大腹园蛛对小鼠的急毒和亚急毒作用

韩 旭，费虹天，姜明明，董笑赢，郑 菲，陶 冶，费 瑞

(吉林大学白求恩医学部基础医学院，吉林 长春 130021)

大腹园蛛(Araneusventricosus)属蜘蛛目(Araneae)、园蛛科(Araneidae)，广泛分布于全球各地，是人们生活中最常见的蜘蛛之一.目前，全世界共有蜘蛛4万多种，而我国有4 300多种，其中一些带有剧毒[1].

园蛛的记载始于《诗经》，而以园蛛作为药物，则主要是记载在公元741年的《本草拾遗》中.园蛛的药用价值主要体现在：治疗阴狐疝气、小儿腹股斜疝、背疮、痔疮、瘰疬、疳积、咽喉炎和咽喉息肉、鼻炎和鼻息肉、脱肛、中风偏瘫、肾阳亏虚等，但对其毒性作用研究尚未见报道[2-4].因此，本文对大腹园蛛进行了急性和亚急性毒性研究，以为大腹园蛛活性的开发提供实验依据.

1 材料

1.1 药品

大腹园蛛采自吉林省吉林市冯家屯，使用时用烘箱焙干并制成粉末.

1.2 实验动物

实验动物为体重18～22 g的昆明种纯系小鼠，由吉林大学基础医学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK-(吉)2013-0001.实验前在室内常规饲养2 d.

2 实验方法

2.1 大腹园蛛对小鼠急性毒性实验

选取健康昆明小鼠20只，雌雄各半，随机分为空白组和实验组，每组10只.根据急性毒性剂量分级标准，小鼠适应饲养3 d并禁食 12 h后，按15 g/kg剂量，经口1次性灌胃给予大腹园蛛粉(Araneusventricosuspowder，AP)溶液0.8 mL；空白组给予同剂量的蒸馏水.各组小鼠经灌胃后，在相同条件下分笼饲养，室温20℃～25℃，普通颗粒饲料饲养，自由饮水.实验观察两周，定时记录小鼠反应情况及死亡数量[5-8].

2.2 大腹园蛛对小鼠最大耐受剂量实验

选取健康昆明小鼠20只，雌雄各半，随机分为空白组和实验组，每组10只.根据我国《食品安全性毒理学评价程序和方法》标准，小鼠适应饲养3 d并禁食 12 h后，按最大给药剂量(20 g/kg)和容积(40 mL/kg)，分两次经口灌胃给予大腹园蛛粉，间隔4 h；空白组给予等量的蒸馏水.小鼠经灌胃后，在相同条件下分笼饲养，室温20℃～25℃，普通颗粒饲料饲养，自由饮水.观察14 d，并记录动物反应情况[5-8].

2.3 大腹园蛛对小鼠亚急毒实验

选取健康昆明小鼠80只，适应饲养3 d，随机分4组，每组20只，雌雄各半.设对照组和给药组.给药组按1.25 g/kg( AP低剂量组)，2.5 g/kg( AP中剂量组)，5 g/kg(AP高剂量组)分别灌胃给予大腹园蛛粉溶液，每天一次，连续4周.末次给药后24 h测定小鼠脏器系数、血常规及血液生化指标[5-8].

3 实验结果

3.1 小鼠的急性毒性

大腹园蛛粉经灌胃给予小鼠后，第1天小鼠的自由活动减少，食量下降；第2—3天，小鼠的食量、活动恢复正常；第14天实验结束后，20只给药小鼠均无死亡，小鼠的活动、毛色、食量等与空白对照组相比，无明显差异.经解剖小鼠，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、胃肠等脏器，与空白组相比，也无明显病变和差异.根据国家急性毒性(LD50)剂量分级标准，大腹园蛛的LD50值>15 g/kg(见表1).

表1 大腹园蛛对小鼠急性毒性(LD50)实验

3.2 小鼠的最大耐受剂量

以最大的允许浓度和动物耐受的最大容积，在一天连续两次给药后，持续观察14 d，小鼠无一只死亡，小鼠的活跃程度、外观特征、生活习性等均未有异常改变.经解剖小鼠观察其心、肝、脾、肺、肾、脾、胃等脏器，与对照组相比，未发现有明显的病变和差异.表明昆明小鼠对大腹园蛛的最大耐受剂量为20 g/kg.

3.3 小鼠的亚急性毒性

3.3.1 一般症状

给药期间，没有发现小鼠中毒和其他异常现象.小鼠进食量和饮水量正常、大小便无异物、生长发育状态良好.给药组与对照组相比，小鼠体重增长无明显变化，统计分析结果差异不显著(P>0.05)，表明大腹园蛛粉对小鼠生长发育无影响(见表2).

表2 大腹园蛛对小鼠体重的影响 g

3.3.2 脏器系数

内脏是生物体发挥生理功能的主要场所，其结构和形态改变可直观反映机体的健康情况，而脏器系数是毒理实验中的常用指标，可反映毒物对机体的损伤程度[10].据此，本实验检测了大腹园蛛粉对小鼠脏器的影响，结果(见表3)表明，给药组与对照组相比，心、肝、脾、肺、肾的重量及脏器系数无明显变化，统计分析结果显示各组差异不显著(P>0.05)，表明小鼠经给药后，脏器未受影响.

