胎膜早破患者血清白细胞计数、C反应蛋白、白介素22及其受体表达与绒毛膜羊膜炎的关系

王俊兰++++++朱艳红++++++周新+++++王玉贞

[摘要] 目的 探討胎膜早破患者血清中白介素22（IL-22）、白介素22受体1（IL-22R1）、C反应蛋白（CRP）、白细胞（WBC）表达与绒毛膜羊膜炎的关系。方法 选择2016年10月～2017年9月沧州市妇幼保健院（以下简称“我院”）收治的100例胎膜早破患者作为研究对象。根据有无绒毛膜羊膜炎及感染程度分为临床绒毛膜羊膜炎组（38例）、亚临床绒毛膜羊膜炎组（33例）和无绒毛膜羊膜炎组（29例），另随机选择我院同期收治的30例正常足月妊娠孕妇作为对照组。比较四组孕妇血清中IL-22、IL-22R1、CRP、WBC水平，并用ROC曲线分析各指标对绒毛膜羊膜炎的诊断价值。 结果 血清中WBC：临床绒毛膜羊膜炎组、亚临床绒毛膜羊膜炎组、无绒毛膜羊膜炎组均高于对照组，临床绒毛膜羊膜炎组高于亚临床绒毛膜羊膜炎组和无绒毛膜羊膜炎组，差异均有统计学意义（P < 0.05），亚临床绒毛膜羊膜炎组高于无绒毛膜羊膜炎组，但差异无统计学意义（P > 0.05）；血清中CRP、IL-22和IL-22R1蛋白：临床绒毛膜羊膜炎组、亚临床绒毛膜羊膜炎组、无绒毛膜羊膜炎组均高于对照组，临床绒毛膜羊膜炎组高于亚临床绒毛膜羊膜炎组和无绒毛膜羊膜炎组，亚临床绒毛膜羊膜炎组高于无绒毛膜羊膜炎组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。四组患者血清中WBC、CRP、IL-22、IL-22R1的曲线下面积分别为0.717、0.778、0.909、0.916（P = 0.049、0.028、0.000、0.000）。 结论 IL-22、IL-22R1、CRP、WBC等指标在预测胎膜早破并发绒毛膜羊膜炎方面均有一定临床意义，且IL-22和IL-22R1预测价值最高，尤其是在预测亚临床绒毛膜羊膜炎患者方面。

[关键词] 胎膜早破；绒毛膜羊膜炎；白细胞计数；C反应蛋白；白介素22受体1

[中图分类号] R714.433 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）11（b）-0075-04

[Abstract] Objective To investigate the relationship between expression of IL-22， IL-22R1， CRP and WBC in serum of patients with premature rupture of membranes and chorioamnionitis. Methods A total of 100 patients with premature rupture of membranes who were treated in Cangzhou Maternal and Child Health Care Hospital （"our hospital" for short） from October 20 to September 2017 were selected as subjects， and they were divided into clinical chorioamnionitis group （38 cases）， subclinical chorioamnionitis group （33 cases） and no chorionic amnioticitis group （29 cases） according to whether infected with chorioamnionitis and infection degree. Another 30 cases of normal full-term pregnant women in our hospital were randomly selected as a control group. The serum levels of IL-22， IL-22R1， CRP and WBC of pregnant women in four groups were tested. The diagnostic value of each index by ROC curve were analyzed. Results Serum WBC： clinical chorioamniositis group， subclinical chorioamnitis group， chorionic amniotic inflammation group were higher than the control group. Clinical chorioamniositis group was higher than subclinical chorioamniositis group （P < 0.05）， while without significant difference between the subclinical chorioamnionitis group and the chorionic amniotic group （P > 0.05）. Serum CRP， IL-22 and IL-22R1： the levels of them in the clinical chorioamniositis group， subclinical chorioamnionitis group and no chorionic amniotic inflammation group were higher than those in the control group. The levels in the clinical chorioamnitis group was higher than subclinical chorioamnionitis group and no chorionic amniotic inflammation group （P < 0.05）. There was also a remarkable difference between the subclinica chorioamniositis group and no chorionic amniotic inflammation group （P < 0.05）. The area under the curve （AUC） of WBC， CRP， IL-22 and IL-22R1 in the serum of the four groups was 0.717， 0.778， 0.909 and 0.916 （P = 0.049， 0.028， 0.000 and 0.000）. Conclusion There is a definite clinical significance of IL-22， IL-22R1， CRP， WBC in the prediction of premature rupture of membranes with chorioamniositis， of which IL-22 and IL-22R1 has the highest predict value， especially in the prediction of patients with subclinical chorioamnionitis.endprint

[Key words] Premature rupture of membranes； Chorioamniositis； WBC； CRP； IL-22； IL-22R1

