HPLC法测定面包中丙酸钙含量的不确定度评定

董伟博 杨海军

测量不确定度是与测量结果相联系的参数，本文通过采用HPLC法测定了面包中丙酸钙的含量，并对其相对扩展不确定度进行了评定。

丙酸钙作为防腐剂可以添加在焙烤类食品中，限量为2.5g/kg（以丙酸计）。高效液相色谱法（HPLC）是测定食品中丙酸钙的国家标准方法。测量不确定度是与测量结果相联系的参数，用于表征赋予被测量之值的分散性。当测量结果处于临界值时食品检验机构必须进行测量不确定度评定。本文对HPLC法测定面包中丙酸钙含量的不确定度因素进行了评定，计算出不确定度并报告了结果。

1 仪器、试剂、色谱分析条件

1.1 仪器

高效液相色谱仪，岛津LC-20AT，附紫外检测器和自动进样器；高速冷冻离心机，北京雷勃尔LR10-2.4A；超声波清洗器，昆山市超声仪器KQ-100；高速组织捣碎机，上海精科DS-1；pH计，上海仪电科学PHS-3C；电子天平，上海上天FA2004；溶剂过滤器及0.45μm微孔滤膜。

1.2 试剂

分析纯磷酸（H3PO4）、分析纯磷酸氢二铵[（NH4）2HPO4]、实验室用超纯水、食品添加剂丙酸钙纯度标准物质（GBW（E）100078）。

1.3 色谱分析条件

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-Aq 4.6×250mm，5μm，P.N.880975-914；流动相：1.5g/L；磷酸氢二铵溶液，用1mol/L磷酸溶液調pH为3.0（使用时配制）；经0.45μm微孔滤膜过滤；流速：1.0mL/ min；柱温：25℃；进样量：10μL；紫外检测器波长：214nm。

2 样品处理与标准溶液曲线的绘制

依据国家标准GB 5009.120-2016进行试验。

2.1 样品制备

将面包样品经组织捣碎机捣碎混匀，准确称取以上样品5g（精确至0.0001g）至100mL烧杯中，加水20mL，加入1mol/L磷酸溶液0.5mL，混匀；经超声浸提10min后，用1mol/L磷酸溶液调pH为3左右，转移试样至50mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。将试样全部转移至50mL具塞塑料离心管中，以不低于4000r/min的速度离心10min，取上清液，经0.45μm微孔滤膜过滤后，待液相色谱测定。

2.2 标准曲线的绘制

准确吸取5.0mL丙酸标准贮备液（10mg/mL）于50mL容量瓶中，用水稀释至刻度，配制成浓度为1.0mg/mL标准工作液。再准确吸取标准工作液0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL至10mL容量瓶中，分别加入1mol/L磷酸0.2mL，用水定容至10mL，混匀。其丙酸标准溶液的最终浓度分别为0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/ mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL，经0.45μm微孔滤膜过滤，浓度由低到高进样分析，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

报告结果：1.08±0.05g/kg（k=2）

不确定度表达测量结果的分散程度，是一个定量的概念，可以用定量的数字描述。本文对H P L C法测定面包中丙酸钙含量的不确定度因素进行了评定，若检测结果处于标准限量的临界值或标准方法有要求时，必须结合不确定对检测结果进行评判。