蒙药漏芦花总黄酮含量测定方法研究

李 爽 王晓琴 韩国庆 黄 慧

(1.内蒙古满州里市人民医院，内蒙古 满洲里 021400；2.内蒙古医科大学 药学院,内蒙古 呼和浩特 010110)

*通讯作者：王晓琴，博士，教授。E-mail: nywangxiaoqin@163.com

蒙药漏芦花总黄酮含量测定方法研究

李 爽1王晓琴2*韩国庆2黄 慧2

(1.内蒙古满州里市人民医院，内蒙古 满洲里 021400；2.内蒙古医科大学 药学院,内蒙古 呼和浩特 010110)

目的：建立蒙药漏芦花总黄酮含量测定方法，并测定9个药材样品中总黄酮的含量。方法以芹菜素为对照品，采用紫外分光光度法测定总黄酮含量。结果芹菜素对照品浓度在3.39～11.87μg·mL-1范围内与吸光度呈良好线性关系，平均加样回收率为100.95%，RSD 为2.24%。结论该方法灵敏高，准确性强，精密度高，重复性好，可以用作漏芦花总黄酮的含量测定。

漏芦花；总黄酮；含量测定；芹菜素

漏芦花为菊科植物祁州漏芦Rhaponticum uniflorum (L)DC.的干燥花序，蒙药名为洪格勒-珠尔，国内主要分布在河北、内蒙古、黑龙江、吉林、辽宁、陕西、甘肃、青海、山东等地。其性凉，味微苦，具有杀“黏”，止刺痛，清热解毒、消肿排脓、生肌、下乳之功效，为蒙医常用药材[1-2]。

目前，各学者从漏芦花中分离得到多种黄酮类成分[3]，也有相关报道建立了漏芦花总黄酮含量测定方法，但均有欠缺[4,5]。根据课题组前期对漏芦花化学成分的系统研究表明漏芦花中的黄酮类成分主要为以芹菜素(apigenin)为苷元的一系列化合物。目前以芹菜素为对照品测定漏芦花总黄酮的方法未见报道。因此，课题组建立蒙药漏芦花总黄酮含量测定方法，为蒙药漏芦花进一步的化学成分研究和质量控制提供科学依据。

1 仪器与材料

AL204电子天平(梅特勒-托利多仪器)；TU-1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器公司)；UV1000紫外可见分光光度计(上海天美科学仪器有限公司)；KQ-250DA超声波提取器(昆山市超声仪器有限公司)。

芹菜素标准品购买于上海源叶生物科技有限公司 (编号YY90113)，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。9批漏芦花药材分别采集于内蒙古地区和购买于药材公司和医院，方法学考察所用药材为1号样品(购买于包头市中蒙医院)。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液制备：取漏芦花粉末约(过60目筛)约0.1g，精密称定，置于150 mL具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇溶液25 mL，密塞，称定质量，超声(功率100W)提取30 min,冷却后补足失重，摇匀，静置，滤过，精密吸取续滤液1mL，置于25 mL容量瓶中，用70%甲醇定容摇匀即得。

2.2 对照品溶液制备： 精密称取干燥至恒重的芹菜素标准品10.6 mg，用70%甲醇溶解并定容至25 mL的容量瓶中，得浓度为0.424mg·mL-1的对照品溶液。

2.3 最大吸收波长选择 ： 分别吸取1 mL对照品溶液和供试品溶液于25 mL量瓶中，用70%甲醇定容，以70%甲醇为空白对照，于200～400 nm波长范围内扫描，在268 nm处得到最大吸收波长，选择268 nm为测定波长，扫描结果见图1。

2.4 线性关系考察： 分别精密吸取对照品溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL置于25 mL容量瓶中，加70%甲醇定容至25 mL，得芹菜素浓度分别为3.39、5.09、6.78、8.48、10.18、11.87 μg·mL-1的对照品溶液，以70%甲醇为空白对照，于268 nm波长处测定各吸光度。以芹菜素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程：Y=0.0707X-0.00511，r = 0.9997，表明芹菜素对照品在3.39～11.87 μg·mL-1范围内与吸光度呈良好线性关系。

2.5 重复性试验：按2.1项下的方法平行制备供试品溶液6份，并于268 nm测定吸光度。结果漏芦花总黄酮平均含量为27.72 mg·g-1，RSD为2.03%，表明方法重复性良好。

2.6 精密度试验：按2.1项下的方法制备供试品溶液，并于268 nm连续测定吸光度6次，总黄酮含量的RSD为0.17%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验：按2.1项下的方法制备供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h在268 nm处测定吸光度，总黄酮含量的RSD为0.75%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.8 加样回收率试验： 取已知含量的同一样品6份，各约0.05 g，精密称定，分别按药材粉末已知含量的80%、100%、120%3个水平精密加入芹菜素对照品，按2.1项下供试品溶液制备方法制备供试品溶液，并于268 nm处测定吸光度，计算含量及回收率，结果见表1。

表1 加样回收率结果

3 含量测定

取以下9个批次的药材粉末(过60目筛)约0.1 g，精密称定，按2.1项下的方法制备供试品溶液，并于268 nm测定吸光度，每个批次平行测定3次，并采用标准曲线法计算含量，结果见表2。

表2 不同批次漏芦花总黄酮含量测定结果

4 讨论

本实试验对文献报道较多的3种黄酮类化合物芦丁、槲皮素、芹菜素为对照品进行了筛选，将3种对照品溶解配制成浓度适宜的对照品溶液，按2.1项下的方法制备供试品溶液在紫外分光光度计200～400 nm进行波长扫描，结果显示供试品溶液在268 nm和340 nm处有最大吸收，芦丁对照品在257 nm和359 nm处有最大吸收，槲皮素对照品在256 nm和374 nm处有最大吸收，芹菜素对照品在268 nm处有最大吸收。

以芦丁为对照品，采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色法和AlCl3显色法对芦丁对照品和供试品溶液进行显色，结果显示芦丁对照品用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色在509 nm处有最大吸收，用AlCl3显色在450 nm处有最大吸收；而供试品溶液在两种显色方法下与对照品相比无共同最大吸收，原因可能与样品中芦丁含量低以及干扰成分较多有关。因此，本课题采用芹菜素为对照品，以268 nm为测定波长，结果显示该方法简单，准确，重复性好，可作为漏芦花总黄酮含量测定的方法。

紫外分光光度法是测定中药和天然药物中一类成分总含量的常用方法。本研究建立了紫外分光光度法测定漏芦花总黄酮含量的方法，使待测成分最大限度的检出，含量测定结果更为准确。

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[S]．北京: 中国医药科技出版社，2010．

[2]国家中医药管理局中华本草编委会．中华本草(蒙药卷) [M]．上海: 上海科学技术出版社，1999．

[3]陈常莲，陈红梅，泉山．蒙药漏芦花总黄酮含量测定[J]．中国民族医药杂志，2009，9：58-59．

[4]萨楚拉图，牛雪平，王玲霞．紫外分光光度法测定蒙药漏芦花中总黄酮含量[J]．分析试验室，2008，27(12)：119-120.

R291.2

B

1006-6810(2017)05-0039-02

2017年2月13日收稿