氟苯尼考β-环糊精包合物中试产品的质量评价

胡 帅，李凌峰，李灵娟，袁富威

(河南牧翔动物药业有限公司，河南郑州 451164)

氟苯尼考(florfenicol)为酰胺醇类动物专用广谱抗生素，其抗菌活性明显优于氯霉素和甲砜霉素。目前该药在兽医临床上应用非常广泛，但该药难溶于水,口服生物利用度很低。因此，如何通过制剂技术提高该药的溶解度及溶出速率对于氟苯尼考的临床应用具有重要意义。

自从1903年首次从发酵液成功提取出β-环糊精以来，研究人员在环糊精的制备、性质和应用等方面取得了巨大的进展。特别是近年来，环糊精及其衍生物在药学中的应用引起了研究人员的极大兴趣。药物环糊精包合物在提高药物的溶解度、溶出速度、生物利用度等方面显示出独特的性能和应用价值[1]。

关于氟苯尼考β-环糊精包合物在实验室研究方面已有一些报道，如采用饱和溶液法[2-6]和超声波法[7]制备出氟苯尼考β-环糊精包合物，但仍然存在以下问题：包合物评价体系不完善、包合率测定方法不恰当、不能综合评价氟苯尼考β-环糊精包合物。因此，有必要建立一种完善的氟苯尼β-环糊精的评价体系，来指导氟苯尼考β-环糊精包合物的中试转化。笔者采用超声波-离心喷雾干燥中试生产工艺，以β-环糊精为包含材料制备包合物，通过薄层色谱法、X-射线粉末衍射法、高效液相色谱法对氟苯尼考β-环糊精包合物进行质量评价。

1 材料与方法

1.1材料与仪器

1.1.1材料。氟苯尼考对照品(中国兽医药品监察所)；氟苯尼考 (浙江康牧药业有限公司)；β-环糊精(山东新大生物科技有限公司)；溴化钾(光谱纯，天津科密欧化学试剂有限公司)。

1.1.2仪器。1206型高效液相色谱仪(美国安捷伦科技公司)；LPG300高速离心喷雾干燥机(无锡市能达干燥设备有限公司)；X射线衍射仪D8 FOCUS(德国布鲁克公司)；GoodSee薄层色谱成像仪(上海科哲生化科技有限公司)；KC7000W超声波机(济宁科源超声波设备有限公司)。

1.2氟苯尼考含量的测定采用高效液相色谱法[8]测定氟苯尼考含量。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-冰醋酸(100∶197∶3)为流动相；检测波长为224 nm；取样品适量，精密称定，加入流动相溶解并定量稀释成每毫升约含50 μg的溶液，作为供试品溶液，精密量取10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取氟苯尼考对照品，采用相同方法测定。采用外标法，根据峰面积计算氟苯尼考含量。

1.3氟苯尼考β-环糊精包合物鉴别

1.3.1薄层色谱法。取样品约1 g，置于烧杯中，加入50 mL 无水乙醇，超声10 s后离心弃去上清，将沉淀溶解后再加入50 mL 无水乙醇，重复上述操作，重复2次。收集沉淀物，于60 ℃下烘干。取包合物烘干物适量(约相当于氟苯尼考5 mg)，置于2 mL离心管中，加入1 mL水使其溶解，得到供试品溶液A；采用相同方法制得物理混合物烘干物，加入流动相溶解得到溶液B。取氟苯尼考对照品适量，加入甲醇制成10 mg/mL氟苯尼考溶液，作为对照品溶液。吸取上述A、B溶液各2 μL，对照品溶液1 μL分别点于同一硅胶GF254板上，以氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水(15∶6∶15∶1)为展开剂，展开后晾干，置于紫外灯(GF254)下检视。供试品溶液A所显示斑点位置应与对照品相同，供试品溶液B不显示斑点。

1.3.2X-射线粉末衍射法[9]。取供试品，采用X-射线粉末衍射法分析。试验条件如下：辐射源CuKα，管电压40 kV，管电流60 mA；入射狭缝0.6 mm，索拉狭缝4°；扫描速度0.2 s/step；扫描步长0.02°。

1.4氟苯尼考β-环糊精收率和包合率的测定

1.4.1氟苯尼考β-环糊精收率的测定。按照以下公式计算氟苯尼考β-环糊精的收率：

1.4.2氟苯尼考β-环糊精包合率的测定。取制得的氟苯尼考β-环糊精包合物，按照“1.2”的方法进行含量测定，得到总的氟苯尼考含量C总。另取氟苯尼考β-环糊精包合物 1 g，加入50 mL 无水乙醇，超声10 s后离心弃去上清，将沉淀溶解后再加入50 mL 无水乙醇，重复上述操作，重复2次。收集沉淀物，置于60 ℃条件下烘干，按照“1.2”的方法测定烘干物的含量，得到包合的氟苯尼考含量C包合。按照以下公式计算氟苯尼考β-环糊精的包合率：