胎膜早破（premature rupture of membranes，PROM）是妊娠晚期的常见并发癥，可导致早产、宫内感染、产褥感染以及绒毛膜羊膜炎等疾病，是母婴患病和死亡的重要原因之一[1-2]。绒毛膜羊膜炎由胎膜破裂后多种微生物上行感染引起，感染率随破膜时间增加而越高[3]，常引起宫内感染、新生儿败血症、新生儿脑损伤等不良母婴结局[4]。其临床症状在早期并不明显，常出现在感染晚期，因此许多无症状的亚临床绒毛膜羊膜炎难以及时诊断并发现，延误治疗时机。所以早期诊断亚临床绒毛膜羊膜炎至关重要，寻求能够早期、准确的相关临床预测指标已成为热点问题。白细胞计数（white blood cell，WBC）以及C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）是目前临床最常用的预测感染的指标之一，但其预测特异性相对较差。近年来利用细胞因子的变化来预测绒毛膜羊膜炎的发生和发展己成为临床研究的焦点，尤其是白细胞介素与绒毛膜羊膜炎关系的研究较多，包括IL-1、IL-6、IL-8等[5-6]。白介素22（interleukin-21，IL-22）也是白细胞介素家族的重要成员，由Th22细胞分泌，与受体IL-22R1组成的受体复合物相结合发挥生物学作用。众多研究表明，IL-22/IL-22R1也可通过STAT信号通路参与炎性反应[7]，但是其与胎膜早破并发绒毛膜羊膜炎的关系研究较少，因此本文将对IL-22、IL-22R1、CRP、WBC等指标与绒毛膜羊膜炎的关系进行研究，探讨IL-22/IL-22R1能否成为预测胎膜早破合并绒毛膜羊膜炎的新指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年10月～2017年9月沧州市妇幼保健院（以下简称“我院”）收治的100例胎膜早破患者作为研究对象。根据有无绒毛膜羊膜炎及感染程度分为临床绒毛膜羊膜炎组（38例）、亚临床绒毛膜羊膜炎组（33例）和无绒毛膜羊膜炎组（29例），另随机选择我院同期收治的30例正常足月妊娠者作为对照组。所有受试者均对研究内容知情并自愿签署同意书，且该研究经医院医学伦理委员会批准。四组孕妇在年龄、孕龄以及孕时BMI等一般资料比较差异无统计学意义（P > 0.05）。见表1。

1.2 方法

1.2.1 胎膜早破诊断标准 符合以下三条标准中任意一条即可诊断为胎膜早破：①可见液体从宫颈口流出或阴道后穹隆积液中见到胎脂、胎毛或胎儿上皮细胞；②宫颈流出液pH>6.5；③阴道后穹隆涂片镜检见羊齿状结晶[8]。

1.2.2 绒毛膜羊膜炎诊断标准 血常规检查白细胞增多，孕妇伴有发热，母、儿均有心率加快现象；CRP升高>8 mg/L。并伴有以下两条之一：①阴道液有臭味，子宫压痛；②胎膜病理切片光学显微镜下每高倍视野中性粒细胞浸润11个以上[9]。

1.2.3 标本采集及处理 所有受试者于分娩前用真空采血管肘静脉取血两管，每管3 mL，一管送到检验科检测孕妇血清中WBC和CRP水平；一管在室温下静置30 min，然后3000 r/min离心10 min，分离血清，-20℃保存，用于ELISA检测。

1.2.4 IL-22、IL-22R1检测 采用ELISA法检测血清IL-22、IL-22R1蛋白表达。ELISA试剂盒购自武汉华美生物工程有限公司。实验操作严格按照试剂说明书进行操作。

1.3 统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验；各指标对绒毛膜羊膜炎的诊断价值分析采用ROC曲线分析，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 四组孕妇血清WBC、CRP、IL-22、IL-22R1表达水平的比较

血清中WBC：临床绒毛膜羊膜炎组、亚临床绒毛膜羊膜炎组、无绒毛膜羊膜炎组均高于对照组，临床绒毛膜羊膜炎组高于亚临床绒毛膜羊膜炎组和无绒毛膜羊膜炎组，差异均有统计学意义（P < 0.05），亚临床绒毛膜羊膜炎组高于无绒毛膜羊膜炎组，但差异无统计学意义（P > 0.05）；血清中CRP、IL-22和IL-22R1蛋白：临床绒毛膜羊膜炎组、亚临床绒毛膜羊膜炎组、无绒毛膜羊膜炎组均高于对照组，临床绒毛膜羊膜炎组高于亚临床绒毛膜羊膜炎组和无绒毛膜羊膜炎组，亚临床绒毛膜羊膜炎组高于无绒毛膜羊膜炎组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。见表2。

