RP-HPLC测定祛风除湿膏中血竭素的含量

2018-06-13 08:41王佳茜李俊强赵凯丽王磊
中药与临床 2018年1期
关键词:祛风除湿氯酸盐血竭

王佳茜,李俊强,赵凯丽,王磊

祛风除湿膏是由血竭、黄芪、当归等十五味中药组成,具有益气血,补肝肾,祛风湿,活血通络的功效,用于治疗风湿、类风湿性关节炎、强直性脊椎炎。血竭为传统名贵中药,具有活血定痛、化瘀生肌的功效[1]。血竭素是血竭的主要有效成分之一,故本文以血竭素的含量为指标,采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)建立了祛风除湿膏中血竭素含量的测定方法,为该制剂的质量控制提供了依据。

1 仪器与试药

岛津LC-20AT高效液相液相色谱仪,SPD-20A型控制器;梅特勒托利多AE240电子分析天平;超声波处理器(昆山市超声仪器有限公司)。血竭素高氯酸盐对照品(中国食品药品检定研究院,批号:110811-201506);3批祛风除湿贴膏样品(市售);乙腈、磷酸二氢钠为色谱纯;水为超纯水;其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Kromasil-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm),流动相为乙腈-0.5 moL﹒L-1磷酸二氢钠溶液(41:59),检测波长440 nm,流速1 mL﹒min-1,色谱柱温度为25 ℃,进样量20 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取血竭素高氯酸盐对照品9 mg,精密称定,置10 mL棕色量瓶中,加3%磷酸甲醇溶液使溶解,并稀释至刻度,摇匀,即得,每1 mL中含血竭素0.654 mg(血竭素重量=血竭素高氯酸盐重量/1.377)。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密刮取膏药0.5 g,置于具塞锥形瓶中,加3 %磷酸甲醇溶液50 mL,密塞,精密称重,75 ℃加热回流30 min,放冷,甲醇补足失重,摇匀,滤过即得。

2.2.3 阴性对照溶液 取除血竭以外的其他药材,按确定的制备工艺制备不含血竭的阴性对照样品,按照供试品溶液的制法制备阴性对照溶液。

2.3 含量测定

2.3.1 专属性考察 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性对照品溶液,注入液相色谱仪检测。结果表明,其他组分对血竭素测定结果无干扰。结果见图1。

图1 祛风除湿膏 HPLC图

2.3.2 线性关系考察 精密量取“2.2.1”项下血竭素高氯酸盐对照品溶液(相当于血竭素0.654 mg﹒mL-1)0.1, 0.2,0.4, 0.8, 1 mL于10 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。得浓度为6.5 µg﹒mL-1、13 µg﹒mL-1、26µg﹒mL-1、52 µg﹒mL-1、65 µg﹒mL-1的对照品溶液,如法测定,以血竭素高氯酸盐峰面积积分值为纵坐标(Y),对照品溶液浓度为横坐标(X),绘制标准曲线,进行线性回归分析。结果回归方程为Y= 29081X-2534.1,相关系数r为0.9995。结果表明,血竭素浓度在6.5 µg﹒mL-1-65 µg﹒mL-1内线性关系良好。标准曲线见图2。

图2 血竭素高氯酸盐标准曲线

2.3.3 精密度试验 精密吸取对照品溶液(26 µg﹒mL-1),重复测定6次。结果血竭素高氯酸盐峰面积积分值RSD=1.6 %,表明方法精密度良好。

2.3.4 稳定性试验 吸取同一供试品溶液,分别于供试品溶液制备后的0,2,4,6, 8,12,24小时测定血竭素峰面积。结果血竭素峰面积积分值变异系数RSD=2.1 %,表明供试品溶液在24h内具有良好的稳定性。

2.3.5 重复性试验 刮取同一批祛风除湿膏的膏药,共6份,分别制得6份供试品溶液,如法测定。测得含量的RSD= 1.23 %,表明本方法重复性良好。

2.3.6 加样回收试验 取已知血竭素含量的祛风除湿膏膏药(血竭素含量为1.853 mg﹒g-1),共6份,每份约0.25 g,精密称定,分别精密加入血竭素高氯酸盐对照品溶液(相当于血竭素0.465 mg﹒mL-1)1 mL,按“2.2.2”项下方法制得供试品溶液。如法测定,计算加样回收率。结果见表1。

表1 血竭素加样回收试验

2.3.6 样品含量测定 取3批样品,按确定方法测定血竭素含量,结果3批样品每克含血竭素的平均含量分别为1.879 mg﹒g-1、1.876 mg﹒g-1、1.853 mg﹒g-1。

3 讨论

3.1 供试品溶液制备方法优选时,采用3 %磷酸甲醇溶液作为溶剂,可使样品中的血竭素转变为血竭素的磷酸盐,增强其稳定性[2]。同时比较了3 %磷酸甲醇溶液超声30 min、60 min,加热回流30 min、60 min,结果表明加热回流30 min时,可较好的提取样品中的血竭素。

3.2 色谱条件优选时,参考已有文献[3-5],试验了乙腈-0.5 mol﹒L-1磷酸二氢钠溶液(50:50, 45:50, 35:50)等不同的流动相比例,结果显示当比例为35:50时,目标峰分离度良好。为了缩短分析时间,最终确定流动相为乙腈-0.5 mol﹒L-1磷酸二氢钠溶液(41:59)。

[1]陈军霞,邱碧菡,潘林梅,等.血竭的现代研究[J].现代中药研究与实践,2011,03:81.

[2]窦金凤,曹云飞.HPLC测定活血壮筋丸中血竭素的含量[J].现代仪器,2009,02:32.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].2015:142

[4]谭生建,贺业谦,梁爱君,等.HPLC测定通络止痛散中血竭素的含量[J].解放军药学学报,2012,06:514.

[5]蔡颖.HPLC测定龙血竭胶囊中血竭素的含量[J].药学进展,2004,08:376.

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