不同产地南五味子中木脂素和总多糖的比较

王宇晖， 蔡子平

（1.南京农业大学园艺学院，江苏 南京 210095；2.甘肃省农业科学院中药材研究所，甘肃 兰州730070；3.甘肃省中药材种质改良与质量控制工程实验室，甘肃 兰州 730070）

南五味子为木兰科植物华中五味子（Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.） 的干燥成熟果实［1］，具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心之功效，用于久嗽虚喘、梦遗滑精、遗尿尿频、久泻不止、自汗、盗汗、津伤口渴、气短脉虚、内热、消渴、心悸失眠等症。其广泛分布于江苏、安徽、河南、山西、陕西、甘肃、湖北、四川、江西、湖南、贵州和云南等地［2］。南五味子现在陕西和甘肃陇南地区规模栽培，含五味子甲素、五味子酯甲、乙、丙、丁、戊等木脂素类成分［3］。研究发现，南五味子中含有大量的木脂素类成分，具有很好的降酶、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等作用［4］，如五味子酯类成分能显著降低谷丙转氨酶［5］，木脂素具有镇静、催眠等多种药理作用［6］。药理临床实验表明，酯甲、酯乙、酯丙、酯丁对迁延性、慢性病毒性肝炎有较好的降SGPT作用，其商品制剂“五酯胶丸”已用于临床治疗急、慢性肝炎［7］。

为了探讨不同产地南五味子的差异，我们于2017年8月在甘肃省中药材种质改良与质量控制工程实验室以南五味子醇提物中木脂素的含量和总多糖为评价指标，采用紫外分光光度法分别对甘肃、陕西、四川产地的南五味子木脂素和多糖含量进行了测定，现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

供试南五味子药材分别购自兰州旭康药业（批号：20130910），产地陕西；复兴厚药业（批号：20130510），产地甘肃；陇西百宝药业（批号：20130225），产地四川。五味子乙素对照品（110765-201311）购自中国食品药品检定研究院。供试试剂变色酸、苯酚、95%乙醇、甲醇、浓硫酸均为分析纯。

1.2 仪器设备

可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司生产，型号规格：T6新悦），电子天平（奥豪斯仪器有限公司生产，型号规格：SE602F），调温型电热套（型号规格：MH-250）。

1.3 试验方法

1.3.1 试样的制备 ①南五味子木脂素样品溶液的制备。准确称取甘肃、陕西、四川产南五味子各20.0 g，用95%乙醇80mL，回流提取2 h，室温冷却，过滤；提取液浓缩至60mL，取2mL水浴蒸干，用甲醇定容至50mL，即得南五味子木脂素样品溶液。②南五味子多糖样品溶液的制备。准确称取甘肃、陕西、四川产南五味子各20.0 g，水煎煮提取2次，第1次加15倍水，煎煮1h；第2次加10倍水，煎煮0.5h。提取液过滤，合并两次提取液，浓缩、醇沉、抽滤，取沉淀加蒸馏水溶解，即得南五味子多糖样品溶液。

1.3.2 标准曲线绘制 ①木脂素标准曲线的绘制。精确称取五味子乙素对照品0.0026g，置10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.26 mg/mL的标准溶液。分别精确吸取五味子乙素标准溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL置5mL容量瓶中，加95%乙醇定容至刻度，摇匀，在570 nm处测定其吸光度，以吸光度为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制木脂素标准曲线。②多糖标准曲线的绘制。精确称量葡萄糖0.9947g，定容于250mL容量瓶中，稀释40倍，即得质量浓度为0.099 47 mg/mL的葡萄糖标准溶液。称取苯酚固体5 g，蒸馏水溶解并定容至100mL棕色容量瓶中，备用。分别精密吸取葡萄糖标准溶液 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9 、1.0mL置于20mL试管中，补加蒸馏水至1.0mL，再加入5%苯酚1mL及浓硫酸5mL，静置10min，摇匀，室温放置20min。以1.0mL水按同样操作为空白。在490 nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制多糖标准曲线。

图1 木脂素标准曲线

图2 葡萄糖标准曲线

1.3.3 木脂素质量浓度和总多糖质量浓度测定采用紫外-分光光度法测定南五味子中的木脂素质量浓度和总多糖质量浓度［8-15］。准确吸取南五味子木脂素样品溶液和多糖样品溶液，按照1.3.2的方法操作，根据标准曲线计算南五味子木脂素质量分数和总多糖质量分数。

2 结果与分析

2.1 标准曲线

木脂素标准曲线：Y=0.880X+0.0782（r=0.9997），在0～0.26 mg/mL范围内具有良好的线性关系。

多糖标准曲线：Y=31.92191241X-1.377699945（R=0.998 2），在0～0.099 47 mg/mL范围内有良好的线性关系。

2.2 不同产地南五味子总木脂素

在570 nm波长处，测定不同产地的南五味子样品溶液的吸光度值，根据标准曲线计算木脂素量，结果见表1。由表1可以看出，以四川产南五味子木脂素量最高，为374.498 9 mg，折合药材木脂素质量分数为1.872 5%；陕西产南五味子次之，木脂素量为282.516 7 mg，折合木脂素质量分数为1.412 6%；甘肃产南五味子总木脂素量最低，为250.684 4 mg，折合药材木脂素量为1.253 4%。

