老年胃癌患者血清肿瘤标志物及细胞因子的表达及意义

胡　泓　龚　柳　孙季萍

(浙江大学医学院附属邵逸夫医院下沙院区肿瘤内科，浙江　杭州　310018)

胃癌是常见的一种消化系统恶性肿瘤，常见于老年人，具有较高的发病率和死亡率，早期症状较为隐匿或仅有轻微症状，当出现明显症状时，病变已属中晚期〔1,2〕。因此，早期及时有效诊断和治疗具有重要意义。目前胃癌的诊断主要依据病理检测、影像检测及胃镜活检等方法，难度大，确诊晚，并且费用较高〔3〕。随着近年来血清学、免疫学的不断进展，由于具有操作快捷、费用低廉及痛苦小等特点，作为癌前病变及胃癌筛查的一种有效手段〔4〕。本研究探讨老年胃癌患者血清肿瘤标志物、外周T淋巴细胞亚群、Dickkopf(DKK)-1、淋巴细胞活化基因(LAG)-1、血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素(Ang)-2的表达及意义。

1　资料与方法

1.1临床资料选择浙江大学医学院附属邵逸夫医院于2013年1月至2014年12月收治的老年胃癌患者41例作为研究组。纳入标准：①均经胃镜下活组织病理检查确诊；②年龄≥70岁；③签订知情同意书；④经医院伦理委员会审核且批准。排除标准：①合并其他恶性肿瘤如肺癌、肝癌等；②精神疾病者；③合并肺、肾、肝等功能严重异常者。观察组男29例、女12例，年龄70～87〔平均(79.83±4.62)〕岁，临床分期：Ⅰ期3例、Ⅱ期7例、Ⅲ期19例、Ⅳ期12例。另选同期健康体检者40例作为对照组，男27例、女13例，年龄70～89〔平均(79.34±5.14)〕岁，两组年龄、性别具有可比性。

1.2方法

1.2.1肿瘤标志物检测包括糖类抗原(CA)199、CA724、癌胚抗原(CEA)，所有研究对象于清晨空腹采集外周静脉血6 ml，离心，分离血清标本，置于-70℃下保存待测，离心条件：离心半径15 cm、转速3 000 r/min、时间10 min。采用化学发光法测定CA199、CA724、CEA含量，仪器为美国雅培公司i2000SR全自动化学发光仪，试剂盒均来自上海博湖生物科技发展有限公司，操作严格依据试剂盒说明书检测。

1.2.2外周T淋巴细胞亚群检测所有研究对象于清晨空腹采集外周静脉血3 ml，将其放置于EDTA抗凝管中，且依次加入10 μl CD3+、CD4+、CD8+抗体，放置于室温条件下避光孵育30 min，然后加入溶血素200 μl于每管中，于室温条件下避光放置15 min，裂解红细胞。观察溶液澄清透明后，加入1 ml的预冷磷酸盐缓冲液(PBS)中，再放置于室温条件下以15 cm为离心半径、3 000 r/min为转速、12 min为离心时间，分离血清，然后再滴加100 μl的1%多聚甲醛溶液中固定，测定外周血T淋巴细胞亚群，应用美国BD公司的流式细胞仪及配套试剂。

1.2.3DKK-1和LAG-1检测取1.2.1血清标本，采用酶联免疫吸附法测定DKK-1和LAG-1含量，仪器为日立7600型全自动生化分析仪，试剂盒来自上海双赢生物科技有限公司，操作严格依据试剂盒说明书。

1.2.4VEGF和Ang-2检测取1.2.1血清标本，采用酶联免疫吸附法测定VEGF和Ang-2含量，仪器为日立7600型全自动生化分析仪，试剂盒来自上海恒远生物科技有限公司，操作严格依据试剂盒说明书检测。

