甘肃地区453例宫颈鳞癌患者人乳头瘤病毒（HPV）感染亚型及其年龄分布的研究

周庆云，赵 洁，王梓欣，王东存，孙建平

（甘肃省妇幼保健院，甘肃 兰州 730050）

甘肃地区453例宫颈鳞癌患者人乳头瘤病毒（HPV）感染亚型及其年龄分布的研究

周庆云，赵 洁，王梓欣*，王东存，孙建平

（甘肃省妇幼保健院，甘肃 兰州 730050）

目的 研究甘肃地区宫颈鳞癌患者感染人乳头瘤病毒（HPV）的基因亚型及其年龄分布特点，为甘肃地区临床防治宫颈癌、制订适合我国临床遵循的宫颈癌筛查相关指南、研制适合本地区的预防性HPV疫苗提供流行病学资料。方法 采用医用核酸分子快速导流杂交基因芯片技术（Hybrimax），对453例甘肃省内经我院病理确诊为宫颈鳞癌患者的宫颈脱落细胞进行21种HPV亚型感染检测，研究人乳头瘤病毒感染亚型与宫颈鳞癌的相关性。结果 宫颈鳞癌患者中35岁以下所占比例最少，为5．30%，45～54岁的占比最多，为46．36%；453例宫颈鳞癌患者中有435例HPV阳性，阳性率96．03%；共检测到17 种 HPV 亚 型 ， 其 中 高 危 型 13 种（HPV16、HPV18、HPV58、HPV33、HPV31、HPV52、HPV68、HPV39、HPV51、HPV53、HPV45、HPV56、HPV59），低危型 4 种（HPV44、HPV42、HPV43、HPV81），未检测到 HPV35、HPV66、HPV6、HPV11 亚型；HPV16 感染率最高，为 77．01%，其次为 HPV18（6．44%）、HPV58（5．98%）、HPV33（3．22%）；HPV 单一感染 386 例，感染率为88．74%（386/435）。结论 甘肃地区宫颈鳞癌高发年龄为45～54岁，35岁以下患者最少；高危型HPV16、HPV18、HPV58、HPV33是甘肃地区宫颈鳞癌的主要感染亚型，特别是HPV16单一感染可能更易导致宫颈鳞癌的发生。

宫颈鳞癌；人乳头瘤病毒；基因亚型；年龄

宫颈癌是严重威胁女性生命和健康的恶性肿瘤之一，发病率仅次于乳腺癌，在全球妇女癌症死亡率中居第二位，在一些发展中国家甚至居首位。目前已经明确高危型人乳头瘤病毒（HPV）的持续感染是宫颈癌的病因[1]。其中HPV16、HPV18与世界上70%的浸润性宫颈癌相关[2－3]。本研究通过检测甘肃省内宫颈鳞癌患者感染人乳头瘤病毒（HPV）的基因亚型及年龄分布特点，以探讨不同基因亚型HPV感染的致癌性，对本地区妇女宫颈癌的早期筛查、早期发现和早期诊治具有重要价值，可为HPV疫苗的研制开发提供科学依据，现介绍如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

2014年5月—2017年2月在甘肃省妇幼保健院妇科门诊和住院，未经放疗、化疗，经我院病理确诊为宫颈鳞癌的患者共453例，年龄26～79岁，平均年龄49．08岁，均为已婚妇女，来源于甘肃省内。取患者的宫颈脱落细胞进行21种HPV基因亚型感染检测。

1.2 仪器与试剂

主要包括HPV－DNA提取试剂盒，PCR扩增仪，Hybrimax医用核酸分子快速杂交仪，人乳头瘤病毒基因微阵列分型检测试剂盒（均由香港凯普公司提供）。

1.3 标本采集和保存

采用窥阴器充分暴露宫颈，用棉拭子擦去宫颈口过多的分泌物，用凯普公司配套专用宫颈刷置于宫颈口，沿顺时针旋转5周，慢慢抽出，以获得足够的移行区上皮细胞样本，放入3 ml专用细胞保存液中，沿刷柄折痕处将宫颈刷柄折断，旋紧管盖，做好样本标记，立即送检或放入4℃冰箱中，3天内检验。