2.2 ROC曲线分析

根据实验结果将所有胎膜早破患者分为绒毛膜羊膜炎组和非绒毛膜羊膜炎组，然后对患者血清WBC、CRP、IL-22、IL-22R1等指标进行ROC分析。结果显示患者血清中WBC、CRP、IL-22、IL-22R1的曲线下面积（AUC）分别为0.717、0.778、0.909、0.916（P = 0.049、0.028、0.000、0.000），说明四项指标在诊断胎膜早破患者合并绒毛膜羊膜炎方面均有一定临床意义，不过IL-22和IL-22R1诊断价值最高。见图1。

3 讨论

胎膜早破与不良的母婴结局有着密切的相关性。绒毛膜羊膜炎是胎膜早破最常见的并发症之一，其临床症状出现较晚，早期易被忽略，导致许多无症状的亚临床绒毛膜羊膜炎难以及时诊断并发现，延误治疗时机。因此，早期诊断亚临床绒毛膜羊膜炎至关重要。血清学指标检测是目前临床最常用的绒毛膜羊膜炎早期诊断技术之一，具有操作简便、费用低、创伤小、安全性高等优点。WBC以及CRP是临床上最常用的诊断感染的血清学指标。WBC计数升高常提示有全身性感染存在，虽然其敏感性较高，但是易受其他部位炎症的影响，特异性较差，假阳性率较高[10]。CRP是一种急性期炎性反应蛋白，在机体发生感染时由IL-6，TNF-α诱导肝脏实质细胞合成的，是预测宫内感染的敏感指标[11]。有学者通过Meta分析发现CRP只能在一定程度上可以作为亚临床绒毛膜羊膜炎的预测指标，而不能作为未足月胎膜早破合并绒毛膜羊膜炎的唯一预测指标[12]。endprint

近年来，白细胞介素等细胞因子与绒毛膜羊膜炎关系引来众多学者关注，利用IL-1、IL-6、IL-8和TNF-α等变化来预测绒毛膜羊膜炎的存在己成为临床研究的热点[13-15]。研究认为，白细胞介素等细胞因子主要是通过炎性反应在早产发生机制中起着核心作用[16]。作为白细胞介素家族的重要成员，IL-22主要由Th22细胞分泌，与IL-22R1相结合后，可激活细胞内STAT信号通路，从而介导一系列炎性反应[17]。目前关于IL-22/IL-22R1与胎膜早破并发绒毛膜羊膜炎中关系的报道较少，因此本研究通过检测胎膜早破并发绒毛膜羊膜炎患者血清IL-22、IL-22R1、CRP、WBC指标变化，并初步探讨其与绒毛膜羊膜炎的关系。

研究结果显示WBC和CRP含量在临床绒毛膜羊膜炎组均明显高于其他三组（P < 0.05），说明WBC和CRP在预测胎膜早破并发绒毛膜羊膜炎方面具有一定临床意义。而IL-22和IL-22R1表达不仅在在临床绒毛膜羊膜炎组和其他三组之间有显著差异，而且在亚临床绒毛膜羊膜炎组和无绒毛膜羊膜炎组以及对照组之间也有明显差异，说明IL-22和IL-22R1可能参与了胎膜早破并绒毛膜羊膜炎的发生发展。当胎膜早破，出现宫内感染时，绒毛、蜕膜、羊膜细胞及单核巨噬细胞等多种细胞分泌IL-6，而IL-6又可誘发T细胞向Th22细胞大量分化，进而分泌大量IL-22，使其浓度升高[18]。而IL-22/IL-22R1很可能是通过上调IL-11等抗炎因子，抑制滋养细胞凋亡、促进滋养细胞生长和侵袭，调节母-胎界面发挥作用[19-20]。当然从另一方面来说，IL-22和IL-22R1表达的增高对于鉴别诊断亚临床绒毛膜羊膜炎也有较好的临床应用价值。随后的ROC分析结果显示患者血清中WBC、CRP、L-22、IL-22R1的AUC分别为0.717、0.778、0.909、0.916，其中L-22、和IL-22R1曲线下面积最大，说明在四种预测指标中IL-22和IL-22R1的诊断效能最好，因此IL-22和IL-22R1望成为预测胎膜早破并发绒毛膜羊膜炎的新指标。

综上所述，IL-22、IL-22R1、CRP、WBC等指标在预测胎膜早破并发绒毛膜羊膜炎方面具有一定临床意义，其中IL-22和IL-22R1预测价值最高，尤其是在预测亚临床绒毛膜羊膜炎患者方面。因此，IL-22和IL-22R1有望成为预测绒毛膜羊膜炎的新指标，如果联合WBC计数，CRP等其他血清学指标，对胎膜早破并发绒毛膜羊膜炎的预测和诊断可能更加敏感。

[参考文献]

[1] Temel O，Cendez E，Seluk S，et al. β-human chorionic gonadotropin assay in vaginal washing fluid for the accurate diagnosis of premature rupture of membranes during late pregnancy[J].J Turk Ger Gynecol Assoc，2013，14（4）：201-204.

