两种方法在检测肺泡灌洗液中结核分枝杆菌的结果分析

李娜娜，刘梅，刘权贤，王鸿，何月娟，王建华，陈玲

（遵义医学院附属医院呼吸二科，贵州 遵义 563003）

0 引言

肺结核是最常见的结核病，同时也是结核病最重要的传染源，因此对肺结核患者准确、及时的诊断和治愈不仅让患者恢复了健康，而且在消除传染源、控制结核病流行工作中也具有重要作用[1]。当前肺结核实验室诊断方法多样，本研究旨在分析罗氏培养法和Gene Xpert MTB/RIF法在肺泡灌洗液检出结核分枝杆菌的阳性率，探讨两者的诊断价值。具体结果如下：

1 材料与方法

1.1 一般材料

选取2017年1月至2017年6月于某院就诊的可疑肺结核病患者420例，其中男性229例，女性191例；年龄7-87岁。

1.2 仪器与试剂

Gene Xpert MTB/RIF检测试剂盒购自美国Cepheid公司生产，所有试剂均在有效期内使用。所有罗氏培养的培养基均按照《结核病诊断实验室检验规程》制备，抗酸染色液试剂盒由珠海贝索生物有限公司提供。

1.3 研究方法

1.3.1 Gene Xpert MTB/RIF检测肺泡灌洗液中的结核分枝杆菌

每例患者行支气管镜检查后留取肺泡灌洗液2份，每份10mL，任选1份灌洗液3000r/min离心20min，然后弃上清留取1mL沉淀用于Gene Xpert MTB/RIF检测，按照Gene Xpert MTB/RIF检测操作流程进行检测，2h后观察结果。

1.3.2 罗氏培养法检出肺泡灌洗液中的结核分枝杆菌

选取10mL肺泡灌洗液，加入等倍体积4.0%的 NaOH 消化处理10min，然后去1mL接种到酸性罗氏斜面培养基上，37℃培养箱孵育，每周记录结核分枝杆菌生长情况，连续观察8周，8周后未生长细菌报告阴性。若培养基斜面上见菌落生长，则进行抗酸染色检测，检测阳性再采用对硝基苯甲酸(PNB)鉴定。

1.3.3 罗氏比例法药物敏感性试验

按照《结核病诊断实验室检验规程》要求，培养阳性新鲜菌落通过超声分散仪磨菌制备成1.0麦氏浊度，稀释成10-2mg/mL和l0-4mg/mL，分别接种10μl到罗氏培养基和含利福平浓度为40μg/mL，37℃培养4周后观察报告结果。

1.4 统计学方法

实验结果采用Graphpad prism统计学软件进行分析，采用配对卡方检验进行比对χ2检验,以P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 Gene Xpert MTB/RIF法检测结果

420份可疑肺结核患者临床标本Gene Xpert MTB/RIF检测阳性83例，阳性率19.8%，其中罗氏培养阳性42例，占Gene Xpert MTB/RIF检测阳性的50.6%。检出结核分枝杆菌利福平耐药4例，耐药率4.8%。

2.2 罗氏培养法培养结果

420份肺泡灌洗液罗氏培养阳性50例，培养阳性率为11.9%，其中Gene Xpert MTB/RIF检测阳性42例，占罗氏培养阳性标本的84.0%。

2.3 罗氏培养法与Gene Xpert MTB/RIF法比较

罗氏培养法培养阳性的50例肺泡灌洗液中，Gene Xpert MTB/RIF阳性42例，两者之间符合率为84.0%。 罗氏培法养阴性的369例标本中，Gene Xpert MTB/RIF法阳性41例，占11.1%，41例患者经查询病历结果确认临床诊断均为肺结核；Gene Xpert MTB/RIF法阳性率为19.8%，罗氏培养法检出的阳性率为11.9%，Gene Xpert MTB/RIF法阳性率高于罗氏培养法，且差异具有统计学意义（P＜0.05）。以传统罗氏培养法为金标准，Gene Xpert MTB/RIF检测法的敏感度为50.6%，特异度为97.6%，阳性预测值为84.0%，阴性预测值为88.9%。