1.4 检测方法

HPV基因分型检测步骤：（1）样本DNA提取：取样本500 μl，以14 000 r/min离心1分钟，弃上清液后，用凯普公司试剂盒提取DNA。（2）PCR扩增：将PCR反应试剂及Taq酶按比例混合后加入24 μl至反应管，再加入DNA模板1 μl，混匀后进行PCR扩增。每一批同时扩增HPV18型阳性对照及阴性对照各一份。（3）核酸分子快速导流杂交：采用凯普医用核酸分子快速导流杂交仪（Hybrimax）及配套试剂盒，在杂交平台上放入标记有21种HPV基因型寡核苷酸探针的低密度基因芯片杂交膜，按试剂盒说明进行导流杂交，酶标显色。（4）结果判断：肉眼观察检测结果，阳性点为清晰可见的蓝紫色圆点，根据膜条HPV亚型分布图，判断阳性点为何种HPV病毒亚型。本检测将HPV分为21种亚型，其中15种为高危亚型：HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68，6 种 为 低 危 亚 型 ：HPV6、HPV11、HPV42、HPV43、HPV44、HPV81。有两型或两型以上者为多重感染，对多重感染者，各亚型的阳性率重复计算。

1.5 统计学方法

采用SPSS13．0统计软件对数据进行统计学分析，以百分率作为HPV感染的评价指标，HPV检出率采用χ2检验，P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈鳞癌患者年龄分布

在453例26～79岁的宫颈鳞癌患者中，小于35岁所占比例最少，为 5．30%；45～54 岁所占比例最多，为 46．36%，见表 1。

表1 宫颈鳞癌患者年龄分布

2.2 宫颈鳞癌HPV感染亚型分布

453例宫颈鳞癌患者中，有435例HPV阳性，阳性率96．03%。21种HPV亚型共检测到17种，其中高危型13种（HPV16、HPV18、HPV58、HPV33、HPV31、HPV52、HPV68、HPV39、HPV51、HPV53、HPV45、HPV56、HPV59），低危型 4 种（HPV44、HPV42、HPV43、HPV81），未检测到 HPV35、HPV66、HPV6、HPV11 亚型。感染HPV16的共343例，感染率最高，占78．85%（343/435），其他亚型感染率由高到低依次为 HPV18、HPV58、HPV33、HPV31、HPV52、HPV68、HPV39、HPV51、HPV53、HPV45、HPV56、HPV59、HPV44、HPV81、HPV42、HPV43，见表 2。

表2 435例HPV阳性标本中各基因亚型分布

2.3 HPV单一感染和多重感染与宫颈鳞癌的关系

本研究中HPV阳性患者共435例，其中单一感染386例，占 88．74%（386/435）。在多重感染的 49 例（11．26%）中，二重感染最多见，为46例，占多重感染的93．88%，最常见的是HPV16型合并其他亚型的二重感染，共39例，占多重感染的79．59%（39/49）；三重感染3例，其中2例是HPV16型合并其他亚型的感染，检测出的低危亚型均与高危亚型合并感染。宫颈鳞癌HPV感染主要亚型的单一感染与多重感染比较，差异有统计学意义（P＜0．05），见表 3。

表3 宫颈鳞癌HPV感染主要亚型的单一感染与多重感染情况[n（%）]

3 讨论

大量流行病学和分子生物学研究资料表明，HPV与宫颈癌及癌前病变密切相关[4]。现已发现两百多种亚型的HPV，根据其致病性的差异，将其分为高危型和低危型两大类[5]，长期持续感染高危型可以致癌，危及生命。在本研究中，宫颈鳞癌HPV阳性率为96．03%，低危亚型仅检出6例，并且均与高危亚型HPV16合并感染，充分证实了只有感染高危亚型HPV才会引发宫颈癌的观点。