[2] Liu J，Wu J，Yang N，et al. Intra-amniotic administration of exogenous pulmonary surfactant for improving in lung maturity of fetal rabbits with intrauterine infection caused by premature rupture of membranes [J]. Bosn J Basic Med Sci，2011，11（2）：103-107.

[3] Menon R，Fortunato SJ. Infection and the role of inflammation in preterm premature rupture of the membranes [J]. Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol，2007，21（3）：467-478.

[4] Montelongo EM，Blue NR，Lee RH. Placenta Accreta in a Wo？鄄man with Escherichia coli Chorioamnionitis with Intact Mem？鄄branes [J]. Case Rep Obstet Gynecol，2015，2015：121864.

[5] Gomez-Lopez N，Romero R，Xu Y，et al. A Role for the Inflammasome in Spontaneous Labor at Term with Acute Histologic Chorioamnionitis [J]. Reprod Sci，2017，24（6）：934-953.

[6] Bry KJ，Jacobsson B，Nilsson S，et al. Gastric fluid cytokines are associated with chorioamnionitis and white blood cell counts in preterm infants [J]. Acta Paediatr，2015，104（6）：575-580.

[7] Jones BC，Logsdon NJ，Walter MR. Structure of IL-22 bound to its high-affinity IL-22R1 chain [J]. Structure，2008，16（9）：1333-1344.

[8] 马文革，蔡银素，杨翠丽，等.C反应蛋白和白细胞介素-6与胎膜早破绒毛膜羊膜炎的关系[J].河北医药，2011，33（4）：542-543.endprint

[9] 周仲元，陶貝贝.胎膜早破患者发生组织学绒毛膜羊膜炎的影响因素及新生儿结局[J].现代妇产科进展，2014， 23（3）：192-194.

[10] 赵昊云，张秦，吴元赭.胎膜早破合并绒毛膜羊膜炎的预测指标新进展[J].东南国防医药，2014，（4）：397-400.

[11] Cekmez Y，Cekmez F，Ozkaya E，et al. uPAR，IL-33，and ST2 values as a predictor of subclinical chorioamnionitis in preterm premature rupture of membranes [J]. J Interferon Cytokine Res，2013，33（12）：778-782.

[12] Meirowitz NB，Ananth CV，Smulian JC，et al. Effect of labor on infant morbidity and mortality with preterm premature rupture of membranes：United States population-based study [J]. Obstet Gynecol，2001，97（4）：494-498.

[13] Romero R，Chaemsaithong P，Docheva N，et al. Clinical chorioamnionitis at term VI：acute chorioamnionitis and funisitis according to the presence or absence of microorganisms and inflammation in the amniotic cavity [J]. J Perinat Med，2016，44（1）：33-51.

[14] Dulay AT，Buhimschi IA，Zhao G，et al. Compartmentalization of acute phase reactants Interleukin-6，C-Reactive Protein and Procalcitonin as biomarkers of intra-amniotic infection and chorioamnionitis [J]. Cytokine，2015， 76（2）：236-243.

[15] Kacerovsky M，Musilova I，Jacobsson B，et al. Vaginal fluid IL-6 and IL-8 levels in pregnancies complicated by preterm prelabor membrane ruptures [J]. J Matern Fetal Neonatal Med，2015，28（4）：392-398.

[16] Oner C，Schatz F，Kizilay G，et al.Progestin-inflammatory cytokine interactions affect matrix metalloproteinase-1and-3 expression in term decidual cells：implications for treatment of chorioamnionitis-induced preterm delivery [J]. J Clin Endocrinol Metab，2008，93（1）：252-259.

[17] Perriard G，Mathias A，Enz L，et al. Interleukin-22 is increased in multiple sclerosis patients and targets astrocytes [J]. J Neuroinflammation，2015，12：119.

[18] Duhen T，Geiger R，Jarrossay D，et al. Production of interleukin 22 but not interleukin 17 by a subset of human skin-homing memory T cells [J]. Nat Immunol，2009，10（8）：857-863.

[19] Wang Y，Xu B，Li MQ，et al. IL-22 secreted by decidual stromal cells and NK cells promotes the survival of human trophoblasts [J]. Int J Clin Exp Pathol，2013，6（9）：1781-1790.

[20] Andoh A，Zhang Z，Inatomi O，et al. Interleukin-22，a member of the IL-10 subfamily，induces inflammatory responses in colonic subepithelial myofibroblasts [J]. Gastroenterology，2005，129（3）：969-984.endprint