子宫内膜样腺癌组织中紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达及关联性

梁晓红 段广庭 袁 颖

(青海省交通医院妇科，青海 西宁 810001)

子宫内膜癌是常发生于中老年女性，是与子宫内膜上皮不典型增生相关的肿瘤。病变可呈侵袭性生长，并可以伴有转移〔1〕。细胞间紧密连接具有维持细胞极性、黏附性、运动性及调节分化的功能〔2，3〕。Occludin和ZO-1是与紧密连接相关的蛋白，主要位于人上皮细胞和内皮细胞连接的复合体中，正常组织细胞中表达增高，而在肿瘤中的表达下降，尤其是恶性程度高的肿瘤中表达常丢失，这为肿瘤离开原发部位提供了重要条件〔4，5〕。本实验分析子宫内膜样腺癌术后组织中Occludin和ZO-1的表达及临床意义。

1 资料与方法

1.1临床资料 2015年1月至2016年12月青海省交通医院经病理学确诊为子宫内膜样腺癌，并行手术根治的患者69例为观察组，年龄42～85岁，平均59.6岁。排除标准：①多原发癌；②伴有生殖系统先天畸形；③有遗传性疾病。同期确诊为子宫内膜复杂性增生伴不典型增生患者28例为对照组，年龄40～78岁，平均56.8岁。28例因子宫肌瘤行子宫全切后的增生期子宫内膜组织为正常对照组，年龄43～75岁，平均54.9岁。3组均留取术后蜡块组织和临床资料，一般资料差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2Occludin和ZO-1的检测 术后石蜡包埋组织均切取4 μm切片，应用免疫组化方法检测3组中Occludin和ZO-1的表达，二氨基联苯胺(DAB)显色，均由临床实验室的技师进行操作，严格按说明书进行，做好质量控制工作，减少误差。

1.3结果判定 Occludin和ZO-1的阳性表达部位是细胞膜，以呈现淡黄色-褐色为阳性反应细胞。依据染色强度不同分为4个等级：0分，无显色；1分，淡黄色；2分，棕黄色；3分，棕褐色。根据同样物镜下(400倍视野)阳性细胞数的不同分为5个等级：0分，<5%；1分，5%～25%；2分，26%～50%；3分，51%～75%；4分，76%～100%。将得分相乘定为最终阳性结果，以0～3分定为阴性，以>3分定为阳性。

1.4统计学方法 采用SPSS17.0统计软件进行χ2检验、线性相关分析。

2 结 果

2.13组Occludin和ZO-1阳性率比较 3组Occludin和ZO-1阳性率差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

2.2观察组不同临床特征中Occludin和ZO-1阳性率的比较 观察组中Occludin和ZO-1表达与肿瘤转移密切相关，Occludin的表达与肿瘤的浸润深度密切相关，二者均与患者的年龄、分化程度无明显相关性。见表2。

表1 3组中Occludin和ZO-1阳性率比较〔n(%)〕

表2 观察组不同临床特征中Occludin和ZO-1阳性率的比较〔n(%)〕

2.3观察组中Occludin和ZO-1的相关性 Occludin和ZO-1呈正相关(r=0.49，P=0.038)。

3 讨 论

子宫内膜样腺癌是来源于子宫内膜上皮细胞的恶性肿瘤，是肿瘤性演变较为典型的肿瘤，即由不典型增生到癌变到浸润性病变，并继发肿瘤性的转移。在转移前肿瘤细胞的黏附性降低，细胞连接的程度下降，细胞间的固有结构可能因黏附性下降而引发破坏，使肿瘤细胞易于离开原发灶形成转移瘤〔6，7〕。Occludin是第一个被克隆的紧密连接跨膜蛋白，其基因定位于5q13.1，分子质量为64 kD，其表达的蛋白由504个氨基酸构成，具有4个跨膜结构域〔8，9〕。ZO-1 是第一个被确定的紧密连接相关蛋白，是膜相关鸟苷酸激酶蛋白家族成员，可以和ZO-2、ZO-3 形成复合体，并与Occludin的羧基端相互作用，将跨膜蛋白和细胞骨架连接在一起传递各类信号〔10，11〕。目前普遍认为，肿瘤细胞的浸润和转移与细胞间连接力的丧失有关〔12〕。Occludin 和 ZO-1 蛋白表达的下调或缺失，是肿瘤细胞浸润和转移的重要步骤〔13，14〕。Occludin 和 ZO-1在对肿瘤进展的作用过程中也可能对细胞外基质进行调节，主要通过调节基质金属蛋白酶(MMPs)的分泌发挥这种调控作用，这时细胞外基质形成有效的降解，使肿瘤转移的屏障形成有效的破坏，细胞在松解后穿过基底膜，形成转移性肿瘤病灶。

本研究提示Occludin和ZO-1二者低表达时可以促进肿瘤的转移。Occludin表达下降后可以促进肿瘤的浸润性生长。因此两种蛋白丢失意味着肿瘤性的病变和肿瘤不良的生物学行为。朱克超等〔15〕通过观察食管鳞癌中Occludin和ZO-1的表达，发现二者表达下调，认为其与肿瘤的增殖、侵袭和转移密切相关，这与肿瘤细胞紧密连接的完整性破坏有关，为肿瘤侵袭和转移提供了可能〔16〕。本实验说明二者不是细胞分化过程中的调节蛋白，二者在结构上可能具有同源性，在功能上具有协同作用〔10〕。也有观点认为Occludin和ZO-1表达的变化使肿瘤的浸润模式发生改变，即二者表达丢失后引起细胞极性紊乱，可能促进功能性腺管状结构的丢失，使肿瘤细胞的形态更加弥漫，细胞的体积更小，易于浸润和迁移〔17〕。

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14Pummi K，Malminen M，Aho H，etal.Epidermal tight junctions：ZO-1 and occludin are expressed in mature，developing，and affected skin and in vitro differentiating keratinocytes〔J〕.J Investig Dermatol，2001；117(5)：1050-8.

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