表3 大腹园蛛对小鼠相对脏器系数的影响

3.3.3 血常规指标检测

血液对机体的新陈代谢、内环境以及功能调节都有重要的作用，而血常规检测是对血液中的红细胞、白细胞以及血小板等系统进行的测定与分析，因此，在毒理方面，可通过血常规检测检验外来物质是否对血液成分造成影响，从而发现组织或器官的病变.本实验经连续给药4周后，给药组与实验组相比，白细胞、红细胞、血小板的数量无明显差异(见表4).统计学分析结果显示，各组间差异不显著(P>0.05)，表明大腹园蛛粉对小鼠血液中的白细胞、红细胞和血小板数量无影响.

3.3.4 血液生化指标检测

血液生理生化指标也是毒理学实验常用的测评指标，因为血液生理指标能反映机体的健康状况，因此对该指标的检测可为疾病诊断和监测提供依据[11].本实验经连续给药4周后，给药组与实验组相比，各剂量组中除谷草转氨酶和尿酸有所改变之外，其他各项生化指标均无明显差异(P>0.05)，表明大腹园蛛粉对小鼠机体无明显有害影响(见表5).

表5 大腹园蛛对小鼠生化指标的影响

4 讨论

大腹园蛛是我国最常见的蜘蛛种类之一.据报道，大腹园蛛具有很好的治疗疾病作用.为探究大腹园蛛的安全性并为临床安全用药提供可靠依据，我们对成体大腹园蛛进行了系列的毒性实验研究[1，8].

急性和亚急性毒性实验是评价外源化合物安全的重要指标.其中LD50是指在实验动物群体中能引起半数动物死亡的剂量，是衡量药物急性毒性高低的常用指标[9-10].我们的急性毒性实验结果显示，实验组小鼠无一死亡.根据国家急性毒性剂量分级标准，判定成体大腹园蛛的LD50值>15 g/kg，属于实际无毒级.

亚急性毒性实验是指人或实验动物染毒期或接触毒物时间不长(一般为10 d乃至数月)情况下对机体可能造成的功能或机体损害，它可以进一步了解受试物的长期毒性.因为即使是依据急性毒性分级标准划分为相对无毒的物质，但由于持续存在于环境中或长期食用，在机体内具有一定的生物蓄积能力，也有可能产生不良的致病效应[11].本文通过对小鼠体重、脏器系数、血液细胞指数和生化指标上的变化情况进行分析，研究了大腹园蛛的亚急性毒性作用，以进一步判定大腹园蛛的安全性.经过检测小鼠的体重变化和心、肝、脾、肺、肾的形态学及血液生理指标发现，大腹园蛛低、中、高三个剂量组与空白对照组相比，各项指标均无明显差异，表明大腹园蛛粉不能影响小鼠体重、脏器和血液指标改变，无一定蓄积性.

肝脏和肾脏是人体内物质代谢最为活跃的重要器官，它能清除体内代谢产物及某些废物和毒物.本实验通过对肝脏和肾脏生化指标的检测，探究了大腹园蛛的影响.结果证实，各组中谷草转氨酶、碱性磷酸酶、白蛋白、总蛋白、尿素氮和对照组相比，均无明显差异；而谷丙转氨酶和尿酸与对照组相比虽有一定变化，但仍在正常范围内，且与对照组及组间无明显差异.结合其他相关脏器指标，我们认为大腹园蛛粉对小鼠肝脏和肾脏无明显不良反应.至于更深入的和长期慢性毒性作用的研究尚待进一步进行.

本研究通过急性毒性和亚急性毒性实验均未发现大腹园蛛粉有明显的毒性作用，表明大腹园蛛具有较好的安全性.这不仅为今后进一步的药物开发提供了理论和实验依据，而且也为其生物活性研究奠定了基础.

[参 考 文 献]

[1] 韩旭，高久春，张欢，等.大腹园蛛的细胞及遗传生殖毒性研究[J].东北师大学报(自然科学版)，2016，48(2)：118-121.

[2] 胡献国.蜘蛛的药用[J].家庭中医药，2013(7)：48-49.

[3] 浦飞飞.蜘蛛毒素的生物学活性研究进展[J].中国药理学通报，2014，12：1651-1654.

[4] 唐泉富.蜘蛛研究与利用概述[J].森林病虫通讯，1994(1)：44-46.

[5] 佟巨慧，迟立超，张颖丽，等.羧甲基壳聚糖银的急性和亚急性毒性研究[J].吉林大学学报(医学版)，2010，36(4)：673-677.

[6] 迟立超.草苁蓉多糖的抗炎作用及毒性实验研究[D].长春：吉林大学，2008.

[7] 费瑞，迟立超，杜建石，等.草苁蓉多糖的毒性实验研[J].东北师大学报(自然科学版)，2008，40(2)：98-100.

[8] 韩旭.大腹园蛛粉的毒性及抗炎作用研究[D].长春：吉林大学，2016.

[9] 张萍，王加才.硫代甜菜碱对小鼠的急性和亚急性毒性实验[J].饮料工业，2007(9)：13-15.

[10] 陈进汝，刘熙李，冬梅云.南松松塔提取物急性毒性实验研究[J].时珍国医国药，2017，28(8)：1837-1840.

[11] 张斌.苏丹红对昆明小鼠的亚急性毒性的病理学研究[D].石家庄：河北农业大学，2009.