山蜡梅药材黄酮及生物碱成分TLC鉴别

江西中医药大学药学院，江西 南昌 330004

山蜡梅药材黄酮及生物碱成分TLC鉴别

钟宇婷舒任庚*
江西中医药大学药学院，江西 南昌 330004

目的分析山蜡梅药材的黄酮及生物碱成分的TLC鉴别方法。方法采用硅胶TLC法鉴别山蜡梅药材中的黄酮类和生物碱类成分，黄酮类成分采用1%三氯化铝乙醇液显色，生物碱类成分采用改良碘化铋钾试剂显色。结果分别以石油醚-乙酸乙酯-甲酸(5.5∶3.5∶0.1)和苯-乙酸乙酯-甲醇(4∶3∶1)作为山蜡梅黄酮和生物碱成分的展开剂，山蜡梅药材薄层鉴别特征明显，专属性强。结论该薄层方法可行，重复性好，可作为山蜡梅药材的薄层鉴别方法。

山蜡梅；黄酮；生物碱；薄层鉴别

山蜡梅(ChimonanthusnitensOliv.)为我国特有的蜡梅科蜡梅属植物，药用部位为其干燥叶，主要分布于江西德兴大茅山区、婺源怀玉山区及安徽徽州山区齐云山一带，为山坡、路旁、疏林中的天然植物，当地民间称之为毛山茶(江西婺源)、香风茶(安徽)[1]，具有清热解毒、祛风解表之功效，可用于防治感冒、流行性感冒及慢性支气管炎等[2]。山蜡梅叶中含有丰富的挥发油、黄酮类及生物碱类成分[3-4]。以往的研究主要集中在药材的性状鉴别、显微鉴别及挥发油成分的鉴别[5]，笔者采用TLC技术对山蜡梅中的黄酮类及生物碱类成分进行定性鉴别，以建立山蜡梅药材中黄酮及生物碱类成分的薄层鉴定方法，为山蜡梅药材质量标准的制订提供科学依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 RE-52旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；循环水式多用真空泵(苏州长城科工贸有限公司)；GZX-9140 MBF数显鼓风干燥箱(上海博讯实业有限公司)。

1.2 材料 95%乙醇溶液、乙酸乙酯、氯仿、浓氨水、石油醚、甲酸、苯、甲醇试剂均为分析纯，薄层层析硅胶GF254(山东青岛海洋化工厂)，羧甲基纤维素钠(化学纯)(国药集团化学试剂有限公司)。

山蜡梅叶，分别于2016年4月6日、5月16日、6月27日采摘自江西省婺源县晓起镇，经江西中医药大学药用植物教研室葛菲教授鉴定为蜡梅科蜡梅属植物山蜡梅(ChimonanthusnitensOliv.)。对照品山蜡梅药材购自江西省食品药品检验所。

2 方法与结果

2.1 硅胶GF254薄层板的制作 参照中华人民共和国药典[1]，称取3g羧甲基纤维素钠粉末，置于1000mL烧杯中，加入1000mL蒸馏水，80 ℃水浴加热，搅拌溶解，配制成约0.3%的羧甲基纤维素钠溶液。取一定量的硅胶GF254，倒入适量上述羧甲基纤维素钠溶液，在研钵中研磨至稀糊状，均匀铺在干燥洁净的玻璃板上，晾干，烘箱中105℃活化30min，备用。

2.2 山蜡梅药材黄酮成分的薄层色谱鉴别[6]

2.2.1 黄酮成分的提取 取新鲜山蜡梅干叶15g，粉碎，置圆底烧瓶中，加入95%乙醇溶液，用量以浸没药材表面1cm为度。水浴锅上95℃加热回流1hr.，滤过，药渣用适量95%乙醇溶液同法再提取1次，合并2次提取液，于旋转蒸发器中旋干溶剂，残留物加10mL蒸馏水，温热溶解，用10mL乙酸乙酯萃取，重复3次，合并3次EtOAc萃取液，置旋转蒸发器中旋干溶剂，加3mL甲醇至残留物中，使其完全溶解，得到山蜡梅黄酮类成分提取液供试品，备用。

取山蜡梅对照药材15g，重复上述实验，制成山蜡梅黄酮类成分提取液对照品，备用。

2.2.2 黄酮成分的薄层鉴别[6]按照薄层色谱法( 中国药典2010 版一部附录VB)标准要求，分别取上述供试品和对照品溶液点在同一块硅胶 GF254 薄层色谱玻璃板上, 以石油醚-乙酸乙酯-甲酸 (5.5∶3.5∶0.1) 为展开剂展开，晾干，喷以 1%AlCl3乙醇溶液黄酮成分专属显色剂[7]，置105 ℃烘箱中加热5min，在紫外光灯( 365 nm) 下观察，供试品与对照品在TLC上显示出有相同Rf值的黄～紫色黄酮荧光斑点。如图1所示。

2.3 山蜡梅药材的生物碱成分薄层色谱鉴别

2.3.1 生物碱成分的提取[8]取新鲜山蜡梅叶15g，粉碎，置圆底烧瓶中，加入浓氨水20mL，加塞，振摇[9]，静置30min，慢慢加入CHCl3溶液，至液面浸没药材表面1cm为止， 水浴锅上70℃加热回流1h，滤过，药渣同法再提取1次，合并两次提取液，用分液漏斗分出CHCl3层，加无水硫酸钠脱水，置旋转蒸发器中浓缩至约2mL，作为山蜡梅生物碱类成分供试品CHCl3液，备用。