2 结果与分析

2.1氟苯尼考β-环糊精包合物的制备参照笔者发明专利[10]中的制备方法进行中试，分3批进行。称取氟苯尼考40 kg和β-环糊精160 kg，加入反应釜中，加入纯化水600 kg，于100 ℃下恒温加热溶解，得到料液A；使用超声仪，以50 Hz的频率对料液A超声2 h，得到料液B；使用LPG型高速离心干燥机对料液B进行离心喷雾干燥，干燥产物即为氟苯尼考-β-环糊精包合物，干燥参数设置如下：离心盘转速22 000 r/min，进风温度150 ℃。

2.2氟苯尼考β-环糊精包合物鉴别结果

2.2.1薄层色谱法鉴别结果。从图1可以看出，包合物中的氟苯尼考由于被包合而未能被洗液洗去，包合物供试品(图1B)与对照品(图1A、D)相同位置可见清晰斑点，分离效果好；氟苯尼考与β-环糊精混合物(图1C)中游离的氟苯尼考全部被洗去，故不显示斑点。此鉴别方法不仅鉴别出氟苯尼考，而且能将包合物与混合物区分开来。

2.2.2X-射线粉末衍射法鉴别结果。氟苯尼考、β-环糊精、氟苯尼考β-环糊精混合物、氟苯尼考-β-环糊精包合物的X-射线衍射图分别见图2。从图2可以看出，氟苯尼考β-环糊精物理混合物衍射图峰(图2C)为氟苯尼考(图2A)和β-环糊精(图2B)衍射峰的叠加；包合物呈现典型的无定型衍射图(图2D)，氟苯尼考和β-环糊精的结晶衍射峰均已消失，表明氟苯尼考以无定型或分子形式包合，形成了氟苯尼考β-环糊精包合物，包合形式为分子包合。

注：A、D.氟苯尼考对照品；B.氟苯尼考β-环糊精包合物；C.氟苯尼考与β-环糊精混合物Note：A，D.Florfenicol reference substance；B.Florfenicol β-cyclodextrin inclusion complex；C.Mixture of florfenicol and β-cyclodextrin inclusion图1 氟苯尼考包合物薄层鉴别图Fig.1 TLC identification results of florfenicol inclusion complex

图 2 氟苯尼考(A)、β-环糊精(B)、氟苯尼考β-环糊精混合物(C)、氟苯尼考β-环糊精包含物(D)的X-射线衍射图Fig.2 X-ray diffraction diagram of florfenicol(A)，β-cyclodextrin(B)，mixture of florfenicol and β-cyclodextrin(C)，florfenicol-β-cyclodextrin inclusion complex(D)

2.3氟苯尼考β-环糊精包合物的收率和包合率制得3批氟苯尼考β-环糊精包合物，测得平均收率为(98.20±0.37)%,平均包合率为(95.10±1.28)%。3批氟苯尼考β-环糊精包合物的收率和包合率都较高，批间精密度较好。

3 结论

氟苯尼考β-环糊精鉴别方法有傅里叶红外光谱法、X射线粉末衍射法和差示扫描量热法。傅里叶红外光谱法测定样品时基线易漂移，重复性差；X射线粉末衍射法和差示扫描量热法只能证实有新的物相产生，不能直接证实包合物的产生及产物的包合率，目前这些鉴别方法在药典中只作为药物的辅助鉴别方法。薄层色谱方法作为药典中普遍采用的特征性鉴别方法，具有专属性强和易操作等优点。

包合率作为包合物的最重要指标，是判断包合工艺质量的重要指标。罗娟等[3]报道了氟苯尼考β-环糊精的包合率测定方法，但其实际测定的是氟苯尼考原料的回收率，而不是氟苯尼考β-环糊精包合率。该研究通过将游离氟苯尼考与包合氟苯尼考分离，建立了氟苯尼考β-环糊精包合率的测定方法，可以科学评价产物中氟苯尼考β-环糊精的纯度。

该研究建立了氟苯尼考β-环糊精薄层色谱法和包封率的测定方法，结合X射线粉末衍射法和高效液相色谱法完善了氟苯尼考β-环糊精的评价方法。通过该评价体系，有效指导了氟苯尼考β-环糊精的中试生产。包合率低和缺乏大生产设备是制约氟苯尼考β-环糊精包合物扩大化生产的两大主要因素。该试验结果表明，采用超声波-离心喷雾干燥法中试制备的产物为氟苯尼考β-环糊精包合物，收率为98.2%，包合率为95.1%；收率和包合率均较高，较好地解决了上述两大问题，该中试制备工艺简单可控，重复性好，可扩大化生产，具有较好的工业化前景。