let-7 miRNA 基因标志物在甲状腺癌中的表达分析

冯 琨

let-7 miRNA 基因标志物在甲状腺癌中的表达分析

冯 琨

目的 探讨let-7 miRNA 基因标志物在甲状腺癌组织中的表达及诊断意义。方法 选取临床确诊的26例甲状腺癌患者, 提取患者的甲状腺癌组织和甲状腺癌旁组织, 并采用Real-time PCR检测技术检测患者的甲状腺癌组织和甲状腺癌旁组织中let-7 miRNA基因标志物的含量, 并进行比较。结果 应用Real-time PCR检测技术发现, 甲状腺癌组织中的平均let-7 miRNA表达为(0.71±0.19), 显著低于甲状腺癌旁组织的(1.35±0.32), 比较差异具有统计学意义(t=8.769, P＜0.05)。结论 let-7 miRNA在甲状腺癌发生中具有重要意义, 可成为甲状腺癌新的基因诊断标记物以及基因治疗靶点。

let-7 miRNA；基因标志物；甲状腺癌

甲状腺癌作为内分泌系统最为常见的恶性肿瘤临床上多表现为甲状腺结节, 占甲状腺结节的5%~15%［1］。在临床中,甲状腺癌患者首选手术治疗, 鉴于甲状腺结节的高发病率,而甲状腺恶性肿瘤仅占其中极小部分, 又难以在术前进行明确的诊断, 这往往导致两种不良后果：①手术适应证和手术范围被扩大, 甲状腺被无辜切除；②这种诊断性手术的目的性不明确, 不能等同于恶性肿瘤的根治术, 留下复发隐患。因此, 在手术前甲状腺结节的病理性质明确诊断, 减少不良反应的发生具有重要意义。本文通过对比分析甲状腺癌组织以及癌旁组织中let-7 miRNA基因标志物的含量, 探讨let-7 miRNA 基因标志物在甲状腺癌组织中的表达及诊断意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年8月~2017年5月在本院内分泌科临床确诊的26例甲状腺癌患者中的癌组织以及癌旁组织作为研究资料, 其中男12例, 女14例, 年龄25~69岁, 平均年龄(49.36±9.83)岁。

1.2 组织中let-7 miRNA基因的检测 取26例甲状腺癌患者的蜡块标本, 将标本进行纯化, 并通过聚合酶链反应进行扩增后, 对其序列进行直接测量, 所得出的结果与BRAF基因组DNA正常序进行比对分析, 确定是否存在有点突变的情况发生。通过Real-time PCR检测技术, 检测上述患者的癌组织以及癌旁组织中let-7 miRNA基因标志物的含量。在实验中, 为明确PCR产物中是否存在有本研究的目标DNA片段, 研究者选取5.0 μl PCR产物与1.0 μl DNA加样缓冲液进行混合后, 通过加样处理, 将1.0 μl DNA标记物作为研究的分子对照, 在浓度为6%的聚丙烯酞胺凝胶采用电泳处理,并进行染色。将通过电泳最终确定的PCR产物通过纯化并进行测序, 而后测定癌组织以及癌旁组织中let-7 miRNA基因标志物的含量。

1.3 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件对数据进行处理。计量资料以均数±标准差s)表示, 采用t检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

应用Real-time PCR检测技术发现, 甲状腺癌组织中的平均let-7 miRNA表达为(0.71±0.19), 显著低于甲状腺癌旁组织的(1.35±0.32), 差异具有统计学意义(t=8.769, P＜0.05)。见表1。

表1 let-7 miRNA基因标志物在甲状腺癌中的表达情况比较s)

表1 let-7 miRNA基因标志物在甲状腺癌中的表达情况比较s)

注：与甲状腺癌组织比较,aP＜0.05

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3 讨论

甲状腺细针穿刺细胞学检查(FNA)在我国也正在逐步开展, 然而远未普及, 国内多数医院仍未将FNA 采纳为一种常规的术前检查项目。目前文献报道许多基因表达产物可作为FNA良、恶性结节诊断及鉴别诊断的标志物。甲状腺癌最常见的标志物包括BRAF突变和ras基因及RET/ PTC。这些基因表达产物被发现超70%乳头和滤泡甲状腺癌中存在［2］, 国内外研究显示, 这些分子标志物已用于甲状腺癌的FNA的分子诊断技术。甲状腺癌的激活编码通常位于细胞内膜表面G相关蛋白质, 传导细胞膜受体酪氨酸激酶和G偶联蛋白产生的信号, 参与MAPK、PI3K/AKT和其他受体信号通路激活［3］。

近几年, 大量研究显示, 几种miRNA在BRAF与RAS阳性的肿瘤和甲状腺乳头状癌中高表达, 而miRNA在RAS基因突变的肿瘤中也有表达。同样在甲状腺滤泡状癌中也有几种miRNA呈阳性表达。有关let-7 miRNA功能的新近研究显示［4］：在肺肿瘤以及甲状腺乳头状癌细胞增殖中, let-7 miRNA的作用与RAS蛋白表达水平下降有关。研究者发现将let-7 miRNA转入RET基因突变的甲状腺癌细胞系TPC-1后该细胞的增殖收到抑制, 并且MAPK蛋白活性也被下调［5］。另一重要发现是let-7 miRNA能够增加甲状腺细胞的分化标志物的表达, 说明let-7 miRNA在甲状腺细胞的成熟和分化中起关键作用, RET基因突变后let-7 miRNA表达的降低是细胞转变为癌细胞的重要环节［6］。本研究结果显示, 甲状腺癌组织中的平均let-7 miRNA表达为(0.71±0.19), 显著低于甲状腺癌旁组织的(1.35±0.32), 差异具有统计学意义(t=8.769, P＜0.05)。表明let-7 miRNA 在甲状腺癌发生中具有重要意义, let-7 miRNA可成为甲状腺癌新的基因诊断标记物以及基因治疗靶点［7］。换言之, let-7 miRNA是存在于甲状腺细胞中的重要的抑癌基因, 在正常甲状腺组织中表达,在甲状腺癌组织中表达下降［8］。目前为止有关let-7 miRNA在甲状腺癌乃至于其他肿瘤中作用的研究仍然处于基础研究层面, 鉴于miRNA相对于以往的肿瘤标志物有上述诸多优势, 并且出于对let-7 miRNA在甲状腺癌的诊断以及治疗方面有巨大潜力的认识, 作者认为let-7 miRNA很可能成为新的甲状腺癌标志物和新的治疗靶点。

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.19.020

2017-08-09］

150030 黑龙江省医院内分泌科