取山蜡梅对照药材15g，同法制成山蜡梅生物碱类成分的对照品CHCl3液，备用。

2.3.2 生物碱成分的薄层鉴别 按照薄层色谱法( 中国药典 2010 版一部附录VB)[1]标准要求，分别用毛细管吸取上述山蜡梅生物碱类成分供试品和对照品CHCl3液，点在同一硅胶 GF254 薄层色谱玻璃板上，在双槽展开槽的另一边加入等量的二乙胺溶液使其预饱和15min，再以苯-乙酸乙酯-甲醇 ( 4∶3∶1) 为展开剂展开，自然晾干后喷以改良碘化铋钾生物碱专属显色剂，供试品与对照品在TLC上显示出有相同Rf值的红棕色生物碱斑点。如图2所示。

3 讨论

3.1 硅胶板的制作 薄层色谱法鉴别化学成分的关键在于硅胶板的制作和展开剂的选择[10]。本实验鉴别黄酮和生物碱两类成分所用的薄层板略有不同，黄酮类成分具酸性，生物碱类成分显碱性，鉴别黄酮成分的硅胶GF254薄层板仅用0.3%羧甲基纤维素钠溶液，而鉴别生物碱类成分用的硅胶GF254薄层板在制作时需要另外加入了一定量的浓氨溶液，制成碱性硅胶薄层。

3.2 展开剂的选择 层析用展开剂决定了药材中各有效成分的分离度，本实验中，黄酮成分的鉴别首先尝试了文献中报道较多的甲苯-甲酸乙酯-甲酸、苯-甲醇、氯仿-甲醇等各种比例组合液，但从结果看其分离度均不甚理想，最终发现石油醚-乙酸乙酯-甲酸(5.5∶3.5∶0.1)系统是分离山蜡梅黄酮成分较为理想的展开剂。山蜡梅生物碱成分的鉴别首先尝试了氯仿-丙酮、氯仿-苯等文献记载的各种比例混合液，但最终发现分离山蜡梅生物碱最理想的溶剂系统是苯-乙酸乙酯-甲醇(4∶3 ∶1)。这两个展开剂系统分别分离山蜡梅药材中的黄酮和生物碱类成分分离效果好，斑点清晰可见，结果重现性好。

综上，实验寻找到硅胶薄层层析法分离山蜡梅药材中黄酮和生物碱两类有效成分的展开剂系统，黄酮和生物碱相对于药材中的另一大类有效成分-挥发油，具有稳定性好、不易变化等特点，以此作为山蜡梅药材的定性鉴别，方法简便快速、重现性好、专属性高等优点，可用作药材质量标准的制定。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010.

[2]王国强.全国中草药汇编[M].3版.北京:人民卫生出版社，2014.

[3]舒任庚，李莎莎，胡浩武.山蜡梅化学成分研究[J].中国药学杂志，2010(15):1134-1135.

[4]胡文杰，杨书斌.山蜡梅化学成分及其药用研究进展[J].江西林业科技，2008，10(6):59-61

[5]舒任庚,李莎莎,张普照.采收时间及提取方法对山蜡梅挥发油成分的影响[J].中国医院药学杂志，2010,30(9):761-765.

[6]李广，王清光，王义明，等.黄酮类化合物的定量色谱分析[J].食品科学，2001，22(2)57-61.

[7]马陶陶，张群林，李俊，等.三氯化铝比色法测定中药总黄酮方法的探讨[J].时珍国医国药，2008，19(1)：51-56.

[8]周文华，杨辉荣，岳庆磊.生物碱提取和分离方法的研究新进展[J].当代化工，2003，32(2):111-114.

[9]罗勇慧.广金钱草黄酮和生物碱成分薄层色谱鉴别的研究[J].广东药学院学报，2004，20(6)：596-597.

[10]曾镇广.薄层色谱中展开剂的选择[J].学术教育，2010(7)：140.

StudyonTLCIdentificationMethodsfortheFlavonoidsandAlkaloidsofChimonanthusNitensOliv

ZHONG Yuting SHU Rengeng*

College of Pharmacy, Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nangchang 330004, China

ObjectiveTo establish a TLC identification method for the flavonoids and alkaloids of theChimonanthusNitensOliv.Methodsflavonoids and alkaloids ofChimonanthusNitensOliv were application identified by Silica gel TLC, flavonoids were treated with 1% AlCl3ethanol solution, alkaloids were stained with improved bismuth potassium iodide reagent.ResultTLC identification for flavonoids and alkaloid components ofChimonanthusNitensOliv. was high specific with petroleum ether -ethyl acetate - formic acid (5.5∶3.5∶0.1) and benzene - ethyl acetate-methanol(4∶3∶1)as the deployment system, respectively.ConclusionThe established method is feasible and reproducible and could be used asChimonanthusNitensOliv. identification.

ChimonanthusNitensOliv; Flavonoid; Alkaloid; TLC

R284

A

1007-8517(2017)17-0009-03

2017-06-30 编辑：陶希睿)

国家自然科学基金资助项目(81360631)；江西省科技支撑计划资助项目(2010BSA17600)。

钟宇婷(1993-)，女，汉族，硕士研究生，研究方向为中药学。

舒任庚(1964-)，男，汉族，博士，教授，研究方向为中药学。E-mail: shurg@163.com