3.1 宫颈鳞癌年龄分布有一定地域性

大多数宫颈鳞癌患者的诊断年龄为45～50岁，年龄范围17～90岁[6]。本研究中年龄45～54岁宫颈鳞癌患者在所有患者中占46．36%，接近一半，与文献结果一致。近年来人们越来越认识到宫颈癌可以发生在35岁以下的女性中，在美国，浸润性宫颈癌的所有患者中，35岁以下患者占22．1%[6]。本研究中35岁以下宫颈鳞癌患者的占比最少，仅为5．30%，远低于美国的患病率，说明35岁以下女性宫颈癌患病率存在种族差异及地域性。美国2012年宫颈癌筛查指南中，对象为30岁以上妇女[7]，是否适用于我国有待进一步研究。

3.2 宫颈鳞癌组织中主要感染的HPV亚型存在地理差异

亚洲妇女宫颈癌中常见HPV亚型最新报道显示[8]：在西亚和东亚地区，HPV16和HPV18亚型是感染率最高的前两位。其他常见的HPV感染亚型排序有所差异。在西亚地区，HPV45、HPV33、HPV31、HPV35、HPV58、HPV52、HPV56 和 HPV59 为继HPV16和HPV18亚型后最常见的8种HPV亚型；而在东亚地区，则 为 HPV58、HPV33、HPV52、HPV45、HPV31、HPV59、HPV39、HPV35。本研究显示，宫颈鳞癌患者感染了17种HPV亚型，主要是 HPV16、HPV18 及 HPV58、HPV33、HPV31、HPV52、HPV68、HPV39、HPV51、HPV53，主要感染亚型与文献报道基本一致，符合东亚人群研究结果。近年国内喻朝霞等[9]报道南方地区宫颈鳞癌患者HPV主要感染亚型依次为HPV16、HPV18、HPV33、HPV58、HPV31、HPV52、HPV59、HPV45；陶萍萍等[10]报道北京宫颈癌患者 HPV主要感染亚型依次为 HPV16、HPV18、HPV52、HPV58、HPV33。这说明国内南方及北方不同地区宫颈癌主要感染亚型存在一致性，同时也存在一定的地理差异。在我们的研究资料中，宫颈鳞癌主要感染亚型为HPV16、HPV18，与国内研究结果具有一致性，其他亚型排序均不同，有一定的地域性，值得重视。

3.3 单一感染较多重感染更有可能增加宫颈鳞癌的发病率

HPV的多重感染是否会促进宫颈癌的发生目前研究观点不一致，有学者认为多重感染并不增加宫颈癌的发病率[4]；但也有学者认为多重感染可促进宫颈癌的发生，并使治疗棘手[11]。本研究中，宫颈鳞癌单一感染和多重感染比为7．88∶1，单一感染明显高于多重感染，宫颈鳞癌HPV感染主要亚型单一感染与多重感染比较，差异有统计学意义（P＜0．05），与第一种观点一致。在一定程度上说明单一感染对宫颈鳞癌的发展起促进作用，但其具体的作用机制仍需要进一步研究。

Clifford等[12]发现HPV16在宫颈浸润癌（SCC）患者中的检出率是在LSIL（低度鳞状上皮内病变）中检出率的2倍，HPV18是1．5倍，说明感染HPV16、HPV18更易进展为宫颈浸润癌。研究资料表明，HPV16的感染由于清除率降低可能更易导致持续性感染，发生CINⅡ、CINⅢ，甚至SCC[13]。本研究宫颈鳞癌中HPV16感染率高达77．01%，且HPV单一感染占居首位，表明甘肃地区HPV16单一感染可能更易导致宫颈鳞癌的发生。因此对于HPV感染患者，不仅要重视其是否已经发生宫颈病变，积极进行临床治疗，还要重视其所感染的HPV具体亚型，特别应对感染HPV16亚型的患者密切随诊，以便及早发现异常、及早干预，有效降低宫颈癌的发生。

中国幅员辽阔，不同地区及民族宫颈癌的HPV主要感染亚型不同。明确一个地区HPV致癌的主要亚型，可根据感染亚型预测病情进展，评估预后，指导临床医生制订合理的诊治方案，避免过度诊断及治疗，同时为研制适合中国乃至本地区易感人群的HPV疫苗提供流行病学资料。

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R195

B

1671－1246（2017）24－0109－03

（*

王梓欣）