萨×哈杂交母羊GHRH基因与生长性状关联分析

袁晓峰 ，俞银江，赵 博，邵焱焱 ，曾献存

（1.石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832003；2.新疆塔城165团畜牧兽医站，新疆 塔城 834609）

作为下丘脑分泌的一种多肽类物质，生长激素释放激素 （GHRH）能正向调控垂体生长激素（GH）的合成与分泌，从而调控动物的生长发育[1]。在草食家畜GHRH基因的研究方面，有关牛GHRH基因的多态性及其与生长性状的关联分析的研究相对较多[2-4]，而在绵羊上的研究相对较少。王金玲等[5]克隆了草地藏系绵羊生长激素释放激素基因部分cDNA，并进行了生物信息学分析。马志杰等[6]利用HaeⅢ内切酶分析了欧拉型藏羊GHRH基因内含子2部分序列的多态性。生长性状是衡量畜牧生产效益的重要经济性状。近年来，利用引进的优良肉羊品种对新疆地方绵羊品种进行杂交改良已逐渐成为该地区肉羊养殖业提高养殖效率和提升养殖效益的重要途径。该研究以萨福克羊与哈萨克羊杂交母羊（以下简称萨×哈杂交母羊）为研究对象，对GHRH基因的rs400079090和rs419322328位点多态性及其与生长性状的关联性进行分析，以确定2个SNP位点对萨×哈杂交母羊生长性状的影响，旨在寻找能够应用于绵羊杂交后代生长性状标记辅助选择的SNP，以期加快新疆地方肉用绵羊品种的杂交改良进展。

1 材料与方法

1.1 样品来源

血样采自新疆生产建设兵团农九师165团养殖的萨×哈杂交成年母羊（n=180），所有羊只在相同环境下饲养。采用血液基因组DNA提取试剂盒（北京天根生化科技有限公司）提取杂交羊的血液基因组DNA，-20℃冷冻保存备用。

1.2 试验方法

1.2.1 生长性状指标测定：利用常规方法对杂交羊的生长性状指标进行测定，测定的指标包括体斜长、体高、胸围、胸宽和臀宽。

1.2.2GHRH基因SNP检测：提取的血液基因组DNA送康普森公司进行MassARRAYSNP检测。经核酸蛋白分析仪及琼脂糖凝胶电泳检测符合要求的基因组DNA，调整基因组DNA浓度大于50 ng/mL。根据SNP位点序列信息，使用Sequenom公司的引物设计软件Assay design 3.1设计PCR反应和单碱基扩展引物 （见表1），进行rs400079090和rs419322328位点的基因分型检测。

1.3 统计分析

2个SNP位点的分型数据和生长性状数据的关联分析采用SPSS 17.0软件中的一般线性模型方法[7]：Y=μ+基因型+随机误差，其中，Y 为性状观察值，μ为平均数。试验数据以平均值±标准误表示。利用Excel软件计算等位基因频率、基因型频率、群体杂合度（He）、多态信息含量（PIC），并进行χ2检验。

2 结果与分析

2.1 群体遗传参数

2个SNP的基因型频率、等位基因频率及部分遗传特征参数见表2。由表2可知，rs400079090位点检测到3个基因型，rs419322328位点TT基因型缺失。群体杂合度（He）和多态信息含量（PIC）是评价群体内遗传多样性的重要指标，萨×哈杂交母羊的rs400079090和rs419322328位点属于中度多态（0.25＜PIC＜0.5）。 rs400079090 偏离哈代—温伯格平衡（P＜0.05），rs419322328 符合哈代—温伯格平衡（P＞0.05）。

表1 GHRH基因2个SNP位点的引物信息

表2 GHRH基因2个SNP位点的基因型频率、等位基因频率及遗传特征参数

表3 rs419322328位点不同基因型对萨×哈杂交母羊生长性状的影响

2.2 关联分析

对萨×哈杂交母羊GHRH基因2个SNP位点的不同基因型与5个生长性状指标进行关联分析，结果见表3。由表3可知，rs419322328位点不同基因型对体斜长、胸宽有显著影响：GG基因型个体的体斜长极显著小于GT基因型个体 （P＜0.01），胸宽显著大于GT基因型个体 （P＜0.05）。rs400079090位点不同基因型对萨×哈杂交母羊生长性状影响不显著（数据略）。

3 讨论

作为垂体生长激素的正向调控因子，GHRH基因在调控动物生长发育等方面具有重要作用。程稳中等[8]研究表明，通过肌肉注射GHRH表达质粒能提高羊的生长速度、促进体重增加，这与Meng等[9]的研究结果相一致。该研究首次对萨×哈杂交母羊GHRH基因的rs400079090和rs419322328位点多态性进行研究，这2个SNP位点位于GHRH基因5′UTR区域。成年杂交母羊生长性状关联分析结果表明，rs419322328位点GG基因型个体胸宽显著大于GT基因型个体 （P＜0.05），但是体斜长极显著小于GT基因型个体（P＜0.01），这可能与杂交优势或试验样本数较少有关。研究结果为将rs400079090和rs419322328位点应用于绵羊杂交后代生长性状标记辅助选择奠定了基础，在后续的研究中需要进一步扩大GHRH基因SNP选择范围，扩大试验样本数量，并在回交群体中进行进一步验证。

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