浅谈微生物检验常见误差与质量控制

王慧玲

摘 要：微生物检查是生物制药企业常规安全性检查的重要组成部分。微生物限度检查法方法验证工作十分繁琐，影响因素包括培养基、菌株、试验步骤和供试品的制备方式等。本文从微生物检查中常见误差谈起，提出质量控制措施，供参考。

关键词：微生物检验；影响因素；控制措施

微生物检验能够为人们感染性疾病的诊断和治疗提供准确的参考依据，在对微生物进行检验的过程中，其步骤复杂，对检测人员的操作精细度要求也较高，一个环节出现问题很可能会使检验结果出现误差，进一步为患者的疾病诊断、治疗带来很大的不良影响。有效提高、微生物实验室对各种检验样品的检验质量，进而确保检测结果的准确性、可靠性，从而提高室的检验能力以及技术水平。

1微生物檢查中常见误差

1. 实验者主观因素及操作技能中的误差

1.1. 无菌观念淡薄。操作马虎、随意，容易造成供试品的再次污染以及已污染菌的繁殖及死亡，从而不能真实的反映供试品的染菌情况。在检验过程中的每一个环节，每个空间，每个操作，每个工具及材料，没灭菌者都是带菌者，都会对检验结果产生不确定影响，因而应牢固的建立无菌观念。

1.1. 操作技能中误差。操作不熟练，实验条件控制不严格，细节不注意等都会造成损失。每次操作前的消毒处理必须彻底，不得留有死角，对实验所用器具根据材料的性质进行相应的灭菌；开启供试品包装的工具，如剪刀、砂轮等也应消毒，实验用的器具如吸管应清洗干净，灭菌，放液时不得接触液面，每ml样品必须放尽，否则影响细菌记数的准确性；这些细小环节都有可能污染供试品的可能，使平皿染菌数增多，导致实验误差。

1. 操作环境不符合要求带来的误差

由于条件限制，一些单位的无菌室在设计上不符合要求，缺少传递箱或缓冲设备不健全，在操作中传递物品不方便，人员的频繁走动增加了染菌机会。无菌操作台或净化工作台要定期检测其洁净度，确保达到100级。洁净级别及检查方法通常采用尘粒数及浮游菌数或沉降菌数测定法，净化工作台中的高效及中效过滤器应根据检测情况，必要时及时换处理。这项工作在各单位检验工作中应得到足够重视，确保操作台达到规定的技术指标。

1. 标准菌株的选择和保存及管理不当引起的误差

微生物检验的质量控制必须要有标准菌株并且其生物学特征必须典型稳定，如形态变异、菌落变异，耐药性变异等均可使平板中细菌呈丛集或分散不均。菌种保藏与管理应有完整的程序，保藏的菌种必须具备该菌种的详细历史及有关资料。一般是首先填写菌种卡片，登记菌种名称编号，来源历史，形态特征，生化与血清学鉴定，以及菌种传代次数、最宜培养基和培养条件、保藏方法、贮存条件及保藏地址等。

1. 培养基灵敏度下降引起的误差

干粉培养基使用较方便，但由于其极易吸潮，如存放不当出现凝块，则其凝固性较差，应避免使用。新鲜配制的培养基应在2℃～20℃避光保存，但不得冻结，保存时间不得过2周。硫乙醇盐流体培养基储存过程中，若氧化还原层超过1/5，须经水浴加热煮沸10min方可使用，但只限一次。否则可使培养基中糖、微生物和氨基酸受到破坏，影响质量。

1. 灭菌方法不当造成的实验误差

高压消毒灭菌法是最常用最有效的灭菌方法，为了保证高压灭菌的质量确实达到高压消毒的目的，首先要选择合格的压力蒸气灭菌器，其次操作人员必需了解灭菌器的原理并遵守其操作规程，特别要排尽锅内的冷空气，否则虽然压力达到，而温度达不到规定的要求，灭菌就可能不彻底。

微生物检验的质量控制

开展对微生物检验的质量控制，是实验室内部检测的一项基础工作，会直接影响到细菌学最终的检测结果的可靠性以及准确性。

2.1加强对微生物检验室质量管理体系的质量控制

质量管理体系的建立关系到检验室各项大小工作的开展，因而必须加强对其的资质认定，即做好计量认证工作，应按照检验室相关的资质认定检验要求、评审准则来切实做好各项工作，不断完善以及有效运行此质量管理体系。要按照实验室的相关管理手册要求，进行正确的管理及使用各种设备仪器、药品，及时发现存在的问题及解决，能随着不断发展的检验技术做及时地更新。此外，要明确每一个实验室人员具体的岗位职责，并督促其坚决执行。

2.2加强对微生物检验员的质量控制

加强对检验员的质控，首先应为检验员提供学习专业知识的教育培训机会，定期派送人员到先进的院校学习新理论、新技术等，定期安排检验员参加一些应急演练和实际考核、对未知菌株进行分离鉴定，以促使检验员对各种样品的检测能力。

2.3微生物检验分析全过程的质量控制

2.3.1分析前的质控

分析前的质控包括：（1）填写检验样品的申请单。这个环节要求检验员如实地、详细地填写病患组基本的情况为临床的诊治提供相关依据。（2）病患的准备工作。检验员结合患者实际情况，要求医护人员提醒病患，在采集样品标本之前的准备工作，如休息、饮食等方面。应选择在病患停药或是治疗前后的3天采集样品标本，利于避免药物对检测结果的影响。（3）标本采集。标本的采集工作关系到分析的结果。因而，检验员应规范标本采集的部位、时间、器具以及储存等环节的工作。（4）标本验收。检验员应仔细核对标本的标签内容是否符合检验申请单的内容，详细了解标本的采集方法及送检时间，检查标本的质量是否达标，且可根据检验目的做出相应的处理。

2.3.2分析中的质控

在对微生物检验的质控中，应制定行之有效且符合质量管理体系相关要求的管理文件。以为微生物检验质量提供可控依据，严格记录检验室日常的质量记录以及具体的操作流程，以及时发现不足之处并及时纠正，提高检测的质量。检验室设备的质量方面，应每日对冰箱等设备进行使用监控记录。对于高压灭菌器等仪器应进行定期保养、维修，并进行记录，以确保检验室各类仪器的正常运行。此外，还应对培养基、抗血清以及试剂等进行质控。

2.3.3分析后的质控

检验员要核实好化验单内容，保证病患资料无误，从而为临床诊治提供依据，检验员应仔细比较近期检测结果和最终的检测结果，分析各个参数之间的关系，便于对临床资料进行综合地、科学地分析。严格按照报告单的审核制度，安排专人对报告单进行统一接收、送达以及签收。检验人员应结合基础理论知识，合理地、科学地规定标本在检测后的正确保存方法及时间，便于日后的信息资料复查及核对。

总之，影响微生物检验结果准确性和可靠性的因素是多方面的，通过提高检验人员素质，严格规范操作流程，提高标本质量，能够有效控制影响微生物检验结果的因素，从而提高微生物检验工作的质量，保证微生物检验结果的准确性和可靠性。

参考文献

[1]李凤玉，叶伟雄.浅析突发公共卫生事件中微生物检验质量的控制[J].中国医药指南，2012，23（01）.

[2]李慧怀，唐俭.微生物检验标本不合格原因分析及质量控制对策研究[J].大家健康（学术版）2015，11（12）.

（作者单位：山东润泽制药有限公司）