醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质实验材料比较

武 洋，李颜敏

（1.甘肃医学院，甘肃 平凉 744000；2.南方医科大学，广东 广州 510515）

醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质实验材料比较

武 洋1，李颜敏2

（1.甘肃医学院，甘肃 平凉 744000；2.南方医科大学，广东 广州 510515）

在医学院校，醋酸纤维薄膜电泳实验以其分离速度快、区带清晰、操作简单等优点，深受教师的欢迎，很多学校都有此项实验。但人血清存在致病风险，近年来，医学院校因学生操作失误等原因，造成学生感染疾病的事件屡见不鲜，本实验选择兔血清和鸡蛋卵蛋白两种实验材料，与人血清做出的实验结果进行对比。最终认为兔血清作为实验材料更接近人血清做出的结果，并具有一定的安全性，因此，兔血清是本实验较为理想的实验材料。但如果是药学等专业，只学习电泳技术，鸡蛋卵蛋白比较好制备，也是一个较好的实验材料。

醋酸纤维薄膜电泳法；蛋白质；实验材料

醋酸纤维薄膜电泳可将人血清蛋白分为：清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白5条区带，固定染色之后，可看到清晰的色带，还可用光密度计扫描进行定量测定，计算出各种蛋白的构成百分比。

由于试剂盒中的标准血清做出的效果不好，不能清晰地看到5条区带，因此，该实验必须采用人血清。众所周知，人血清存在致病风险，近年来，医学院校因学生操作失误等原因，造成学生感染疾病的事件屡见不鲜，因此，选择一种能与人血清做出实验结果相近又较为安全的材料，是医学院校教师较为关注的一个问题。

本实验选择了兔血清和鸡蛋卵蛋白两种实验材料，与人血清做出的实验结果进行对比，现介绍如下。

1 实验流程

1.1 实验仪器

DYY－6C型电泳仪、DYCP－388型电泳槽（北京市六一仪器厂）、乙酸纤维素薄膜（2×8 cm，厚度约100 μm，台州市路桥四甲生化塑料厂），铅笔，尺子，烧杯，滤纸，镊子。

1.2 实验试剂

巴比妥－巴比妥钠缓冲液（pH8.6，离子强度 0.06）；偶氮胭脂红染液（偶氮胭脂红B0.75 g，加甲醇50 ml、醋酸 10 ml、加蒸馏水40 ml混匀）；漂洗液（乙醇45 ml、冰乙酸5 ml、蒸馏水50 ml，混匀）；透明液（石蜡）。

1.3 实验材料

人血清、兔血清、鸡蛋清（1倍蒸馏水稀释）。

1.4 实验步骤

本实验参照了韩昌洪[1]、薛莉珠[2]和北京大学生物系生物化学教研室[3]的实验方法。

将浸泡了20分钟的乙酸纤维素薄膜在粗糙面一端1.5 cm处画上点样线，将3种样品分别点在3个薄膜的点样线上，倒置于纱布做成的盐桥上，点样端至于负极，并与盐桥有一定距离，待平衡好后，接通电源，电压选择150 V，时间为50分钟。

电泳结束后，关闭电源，取出薄膜，在染色液中浸泡5分钟，取出用漂洗液洗至背景无色，再用蒸馏水浸泡。

2 实验结果

3种样品的实验结果见图1。

图1 3种材料电泳图谱

从图1中可以看出，应用醋酸纤维膜电泳法可将人和兔血清蛋白质分为5条区带，从正极到负极依次为清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和 γ-球蛋白[4-5]。经过漂洗、透明后以鸡蛋清作为材料的薄膜上呈现清晰的5～6条区带，由正极起依次为清蛋白、T1-球蛋白、T2-球蛋白、U1-球蛋白、U2-球蛋白、V-球蛋白[6]。

3 结语

通过实验结果可以看出，兔血清作为实验材料更接近人血清做出的结果，而且兔子是医学院校常用动物，比较常见，具有一定的安全性，因此，兔血清是本实验较为理想的实验材料。但如果是药学等专业，只学习电泳技术，鸡蛋卵蛋白比较好制备。

[1]韩昌洪．生物化学[M]．北京：人民卫生出版社，2005．

[2]薛莉珠．生物化学实验[M]．北京：中国医药科技出版社，1998．

[3]北京大学生物系生物化学教研室．生物化学实验指导[M]．北京：高等教育出版社，1986．

[4]丁正梁，舒家模，王楠田，等．各种实验动物的血清蛋白电泳值[J]．上海实验动物科学，1984，4（1）：43-47．

[5]陈书明，曹新鹏，胡军，等.6种血清的醋酸纤维素薄膜电泳分析[J]．山西农业科学，2010（6）：18-20．

[6]董彩霞，黄建华，祝勇，等.醋酸纤维素薄膜电泳分离禽卵蛋白质[J]．光谱实验室，2007，24（5）：800-802．

G424.31

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1671-1246（2017）24-0084-02