2.4 罗氏培养法与Gene Xpert MTB/RIF法任一阳性

罗氏培养与 Gene Xpert MTB/RIF法任一阳性标本91例，阳性率为21.7%，联合罗氏培养法与Gene Xpert法共同检测肺泡灌洗液，可提高肺结核患者阳性检出率。见表1。

表1 2种检测方法不同组合对肺泡灌洗液结核分枝杆菌的检出情况

3 讨论

肺结核的诊断常规以痰标本检测为主，临床中约1/3的患者为痰液稀少或无痰。支气管镜检查是诊断肺结核尤其是涂阴肺结核的重要手段，是无法自主排痰患者必不可少的检查手段，不仅可以直观地观察气管、支气管黏膜的受累部位及情况，同时还可以进行活检、刷检、肺泡灌洗及活检病理检查，通过对这些标本的检测可以提高涂阴肺结核患者的检出率［2]。Gene Xpert MTB/RIF检测法是目前结核病诊断中污染少、简便易行、快速准确的一种分子生物学方法[3]，已经运用于痰液、尿液、胸腹水、肺泡灌洗液以及脑脊液等多种临床样本的检测[4-6]。本实验Gene Xpert MTB/RIF法的敏感度为50.6%，均低于低于Steingart KR等[7]报道的67.0%，也低于林永通、黄建斌等[8，9]国内学者报道，但高于陈洁报道的31.6%[10]，本实验肺泡灌洗液的检出率与国内外报道基本一致。本文2种方法联合应用不仅可以提高肺泡灌洗液的阳性率，同时培养方法与Gene Xpert MTB/RIF方法相对照，还可以区分检测对象感染的结核分枝杆菌是活菌还是死菌，特别是确诊结核后已经进行抗结核治疗的患者，通过传统培养法可以验证治疗方案的有效性。

综上所述，Gene Xpert MTB/RIF检测系统在检测临床疑似肺结核病患者肺泡灌洗液中都具有重要的意义，尽管Gene Xpert MTB/RIF检测系统的敏感性高于传统培养法，但是传统培养法的价值也是不可忽视的，建议临床常规进行2种方法的检测。

[1] 康怡.不同方法检测痰和肺泡灌洗液中结核杆菌的分析[J].临床肺科杂志，2014,19(12):2253-2254.

[2] Kumar R，Singh M，Gupta N,et al.Bronchoscopy in Immediate diagnosis of smear negative tuberculosis[J]. Pneumonol Alerg ol Pol,2014,82(5):410-414.

[3] 刘家云,郝晓柯.感染病原体新型分子检测技术GeneXpert[J].中华检验医学杂志,2014,37(11):820-823.

[4] 王霄,文强,岳健博,等. GeneXpert、抗酸染色及培养在浅表淋巴结结核诊断中的比较研究[J]. 遵义医学院学报,2016,39(3):275-278.

[5] 戴景涛,卓玛.结核病患者各种体液标本Genexpert MTB/RIF检测结果分析[J]医学理论与实践,2018,31(4):579-580.

[6] 贾凡佰,张慧慧,赵辉,等.Genexpert MTB/RIF对结核性胸膜炎的诊断价值研究[J].寄生虫病与感染性疾病，2016,14(4):227-230.

[7] Karen R Steingart, Ian Schiller, David J Horne,et al.Xpert® Mtb/Rif assay for pulmonary tuberculosis and rifampicin resistance in adults[J].Cochrane Database Syst Rev，2014，21 (1):161-166.

[8] 林永通，麦世康.Gene Xpert MTB/RIF检测技术在结核病诊断中的应用评价[J].中国热带医学,2018,18(1):93-95.

[9] 黄建斌,杨玲,梁晓莉. Gene Xpert MTB/RIF检测技术在结核病诊断中的应用探讨[J].医学动物防治,2017,33(4):465-467.

[10] 陈洁,张青,李克诚,等.Gene Xpert MTB/RIF系统在疑似结核病患者中的诊断价值[J].中国卫生检验杂志,2016,26(17):2519-2522.