表1 不同产地南五味子药材中木脂素

2.3 不同产地南五味子总多糖含量

在490 nm波长处，测定不同产地的南五味子样品溶液的吸光度值，根据标准曲线计算总多糖含量，结果见表2。由表2可以看出，整粒提取时，陕西产地南五味子的折合药材总多糖质量分数为9.665%，四川产南五味子的折合药材总多糖质量分数为10.080%，甘肃产南五味子的折合药材总多糖质量分数为11.180%；研碎提取时，陕西产南五味子的折合药材总多糖质量分数为10.360%，四川产南五味子的折合药材总多糖质量分数为9.560 0%，甘肃产南五味子的折合药材总多糖质量分数为12.830%。由此可看出，研碎后不同产地南五味子总多糖质量分数差异性明显，甘肃产南五味子总多糖质量分数较研碎前增加了1.650百分点，四川产南五味子总多糖质量分数较研碎前减少了0.520百分点，陕西产南五味子总多糖质量分数较研碎前增加了0.695百分点。

表2 不同产地南五味子药材中总多糖①每个产地的南五味子均重复3次，多糖含量为平均值。

3 小结与讨论

测定结果表明，甘肃、陕西、四川产南五味子中以四川产南五味子折合药材木脂素质量分数最高，达1.872 5%；陕西产南五味子折合药材木脂素质量分数次之，为1.412 6%；甘肃产南五味子折合药材木脂素质量分数最低，为1.253 4%。整粒提取和研碎后提取均以甘肃产南五味子折合药材总多糖质量分数最高，分别为11.180%、12.83 0%，均高于四川产和陕西产。经研碎处理后，甘肃产南五味子折合药材总多糖质量分数较研碎前增加了1.65百分点，四川产南五味子折合药材总多糖质量分数较研碎前减少了0.52百分点，陕西产南五味子折合药材总多糖质量分数较研碎前增加了0.695百分点。甘肃产和陕西产的南五味子研碎处理测的总多糖质量分数明显高于研碎前整粒提取，说明传统“五味子宜研碎入药”的合理性。四川产南五味子研碎之后提取所得多糖质量分数低于研碎前的整粒提取，这可能与人工研碎材料不均匀以及醇沉时间短有关。

有关文献报道，影响南五味子多糖提取得率的因素很多，如料液比、时间、pH、温度等［8-15］。本研究测定的是南五味子水提物中的木脂素质量分数和总多糖质量分数，之所以选择水提醇沉法提取木脂素和多糖，采用紫外-分光光度法测定木脂素质量分数和总多糖质量分数，因为其简单，易操作。木脂素质量分数和总多糖质量分数有差异的原因，除产地环境外，南五味子的栽培管理、采收季节、加工方式都可能产生影响。近年来，由于市场经济刺激，多数药农以及加工企业有抢收，或者以次充好的情况存在。在推广规范化生产技术的同时，也不能忽视生长环境对南五味子木脂素质量分数和总多糖质量分数的影响。

［1］国家药典委员会．中华人民共和国药典：一部［M］．北京：中国医药科技出版社，2015.

［2］孙成仁.北五味子与华中五味子分布区订正［J］.中国中药杂志，1993，18（1）：10-12

［3］夏继成.南五味子化学成分及其活性研究进展［J］.黑龙江科技信息，2012（2）：10.

［4］蒋 红，王宏军，李新国，等.大叶南五味子多糖纯化工艺优化［J］. 中国农学通报，2013，29（18）：206-210.

［5］郭志欣，顾地周，宋宇辉，等.五味子药渣中多糖提取工艺研究［J］. 江苏农业科学，2013，41（5）：254-255.

［6］张朝波，柳 燕，李林燕.南五味子总木质素有效部位镇静、催眠作用研究［J］.中药药理与临床，2011，27（1）：29-30.

［7］肖培根.新编中药志：二卷［M］.北京：化学工业出版社，2002：435.

［8］陈晓青，蒋新宇，刘佳佳.中草药成分分离分析技术与方法［M］.北京：化学工业出版社，2006：150-153.

［9］李晓亮，易进海，刘云华，等.南五味子、五味子HPLC指纹图谱研究和木脂素成分测定［J］.中成药，2011（6）：920-924

［10］王小宁，闫丽萍，胡玉敏，等.五味子总木脂素的提取纯化［J］. 食品与药品，2013（4）：11-13.

［11］邓寒霜，李筱玲.陕西省不同产地南五味子品质分析研究［J］. 时珍国医国药，2014，25（1）：222-223.

［12］蒋益萍，张巧艳，张 宏，等.正交试验优选五味子木脂素类成分的提取工艺［J］.中成药，2013，35（11）：2390-2394.

［13］杜为军，刘 枫，马翠娇，等.毛头牛蒡子总木脂素含量测定［J］.新疆师范大学学报：自然科学版，2013（4）：24-27.

［14］陆兔林，吴 杨，季 德，等.五味子多糖提取分离和药理作用研究进展［J］.中国中药杂志，2014，39（4）：751-754.

［15］梁少华，王金亚，杨瑞楠.亚麻籽油中木脂素含量测定方法研究［J］.中国粮油学报，2014（5）：15-17.