UPLC法测定紫杉醇注射液含量

宋文文 许 健 刘 雁

·实验研究·

UPLC法测定紫杉醇注射液含量

宋文文 许 健 刘 雁

目的 建立超高效液相色谱(UPLC)方法, 测定紫杉醇注射液中紫杉醇的含量。方法 采用Hypersll BDS C18 色谱柱 (2.1 mm×100.0 mm, 3 μm), 以甲醇 -水 (55∶45, V/V), 分析波长230 nm, 流速0.4 ml/min, 柱温30℃, 进样量10 μl, 等度洗脱。结果 紫杉醇在0.5~50 μg/ml范围内具有良好的线性关系(R2=0.9992), 经过方法学验证, 符合要求。结论 本实验建立的UPLC方法可以简便、快速地可用于紫杉醇的含量测定。

超高效液相色谱；紫杉醇；含量测定

紫杉醇( paclitaxel)是新型抗微管药物, 通过促进微管蛋白聚合抑制解聚, 保持微管蛋白稳定, 抑制细胞有丝分裂［1］,主要用于治疗卵巢癌、乳腺癌和非小细胞肺癌等［2］。为控制药品质量, 保障临床用药安全, 本文尝试建立超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography, UPLC)方法测定药物含量。现报告如下。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 Agilent-1290 UPLC仪, GL224i-1SCN型分析天平(德国SARTORIUS), CTH1850台式高速离心机(湖南湘立科学仪器有限公司), DW-86L578J 立式超低温保存箱(青岛海尔电器有限公司), Milli-Q Gradient A10超纯水系统(密理博贸易有限公司)。

1.2 试剂 紫杉醇标准品(纯度99.5%, 批号100382-201104,中国食品药品检定研究院), 紫杉醇注射液(批号160912,100mg, 辰欣药业有限公司), 紫杉醇空白辅料(辰欣药业有限公司), 甲醇(色谱纯, 国药集团), 超纯水(Milli-Q超纯水机制备)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Hypersll BDS C18(2.1 mm×100.0 mm,3 μm)。波长：230 nm。流动相：甲醇-水(55∶45), 流速：0.4 ml/min, 柱温 30℃ , 进样量 ：10 μl。

2.2 溶液配制 精密称取紫杉醇标准品适量置于10 ml的棕色容量瓶中, 用甲醇溶解、定容, 配置成质量浓度为50 μg/ml的紫杉醇储备液。

2.3 专属性 紫杉醇空白辅料样本, 紫杉醇对照品样本, 色谱图见图1。

图1 自上至下依次为空白辅料、紫杉醇+空白辅料样本

2.4 标准曲线 精密吸取紫杉醇储备液, 加入甲醇依次配制成 50、20、10、5、2、1、0.5 μg/ml的紫杉醇工作液 , 进样分析, 以紫杉醇质量浓度X(mg/L)对峰面积Y做回归方程为Y=0.097X+0.0031, R2=0.9992。结果表明在0.5~50 μg/ml线性关系良好, 紫杉醇的定量下限(S/N=10)为0.5 μg/ml。

2.5 精密度考察 利用紫杉醇储备液精密配制成0.5、2和10 μg/ml的质控样品, 进样分析。每个浓度的样品平行配制5份, 连续测定3 d, 计算精密度(日内和日间)。结果表明日内精密度三个质控样品的相对标准偏差(RSD)分别为6.7%、5.1%、6.8%, 日间精密度三个质控样品的RSD分别为8.3%、8.1%、7.6%。

2.6 回收率测定 空白辅料溶液中加入适量紫杉醇, 依次配置质量浓度为0.5、2和10 μg/ml的质控样品, 每个样品均平行配制6份, 进样分析。结果表明三种质量浓度质控样品的回收率分别为 (102.33±3.57)、(99.14±2.17)、(98.64±2.77)%。

2.7 稳定性试验 依次配置质量浓度为0.5、2和10 μg/ml的质控样品, 每个浓度平行配制6 份, 分别于放置24 h, 反复冻融3 次, -20℃放置1 周后依次进样测定。结果表明三种质量浓度的质控样品RSD分别为5.1%、6.3%和6.7%, 结果表明紫杉醇在上述条件下较为稳定。

3 紫杉醇注射液含量测定

精密移取紫杉醇注射液适量, 加入55%甲醇水溶液(流动相), 稀释得到质量浓度为2 μg/ml供试品溶液, 平行配置3份,进样分析, 测得紫杉醇含量为99.8%、97.9%和101.1%。

4 小结

UPLC与高效液相色谱相比, 能明显缩短分析时间［3］,大幅度提高分灵敏度, 除此之外还具有更好的分离度［4］, 故本文采用UPLC方法用于紫杉醇注射液的含量测定。外标法通过对照品浓度、峰面积和待测物的峰面积, 计算待测物浓度, 在操作简便、分析快捷的同时还能保持结果的准确性,故本实验选用外标法进行定量测定［5-10］。

综上所述, 本实验建立的UPLC方法可以简便、快捷地对紫杉醇进行含量测定分析。

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Content determination of paclitaxel injection by UPLC method

SONG Wen-wen, XU Jian, LIU Yan.Bengbu Medical College First Affiliated Hospital, Bengbu 233000, China

Objective To determine the content of paclitaxel injection by establishment of ultra performance liquid chromatography (UPLC) method.Methods The wavelength was 230nm, with flow rate of 0.4 ml/min, column temperature of 30℃, injection amount of 10 L and isocratic elution, determined by Hypersll BDS C18 chromatographic column (2.1 mm×100.0 mm, 3 μm) and methanol-water (55∶45, V/V).Results Paclitaxel had a good linear relationship in the range of 0.5~50 μg/ml (R2=0.9992), and it had been verified by the method and meets the requirements.Conclusion The UPLC method established in this experiment can be used for the determination of paclitaxel in a simple and rapid manner.

Ultra performance liquid chromatography; Paclitaxel; Content determination

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.19.109

2017-08-21］

安徽省教育厅一般项目(项目编号：KJ2015B067by)

233000 蚌埠医学院第一附属医院

刘雁