一例肉牛腹泻的诊断报告

李 津，蔺旭光，李佳怡

(1.内蒙古通辽市家畜繁育指导站，内蒙古 通辽 028000；2.内蒙古民族大学，内蒙古 通辽 028000；3.内蒙古通辽市扎鲁特旗园林管理局，内蒙古 通辽 029100）

近来，养牛业规模壮大和集约化的增强，犊牛腹泻的致病和致死呈上升趋势。犊牛腹泻病是犊牛致死原因之一，康复后，其生产性能受到较大影响。刚出生的牛腹泻发病率达80%，发病时间短、致死高、难以诊断。犊牛腹泻是由外界环境与病原的共同作用、机体状态与病原的相互作用、饲养管理与病原相互作用以及这些因素共同作用的结果。

1 发病情况

2016年12月通辽某牛场送检一头因腹泻致死的未断奶小牛犊。经询问及剖检怀疑该病例为细菌性腹泻。本试验采用细菌方法及分子生物学方法对该致病菌进行分离培养和鉴定。最终达到确诊该病例的目的。

2 实验室诊断

2.1 病料处理及接种配种培养结果

对犊牛尸体剖检，采出十二指肠，挑取肠内容物，在LB上涂布接种，再把LB放在恒温箱培养18～24h。病料肠道内容物经培养，再经划线分离纯化后，菌落菌落呈灰色突出圆形，边缘不粗糙，且表面光滑。在鲜血琼脂板上呈现β溶血。在麦康凯上呈现粉红色。

2.2 菌体形态学观察结果

将培养好的细菌菌落涂在营养琼脂平板，划线分离，经恒温箱24h后，涂片用革兰氏复染液染色，油镜下观察，菌体呈现中等大小杆状，颜色为红色。判断该菌为革兰阴性菌。挑取经划线分离后的单菌落，接于LB内。恒温箱内培养后，留用。

2.3 药敏试验结果

取100μL细菌纯化培养物滴加到营养琼脂平板上，用涂菌棒将其涂抹均匀，将舒普深、丁胺卡那霉素、氧氟沙星、红霉素、左氟沙星、强力霉素、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、头孢拉定（先锋Ⅵ）、新霉素、阿莫西林、诺氟沙星氯霉素的药敏纸片分别均匀地贴在琼脂平板培养基表面。恒温箱24h，舒普深、氯霉素、丁胺卡那霉素、新霉素有明显的抑菌圈，其抑菌圈直径分别为25.6、18.7、13、11.9mm，其余药物表现为耐药。该试验，判定以纸片法药敏试验抑菌环直径为标准。

2.4 PCR扩增反应结果

提取菌液DNA，根据文献内容合成PCR引物。反应体系条件，94℃预变性 180s，循环反应:95℃30s、56℃30s、72℃延伸30s，30cycle，72℃延伸10min。获得PCR产物进行凝胶电泳检测及凝胶回收。将27f和1492r用16sDNA基因，进行PCR扩增。目的片段，长度大约是1500bp。

根据测序序列，使用MEGA5.0软件将结果制成系统发育树，该分离株与已知大肠杆菌菌株（Eschreichia colistrain CCFM8335）亲缘关系最近。

3 讨论

根据对该病料的一系列试验表明，该病料感染的是与大肠杆菌（Eschreichia coli strainCCFM8335菌株）亲缘最近的菌株。

通过对病料进行菌体分离与鉴定。该病例源于养殖场措施不全、小场不规范投喂药物等饲养过程不规范造成，以致呈现出高强度的药物耐受性。消费者迷惑中，为此买单。持续下去如此状况，后果不可想象。规范养殖必须做到，安全用药，合理投喂药物，按时接种疫苗，完善养殖链条。

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