心提供(湖北省实验动物管理委员会，合格证001号，环境设施合格证028号)。实验动物分组饲养，饲以标准颗粒饲料。分笼喂养，自由饮食摄水，自然昼夜光线照明，实验室内通风良好，温度保持在16℃～20℃，相对湿度30%～80%。 试验前用快速血糖仪检查血糖，剔除血糖异常大鼠。

1.2试剂 链脲佐菌素(STZ，Sigma公司,批号S01301178);血糖试纸(美国雅培公司,批号0701051),细胞凋亡检测(TUNEL)试剂盒。

1.3模型制备 大鼠适应性喂养1 w后，随机取大鼠50只，参考文献〔2〕方法建立DCM大鼠模型。造模成功后随机分为模型组，五参组、内关组和五参+内关组，每组各10只，另10只为正常组。

1.4治疗方法 内关组及五参+内关组参照中国针灸学会实验针灸会制定的《动物针灸穴位图谱》〔3〕，P6，H7和L14对应选取内关穴施予针刺。内关位于大鼠腕横纹正中上5 mm处，针剌深度约5 mm。造模同时分别针刺大鼠双侧内关穴，大鼠穿自制鼠衣，用0.30 mm×15 mm华佗牌毫针直刺穿皮达筋间,捻转1 min后,接HANS-200型电针治疗仪,左右各接一电极,连续波,频率2 Hz,强度1 mA,通电治疗20 min,每日1次,共8 w。其他组行内关穴假针刺，穴位的定位和消毒法同上,使用英国DONGBANGAcuPrime针灸器械有限公司的假针灸针(严格按照说明书进行操作),不锈钢针同上,并采用以下刺激方法:针头露出套管1 min,轻触皮肤,开始记录时间。留针时,压下针柄使针头露出1 mm,轻触皮肤,捻转1 min后,接HANS-200型电针治疗仪,左右各接一电极,连续波,频率2 Hz,强度1 mA,通电治疗20 min，每日1次,共8 w。五参组及五参+内关组给予大鼠1支五参口服液(由西洋参、北沙参、南沙参、三七、丹参、降香、苦参等中药组成)灌胃，每日1次，其他组给予等量的生理盐水灌胃，共8 w。

1.5HRV指标 治疗8 w后，出针1 min后，各组进行HRV取样,用MODEL No.7303050心电装置,通过RM-86型八导生理记录仪及SKY-A4 生物信号处理系统,记录停针即刻的心电图波形。并输入功能学科实验软件包,分析计算各组大鼠停针即刻各HRV时域指标〔24 h平均值的标准差(SDNN)、RR间期平均值标准差(SDANN)、HRVindex、相邻RR间期差值的均方根(RMSDNN)、相邻R-R间期>50 ms的个数占总窦性心搏个数的百分比(PNN50)〕及频域指标〔总功率、极低频(VLF)、低频(LF)、高频(HF)〕的情况。采样过程中避免干扰,将大鼠用25%氨基甲酸乙酯(4 ml/kg)麻醉,固定四肢,采集V1心电信号,避免各种影响自主神经系统(ANS)活动的因素。

1.6心肌细胞凋亡指数 随后处死大鼠，迅速取出心肌，心肌细胞凋亡指数检测采用TUNEL法测定。

1.7统计学方法 采用SPSS13.0统计软件进行单因素方差分析。

2 结 果

2.1各组HRV时域指标的比较 与正常组比较，模型组SDNN、SDANN、HRVindex、RMSDNN、PNN50均明显降低(P<0.05)；与模型组比较，五参组RMSDNN有统计学差异(P<0.05)，内关组及五参+内关组各HRV时域指标显著升高(P<0.05或P<0.01)；与内关组比，五参+内关组各HRV时域指标显著升高(P<0.05)。见表1。

表1 各组治疗后HRV时域指标的比较

与正常组比较:1)P<0.05;与模型组比较:2)P<0.05，3)P<0.01；与内关组比较:4)P<0.05；下表同

2.2各组HRV频域指标的比较 与正常组比较，模型组各HRV频域指标(总功率、VLF、LF、HF)均明显降低(P<0.05)；与模型组比较，五参组HF指标显著升高(P<0.05)，内关组及五参+内关组各频域指标均显著升高(P<0.05或P<0.01)；与内关组比较，五参+内关组各HRV频域指标显著升高(P<0.05)。见表2。

