甜叶菊中甜菊苷与瑞鲍迪苷A含量测定方法研究

程玉柱++夏运喜++秦玉华++马晶晶++刘翠玲++符俊峰

摘要 采用反相高效液相色谱法测定甜叶菊中甜菊苷和瑞鲍迪苷A含量，研究测定方法的精密度、线性关系、重复性、稳定性、准确度。研究结果显示，甜菊苷和瑞鲍迪苷A在0.25～2.50 mg/mL范围内与峰面积呈较好的线性相关关系；甜菊苷和瑞鲍迪苷A的加样回收率分别为97.3%和98.6%，RSD分别为2.4%和2.6%。本測定方法快速灵敏、准确可靠，可用于甜叶菊中甜菊苷和瑞鲍迪苷A的质量控制。

关键词 甜叶菊；甜菊苷；瑞鲍迪苷A；高效液相色谱法

中图分类号 R284.1；O657.7+2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）19-0250-01

甜叶菊（Stevia rebaudiana）又名甜菊、甜草，是菊科多年生草本野生植物。甜叶菊含有甜叶菊糖苷，其成分有4种：A苷、A3苷、C苷、D-R苷，其中A苷和A3苷为主要成分。甜叶菊糖苷具有低热量、高甜度、无毒、无副作用等特点，是一种天然甜味剂。此外，甜叶菊糖苷还具有一定的药理作用，对糖尿病、冠心病、高血压、小儿龋齿、肥胖症等病症有很好疗效[1-2]。本研究采用高效液相色谱法测定甜叶菊中甜菊苷和瑞鲍迪苷A含量，为更好地控制甜叶菊质量提供了参考依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

1.1.1 试验仪器。试验仪器有SPD-20A高效液相色谱仪（日本岛津）、电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）、电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。试验材料为甜叶菊，产自安徽省阜阳市。试验试剂有甜菊苷和瑞鲍迪苷A对照品（含量99%）、磷酸（上海苏懿化学试剂有限公司）、乙腈（Tedia Company，Inc）。

1.1.2 色谱条件。色谱柱为C18柱（2.7 μm，150 mm×4.6 mm），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（30∶70），流速为1.0 mL/min，柱温为40 ℃，检测波长为210 nm，进样量为10 μL[3-4]。

1.1.3 对照品溶液的制备。准确称取甜菊苷对照品10.58 mg和瑞鲍迪苷A对照品10.84 mg，将其分别置于10 mL容量瓶中，加水使样品完全溶解并定容至刻度，摇匀。制备甜菊苷对照品溶液和瑞鲍迪苷A对照品溶液的浓度分别为1.047、1.073 mg/mL。

1.1.4 供试品溶液的制备。甜叶菊样品粉碎后，称取1.013 6 g于100 mL圆底烧瓶中，加水50 mL，微沸中回流2 h，放置室温后离心，取上清液用水定容、摇匀，经0.45 μL的滤膜过滤后可得甜叶菊溶液。

1.2 研究方法

1.2.1 精密度试验。分别吸取甜菊苷和瑞鲍迪苷A对照品溶液各10 μL，重复进样5次，测定对照品峰面积[5]。

1.2.2 线性关系考察。准确称取甜菊苷对照品126.8 mg置于25 mL容量瓶中，加水使其完全溶解并定容至刻度，摇匀，所得甜菊苷对照品溶液的浓度为5.021 3 mg/mL，作为储备液。分别准确量取储备液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL于10 mL容量瓶中，加水并定容至刻度，摇匀，所得浓度分别为0.251 1、0.502 2、1.004 4、1.506 6、2.008 8、2.511 0 mg/mL。使用同样的方法准确称取瑞鲍迪苷A对照品126.5 mg，制得浓度分别为0.250 5、0.501 0、1.002 0、1.503 0、2.004 0、2.505 0 g/mL。再分别吸取上述溶液10 μL进样，测定峰面积，逐一记录数据。

1.2.3 重复性试验。取同一甜叶菊样品6份，按上述方法制备6份供试品溶液，测定峰面积。

1.2.4 稳定性试验。准确吸取同一供试品溶液10 μL，分别在0：00、4：00、8：00、12：00、18：00、24：00进样，测定甜叶菊中甜菊苷和瑞鲍迪苷A峰面积。

1.2.5 准确度试验。准确称取同一甜叶菊样品6份，每份约0.25 g，加入适量的甜菊苷和瑞鲍迪苷A对照品，加水50 mL，微沸中回流2 h，放置室温后离心，取上清液用水定容、摇匀，经0.45 μL的滤膜过滤后可得甜叶菊溶液。分别进样分析，计算回收率[6]。

2 结果与分析

由精密度试验可知甜菊苷和瑞鲍迪苷A对照品峰面积RSD分别为1.1%和1.2%，表明仪器精密度良好。

线性关系考察试验中，以进样浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归分析，甜菊苷和瑞鲍迪苷A的进样浓度与峰面积的相关系数r分别为0.999 6和0.999 8。表明甜菊苷和瑞鲍迪苷A浓度含量在0.25～2.50 mg/mL范围内与峰面积呈较好的线性关系。

由重复性试验可知，甜菊苷和瑞鲍迪苷A的峰面积RSD均<2.1%，表明该方法重复性较好。

由稳定性试验可知，甜叶菊中甜菊苷和瑞鲍迪苷A峰面积RSD分别为1.4%和1.3%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

准确度试验结果如表1所示。甜菊苷的平均回收率为97.3%，RSD为2.4%（n=6）；瑞鲍迪苷A的平均回收率为98.6%，RSD为2.6%（n=6），说明该方法可行。

3 结论

本试验所测甜菊苷和瑞鲍迪苷A的最大吸收波长在 210 nm处。试验发现用乙腈-水作为流动相时，甜菊苷和瑞鲍迪苷A不能分离。用0.1%磷酸溶液代替纯水，乙腈与 0.1%磷酸溶液体积比为30∶70，能使甜菊苷和瑞鲍迪苷A较好分离。本研究采用反向高效液相色谱法测定甜叶菊中甜菊苷和瑞鲍迪苷A的含量，试验的精密度、线性关系、重复性、稳定性、准确度均表现良好，为更加好地控制甜叶菊质量提供了参考依据。

4 参考文献

[1] 丁宁，郝再彬，陈秀华，等.甜叶菊及其糖苷的研究与发展[J].上海农业科技，2005（4）：8-10.

[2] 袁艺.甜叶菊及其糖苷的研究与发展探索[J].食品界，2016（4）：76-77.

[3] 朱吟吟，周凌.高效液相色谱法测定甜叶菊中的3个甜菊醇糖苷的含量[J].药物分析杂志，2014（1）：184-189.

[4] 吴岩，杨长志，刘永，等.高效液相色谱法测定甜叶菊粗糖苷中甜菊苷的含量[J].食品工业科技，2007（7）：214-215.

[5] 彭应枝，周芳，董界，等.反相高效液相法测定甜叶菊中莱鲍迪苷A和甜菊糖苷的含量[J].中南药学，2013（9）：700-702.

[6] 闫莉，何巧丽，周晓英.高效液相色谱法测定新疆地区甜叶菊中甜菊苷和莱鲍迪苷A的含量[J].新疆医科大学学报，2016，39（11）：1444-1446.