1.3统计学方法采用SPSS22.0软件行χ2及t检验。

2　结　果

2.1两组血清肿瘤标志物含量比较见表1。研究组血清CA199、CA724和CEA含量明显高于对照组(P<0.05)。

2.2两组外周血T淋巴细胞亚群比较见表2。研究组CD3+、CD4+和CD4+/CD8+明显低于对照组(P<0.05)。

2.3两组血清DKK-1和LAG-1含量比较见表3。研究组血清DKK-1和LAG-1含量明显高于对照组(P<0.05)。

2.4两组血清VEGF和Ang-2含量比较见表4。研究组血清VEGF和Ang-2含量明显高于对照组(P<0.05)。

表1　两组血清肿瘤标志物含量比较

表2　两组外周血T淋巴细胞亚群比较

表3　两组血清DKK-1和LAG-1含量比较

表4　两组血清VEGF和Ang-2含量比较

3　讨　论

胃癌发生、发展是多基因参与的一种渐进性演变过程。早期胃癌主要经手术切除治疗后生存率高、病情转归理想，但对于中晚期胃癌患者手术切除率低、死亡率较高〔5〕。目前，早期胃癌诊断率较低，这与临床上缺乏早期有效的筛查指标相关。

肿瘤标志物主要是由肿瘤细胞分泌或者机体对肿瘤的生长产生反应而分泌的物质。很多情况下，一种肿瘤细胞可产生多种肿瘤标志物〔6，7〕。CA199是黏蛋白型的一种糖类蛋白肿瘤标志物，主要存在于胃肠组织中，目前已将其作为胃癌诊断为较可靠的一种肿瘤标志物〔8〕。CA724是新型的一种肿瘤标志物，主要是一种高分子糖蛋白，是目前用于胃癌诊断的最佳肿瘤标志物，对胃癌具有较高的敏感性和特异性〔9〕。CEA较为复杂的一种含糖蛋白质，其广泛于内胚叶起源的消化系统肿瘤中存在，对胃癌、大肠癌的疗效判定具有重要意义〔10〕。近年研究显示，胃癌患者血清CA199、CA724和CEA较健康体检者明显上升〔11〕。本研究表明，老年胃癌患者血清CA199、CA724和CEA含量异常升高，可作为胃癌诊断的辅助指标。

目前，临床证实胃癌发生、发展与免疫功能关系紧密，当机体免疫功能失调能够在一定程度上预测肿瘤的进展和预后。宿主对肿瘤组织存在自然抵抗作用，机体的免疫应答可部分清除肿瘤细胞，而在抗肿瘤方面由T淋巴细胞阶段的细胞免疫发挥重要作用〔12〕。在外周血T淋巴细胞中，CD3+、CD4+在免疫应答中具有扩大和促进免疫反应的正向作用，而其中CD8+具有抑制细胞免疫进程的负向作用。而CD3+、CD4+、CD8+在正常机体内保持着较为稳定的一个动态平衡〔13〕。本研究表明，老年胃癌患者细胞免疫功能明显下降。

DKK-1和LAG-1是近年来新发现的恶性肿瘤筛查指标，其中DKK-1主要对Wnt/β-catenin通路具有抑制作用，且参与癌细胞恶性生物学行为的调节；而LAG-1主要对细胞的增殖和活化具有抑制作用，且可参与癌细胞的免疫逃逸过程〔14〕。DKK-1是Dickkopfs家族的一员，其一可与Wnt的LRP5/6结合后影响受体复合物的形成，从而阻碍Wnt信号通路；且可直接与膜受体结合促进细胞的增殖和迁移〔15〕。LAG-1是免疫球蛋白家族中的一种负性共刺激因子，与配合结合后可抑制T淋巴细胞的增殖、分化和成熟，从而导致癌细胞发生免疫逃逸，通过检测LAG-1能够评估肿瘤的恶性程度〔16〕。本研究表明，老年胃癌患者血清DKK-1和LAG-1含量明显升高。

