浅谈快速检测技术在食品微生物检测中的应用

◎ 李昊翔

（闽西职业技术学院，福建 龙岩 364000）

近些年来，食品安全问题逐渐加重，加强食品检测已迫在眉睫。传统的食品检测方法以琼脂平板培养法、显微镜镜检法为主，虽可检出微生物，但效率却很低。以色谱法、免疫学检测法为代表的快速检测技术的出现，弥补了传统检测方法的缺陷。可见，为提高食品微生物检测效率，对快速检测技术的应用效果进行分析较为必要。

1 快速检测技术类型及其优势

1.1 色谱法

色谱法为食品微生物快速检测技术的一种，包括气相色谱法与液相色谱法两种。由液相色谱法所衍生的高效液相色谱法可借助高压输液泵将具有不同极性的溶剂以一定的比例加入到色谱柱中，在此基础上，将流动相带入至色谱柱，使两种溶液在色谱柱中相互反应[1]，进而根据反应结果，获取检测数据。与传统液相色谱法和气相色谱法相比，将高效液相色谱法应用到食品微生物检测过程中，可能够有效提高检测速度，提高检测结果的精确度。

1.2 免疫学检测法

用于食品微生物检测的免疫学检测法包括酶免疫检测法、免疫层析法、免疫荧光法等多种。其中，酶免疫检测法包括均向与非均相两种，后者较为常用。酶联免疫吸附法为酶免疫检测法的一种[2]。理论上，具有生物活性的物质均具有特异性抗体，如以抗原及抗体之间的特异反应为基础，对微量元素以及发光物质等标记物进行标记，将能够有效测定出生物活性物质的微量指标。将该方法应用到食品微生物检测过程中，可使食品中的特定微生物被有效标记。根据标记结果，既可判断出食品中的微生物类型及含量。

1.3 分子生物学检测法

PCR技术与基因芯片技术为生物分子技术中的两大代表性技术。以聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，简称PCR）为例，该技术模仿DNA的天然复制过程，对不同物质中的微生物进行测量。采用该方法检测，首先需对DNA进行变性，使其形成单链DNA[3]。在此基础上，经退火、延伸等过程，既可得到最终的检测结果。当前，部分PCR扩增区较短。因此，Taq酶的活性，对DNA复制时间的影响较为有限。将PCR技术，应用到食品微生物检测过程中，同样能够使检测效率得以提升。与传统的镜检法相比，优势显著。

2 高效液相色谱法检测水产品中阿维菌素的含量

2.1 材料与方法

2.1.1 仪器与试剂

（1）仪器。高效液相色谱仪，电子天平，离心机。

（2）试剂。阿维菌素标准品、储备液、衍生化试剂等。其中，阿维菌素标准品，含量为96%。储备液需以标准品为准，采用乙腈将其溶解，并定容至100 mL制备而成。实验所用衍生化试剂，均需现场配制。乙腈、甲醇为色谱纯，无水硫酸钠为分析纯。

2.1.2 样本与色谱条件

（1）样本。本实验所用水产品样本来源于国内某实验场，样本类型为草鱼及对虾。入选样本均为健康成年水生物。

（2）色谱条件。色谱柱：Waters Symmetry C18（4.6 mm×250 mm）；流动相：乙腈-水，体积比为98∶2；检测仪器：荧光检测器为主。

（3）检测参数：采用荧光检测器，波长为475 nm，进样量为20 μL，柱温为室温。

2.1.3 标准曲线的绘制

取阿维菌素标准储备液，利用乙腈将溶液的浓度分别稀释为1、10、50、100 μg/L。取不同浓度的溶液0.5 mL加入至离心管中，取衍生化试剂衍生化15 min。将甲醇加入至衍生化后的溶液中，定容为1 mL。使甲醇与溶液相互反应40 min后停止。采用HPLC-FD对溶液进行测定，根据测定结果，记录峰面积，绘制标准曲线，得到最终方程，判断各项参数是否符合线性关系。

2.2 结果与分析

2.2.1 色谱图及线性关系

当标准品的浓度为10 μg/L时，可见色谱基线基本平稳。通过对阿维菌素保留时间的观察，发现平均时间约为7.9 min。进一步观察线性关系曲线发现，当阿维菌素的使用量，为1.0～100.0 μg/L时，标准曲线方程为：Y=1293.001x+12.487，r=0.9999。

进一步观察发现，阿维菌素的回收率处于75%以上，峰面积最高为15%。当加标量为0.1 μg/kg时，回收率、信噪比及峰面积均达到了极限值。因此，可视0.1 μg/kg 为检测限。

2.2.2 回收率与精密度

两种水产品检测回收率及精密度结果见表1与表2。

表1 草鱼检测回收率及精密度表

表2 对虾检测回收率及精密度表

2.2.3 检测结果

①采用高效液相色谱法，对空白样品中的阿维菌素含量进行检验，未检出样品中含有阿维菌素。②采用采用高效液相色谱法检验浓度为1 μg/L的样品，检验结果为0.98 μg/L。③采用该方法检验浓度为10、50、100 μg/L的样品，检验结果分别为9.94、49.87、99.96 μg/L。上述检验结果表明，将高效液相色谱法应用到水产品阿维菌素检验过程中，检验结果的准确度较高，与实际结果差异极小，可予以忽略。

2.3 提高检测结果准确度的途径

2.3.1 严格控制试剂类型

采用高效液相色谱法检验草鱼与对虾两种水产品中阿维菌素的浓度，检测结果受标准溶液溶剂类型的影响较大。将甲醇作为主要试剂与衍生化试剂进行反应，虽能够检出微生物含量，但受吹干等处理过程的影响，部分待测物可能存在损失[4-5]。因此，检测结果的准确度一般不高。如将乙腈作为主要试剂，应用到微生物检测过程中，将可有效省略吹干的过程，减少待测物损失。进而使检测结果的准确度，能够得到进一步的提升。

2.3.2 严格控制提取条件

采用高效液相色谱法，检验草鱼与对虾两种水产品中阿维菌素的浓度，如取0.5 g肌肉进行检测，将乙腈溶液量控制为15 mL，仅需重复检测2次，既可得到最终结果。但由于SPE柱吸附活性差，因此净化效果较差。如将无水硫酸钠，应用到检测过程中。将能够有效改善净化效果，脱去提取液中的水分，提高测量结果的重复性，提高检测结果的准确度。

3 结论

采用快速检测技术中的色谱技术对水产品中的阿维菌素进行检测，能够有效缩短检测时间、提高检测结果的准确度，与传统的镜检法相比优势显著。对此，我国食品安全卫生领域应将以色谱法为代表的各项快速检测技术应用到食品微生物检测过程中，以及时发现问题食品，及时对其进行整治，使我国的食品安全问题得到解决。