表2 各组治疗后HRV频域指标的比较

2.3各组心肌凋亡指数的比较 与正常组(0.15±0.02)比较，模型组心肌细胞凋亡指数(0.53±0.04)明显升高(P<0.05)；与模型组比较，内关组(0.34±0.21)及五参+内关组心肌凋亡指数(0.30±0.17)显著降低(P<0.01)；五参组为0.49±0.36。

3 讨 论

心脏自主神经病变是引起DCM患者发生各种心律失常的重要原因，而HRV是国际上公认的反映心脏自主神经功能状态量化指标〔4〕。在糖尿病及其并发症的发生和发展过程中,细胞凋亡起着重要作用〔5〕。心肌细胞的损伤致使心脏传入与传出神经纤维受损，致使心脏HRV降低。本实验结果发现，五参口服液联合电针内关穴治疗DCM，明显改善了心肌缺血状态，增强了心肌细胞营养，改善了心肌细胞凋亡，由此修复了心脏传入及传出神经纤维，提高HRV指标，获得较好的临床疗效。

DCM病程长，后期常表现为气阴两虚证，经典方五参口服液由西洋参、北沙参、南沙参、丹参、苦参、三七、降香等中药组成，紧扣其病因病机辨证论治，西洋参补气滋阴清热，为治疗气阴两虚之要药，药理作用能抗心律失常、增加胰岛素敏感性及降血糖〔6〕。南北沙参养阴生津，北沙参水浸液在低浓度时，能够加强离体蟾蜍心脏的收缩，浓度高时，则抑制直至心室停博〔7〕。现代药理学研究表明，丹参改善射血分数、减少细胞凋亡方面的作用明显。苦参清心泻火，涤痰化浊，苦参中主要成分苦参碱及金雀花碱，具有“奎尼丁样效应”能降低心肌收缩力、延缓房性传导及降低自律性等作用，在实验筛选抗心律失常植物药过程中，苦参作为心悸的专用药之一应用于临床〔8〕，三七具有抗血小板集聚和溶栓的作用，能够减慢心率，对各种原因引起的心率失常都有保护作用〔7〕;降香所含黄檀素有微弱的抗凝作用，能明显增强冠状动脉血流量，减慢心率，轻度增加心跳振幅，而不会引起心律不齐〔9〕;另外，DCM属于祖国医学消渴心病范畴，归为手厥阴心包经。手厥阴心包经与心脏在生理病理上有着密切的联系。历代医家临床实践表明，当心脏发生疾病时，多取手厥阴心包经的穴位进行治疗。叶向荣等〔10〕指出，电针内关穴可以促进缺血性心肌恢复。

1刘化芋，胡志耕.气阴两虚型糖尿病心率变异性及 SCL-90的观察分析〔J〕 中西医结合心脑血管病杂志，2006;4(12)：1040-2.

2张春虹,臧伟进,徐 静.建立糖尿病心肌病动物模型方法的实验研究〔J〕.卫生研究，2006;35(6)：706-8.

3华兴邦.大鼠穴位图谱的研制〔J〕.实验动物与动物实验,1991;(1):1-5.

4中华心血管病杂志编委会心率变异性对策专题组.心率变异性检测临床应用的建议〔J〕.中华心血管病杂志，1998;26(4)：252-5.

5陈 青.糖尿病及其慢性并发症与细胞凋亡〔J〕.国外医学·内分泌学分册,2001;21(5):236-9.

6张春凤，于 敏，欧阳雪琴，等.西洋参及其提取物降血糖作用的实验研究〔J〕.中国中医药科技，2005;12(6)：353-4.

7崔金涛.三七对心血管疾病的防治作用〔J〕.中国医院药学杂志，1999;19(1)：36-8.

8高学敏，颜正华，张延模，等.中药学〔M〕.北京:中国中医药出版社，2002：35-6.

9江苏省新医学院.中国中药大辞典〔M〕.上海:上海人民出版社，1977:1560-5.

10叶向荣，张素芬.电针“内关”、“足三里”对家兔红细胞膜流动性的影响〔J〕.针刺研究，1992;17(1):42-4.

〔2016-03-30修回〕

(编辑 苑云杰/王一涵)

R587.1

A

1005-9202(2017)19-4737-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.19.020

武汉市卫生局项目(No.WZ11C06)

肖凤英(1974-)，女，副主任医师，在读博士，主要从事2型糖尿病并心血管病变研究。