VEGF具有促进血管内皮细胞迁移、增殖及诱导血管生成，促进小静脉和尾静脉通透性增加等作用，其与肿瘤浸润性生长和肿瘤血管形成密切相关。有研究显示，胃癌患者血清VEGF含量明显升高〔17〕。Ang家族是新型的一类血管生成调节剂，其中Ang-2能与Tie-2受体结合后不能引起Tie-2磷酸化，从而阻断血管形成信号，同时还能够离断血管周细胞和血管内皮细胞的结合，此外，Ang-2还能够有效地刺激内皮始祖细胞的增殖，进一步促使新生血管生成。目前，Ang-2在胃癌、结直肠癌等多种肿瘤细胞中检测到Ang-2的生成〔18〕。本研究表明，老年胃癌患者血清VEGF和Ang-2含量明显升高。

1高凤云,陶永明,郑嫦娟.肿瘤标志物联合检测在胃癌诊断及预后评估中的价值〔J〕.肿瘤研究与临床,2014;26(3):183-6.

2余国行,卿毅,顾咸庆,等.血清多肿瘤标志物胃癌诊断判别方程的建立及其临床意义〔J〕.重庆医学,2012;41(3):249-51.

3焦艳.肿瘤标志物对胃癌诊断及预后的评估价值〔J〕.实用癌症杂志,2013;28(6):614-6.

4王洋,王欢,莫佳美,等.血清肿瘤标志物在胃癌诊断中的价值〔J〕.现代肿瘤医学,2014;22(4):883-5.

5高凤云,陶永明,郑嫦娟.肿瘤标志物联合检测在胃癌诊断及预后评估中的价值〔J〕.肿瘤研究与临床,2014;26(3):183-6.

6于海涛,刘秀娜.CEA联合CA199、CA724、CA242在胃癌检测的诊断价值〔J〕.医学检验与临床,2013;13(4):15-6.

7何思春,庞红全,焦鑫,等.胃癌患者血清CA724、CA199、CEA检测的临床意义〔J〕.检验医学与临床,2010;7(19):2058-9.

8陈海燕.CA724、CEA、CA242、CA199肿瘤标志物联合检验在胃癌中的诊断价值〔J〕.中国医药导报,2012;9(31):97-8.

9徐炜,卢敏,韩峰,等.血清CA199、CA125、CA724、CEA联合检测诊断胃癌的价值〔J〕.山东医药,2009;49(19):78.

10吴玉波,刘干忠,王永良.血清CEA、CA199、CA724联合检测对胃癌的诊断价值〔J〕.疑难病杂志,2012;11(1):50-1.

11孙洁,孟祥军.血清CA199、CEA、CA125、CA724联合检测在胃癌诊断中的价值〔J〕.中国实验诊断学,2014;5(12):1936-9.

12牟莉,钱荣.腹腔镜与开腹胃癌根治术在进展期胃癌中的临床疗效及对细胞免疫功能的影响〔J〕.中国医药导报,2014;11(3):64-6.

13汪正广,齐东江,李嘉嘉,等.中晚期胃癌患者术后化疗联合黄芪颗粒治疗对生活质量及免疫功能的影响〔J〕.安徽医科大学学报,2014;49(12):1771-4.

14魏礼清,向春香,胡建华,等.DKK-1在胃癌患者血清和组织中的表达及其临床意义〔J〕.中华实验外科杂志,2014;31(7):19-21.

15潘理会,李春辉,佟晓波,等.Wnt信号通路的组件蛋白DKK-1、β-catenin及CyclinD1在胃癌中的表达与相互关系〔J〕.实用医学杂志,2013;29(15):2517-9.

16江露,吴昌平,蒋敬庭.淋巴细胞活化基因-3分子在恶性肿瘤中的作用及意义〔J〕.国际免疫学杂志,2013;36(1):10-4.

17徐秀连,王崇树.Maspin、iNOS及VEGF与胃癌关系的研究现状〔J〕.肿瘤预防与治疗,2013;26(2):107-11.

18刘少平,董卫国,胡钦勇,等.外周血血管生成素-2表达与胃癌淋巴结微转移及预后的关系〔J〕.武汉大学学报(医学版),2013;34(2):285-9.