对乙肝表面抗原进行定量检测方法的研究

梁伟清

（南宁协和医院检验科，广西 南宁 530031）

在世界范围内，有20亿人感染过HBV。其中，有近4亿人的病情可发展为慢性乙型肝炎[1,2]。在慢性HBV感染的患者中，约有2亿患者的肝脏存在持续的炎症反应，其体内HBV的复制较为活跃，其病情可发展为肝硬化、肝癌。我国是乙型肝炎高发的国家。HBV携带者可达到1.2亿人，约占全世界HBV感染者的1/3。HBsAg是HBV的外壳蛋白，本身不具有传染性。由于HBsAg的出现常伴随HBV的存在，因此HBsAg是机体发生HBV感染的标志。研究发现，在人体感染HBV后的2～6个月内，在其血液中天冬氨酸氨基转移酶的含量明显升高的前2～8周，可在其血清中检测到HBsAg。对乙肝患者进行HBsAg定量检测在为其制定治疗方案、评估其临床疗效和预后方面均具有较高的应用价值[3,4]。临床上常用的HBsAg定量检测法包括ELISA检测法、TRFIA检测法及CLIA检测法。现就上述检测方法进行综述。

1 HBsAg检测方法的概述

进行HBsAg检测的方法可分为HBsAg定性检测和HBsAg定量检测两种类型。过去，临床上常对疑似乙肝患者进行HBsAg定性检测。进行HBsAg定性检测的项目包括乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（抗HBs）、乙肝表面е抗原（HBeAg）、乙肝表面е抗体（抗HBe）及乙肝表面核心抗体（抗HBc）。根据进行HBsAg定性检测的结果可以判断患者是否发生HBV感染，但无法了解其体内HBV的复制情况和传染性。近年来，临床上对乙肝患者常进行HBsAg定量检测。HBsAg定量检测法主要包括酶联免疫吸附法（ELISA）、时间分辨免疫荧光分析法（TRFIA）和化学发光免疫分析法（CLIA）。

2 ELISA检测法

ELISA检测法是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。该检测法通过将已知的抗原或抗体吸附在固相载体的表面，使酶标记的抗原或抗体在固相载体的表面发生颜色反应。然后根据抗原或抗体发生颜色反应的情况判断其是否出现相应的免疫反应。出现颜色反应的深浅与标本中抗体或抗原的含量呈正比[5]。ELISA检测法的操作简单，其检测结果可受HBsAg浓度的影响。研究发现，使用ELISA检测法对乙肝患者进行HBsAg定量检测的假阴性率为0.7%～1.0%，假阳性率为1.0%～2.0%。因此，用ELISA检测法对乙肝患者进行HBsAg定量检测的效果存在一定的局限性。

3 TRFIA检测法

TRFIA检测法是一种新型的非同位素免疫分析方法。在对乙肝患者的血清标本进行TRFIA检测时，用镧系元素标记HBsAg，根据镧系元素螯合物的发光特点，用时间分辨技术测量其荧光，同时检测波长和时间这两个参数，以分辨获得信号的特点，从而实现对HBsAg进行定量检测。TRFIA检测法具有灵敏度高、操作简单、重复性好、无放射性等优点。有研究指出，用TRFIA检测法和CLIA检测法对HBsAg的阳性标本进行定量检测的灵敏度、准确性基本相同[6-7]。

4 CLIA检测法

上个世纪70年代，Arakawe首先使用CLIA检测法对乙肝患者进行HBsAg定量检测。该检测法是将化学发光测定技术和免疫反应相结合的一种分析方法。这使得CLIA检测法既具有化学发光测定技术的高灵敏度，也具有免疫反应的高特异性。此外，CLIA检测法具有试剂存放时间长、操作简单的优点，是目前临床上最为常用的一种对HBsAg进行定量检测的方法。近年来，临床上使用全自动化学发光微粒子免疫分析系统对乙肝患者的血清标本进行HBsAg定量检测。该系统对定量检测HBsAg的灵敏度、特异性及批内、批间的精密度均较高[8,9]。

5 讨论

ELISA检测法、TRFIA检测法及CLIA检测法是临床上对乙肝患者进行HBsAg定量检测的常用方法。ELISA检测法的耗时长，其检测结果易受检测人员操作的熟练度和操作环境的影响，无法同时对大批量标本进行HBsAg定量检测。因此，ELISA检测法常被用于实验室中的HBsAg定量检测。与之相比，TRFIA检测法和CLIA检测法具有灵敏度高、稳定性好、操作简单的特点，是临床上对乙肝患者进行HBsAg定量检测的首选方法。

参考文献

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