免疫分析仪的四种检验方法对慢性肝病患者的检测结果对比

张文慧 抚顺市第三医院检验科 （辽宁 抚顺 113004）

内容提要： 目的：探讨四种免疫检验方法对慢性肝病患者的检测情况。方法：选择2016年11月～2017年12月本院收治的90例慢性肝病患者的血清标本作为本次实验的研究对象，对比酶联免疫吸附试验法、胶体金层析法、免疫电子发光试验法和聚合酶链式反应法检测慢性肝病患者血清标本的结果。结果：四种方法检测慢性肝病的符合率分别为68.9%、72.2%、83.3%、96.7%，聚合酶链式反应法检测慢性肝病的总符合率比其他三种方法要高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论：检测慢性肝病，不同的检测方法在原理、成本、总符合率等方面都有着不同，需要综合评估检测方法，以挑选最恰当的检测方法。

慢性肝病已成为当前世界最普遍、最广泛且危害最重的病毒性肝炎之一，精准且迅速诊断乙肝，十分有利于病症的治疗与预后[1]。本次实验选择2016年11月～2017年12月本院收治的90例慢性肝病患者的血清标本作为本次实验的研究对象，实验研究结果如下。

1.资料与方法

1.1 临床资料

选择2016年11月～2017年12月本院收治的90例慢性肝病患者的血清标本作为本次实验的研究对象，患者年龄12～75岁，平均（36.2±2.8）岁，所有血清标本通过酶联免疫吸附测定检测，HBsAg呈阳性，包括弱阳性，及时将血清分离，并放至-20˚C冰箱中储存，标本没有出现黄疸、脂血、溶血的情况，标本也不携带甲肝、丙肝、丁肝、戊肝等病毒。

试剂与仪器：①试剂：酶联免疫吸附试验法的试剂盒是上海科华生物技术有限公司生产，胶体金层析法的试纸条由爱康生物技术有限公司生产，免疫电子发光试验法的定量检测试剂由雅培公司生产，聚合酶链式反应法的试剂盒由凯杰生物工程（深圳）有限公司生产。②仪器：采用变色龙免疫分析仪、美国雅培I-2000全自动免疫发光分析仪。运用美国PE公司AB17500型定量PCR（聚合酶链式反应法）仪判定结果。

1.2 方法

1.2.1 酶联免疫吸附试验法（ELISA）。ELISA酶免疫测定技术是被应用最为广泛的技术，其工作原理是经标记的抗原与限量抗体相互竞争而结合并产生反应，反应达到平衡后添加分离剂，对其中沉淀部分的放射性程度加以测定；把已知抗原或抗体吸附到固相载体表面，即聚苯乙烯微量反应板上，从而在固相表面开展酶标记的抗原抗体反应，通过洗涤以清除液相中的游离成分。常用的酶联免疫吸附试验法包括双抗体夹心法与间接法，双抗体夹心法用来测定大分子抗原，间接法用来检测特异抗体。

1.2.2 胶体金层析法（GICA）。遵循Frens的方法制作准备好胶体金：采用超纯水溶解氯金酸把溶液的最终浓度控制在0.01%，采用l00mL水加热煮沸溶液，然后注入1%柠檬酸三钠溶液，剂量为1.0mL，再行加热15min，最后当溶液的颜色从白色变为蓝色再变为红色，就算胶体金溶液制作成功。搁置胶体金溶液，直到温度降到温冷以备使用。对所用测试条进行测试，如：吸水滤纸、玻璃纤维滤纸，把干燥的金标鼠抗IgM抗体吸附至测试条上；再盖上硝酸纤维素膜、吸水滤纸，然后把此四种测试条依次加以重叠，把它们全部粘贴至白色塑料片上。检测胶体金时，把使用到的测试条的加样端浸润上血清，按照1:10的比例，用生理盐水稀释运用到的血清，血清的深度控制在离吸附了金标抗体的玻璃纤维滤纸下方8～10mm的位置，结果判定需在5～10min内完成，红色“+”代表结果呈阳性，红色“1”代表结果呈阴性，若测试条中无红色线条产生，就说明此次测试条测验无效。

1.2.3 免疫电子发光试验法（MEIA）。采用美国雅培公司的AX-SYM执行测验，测定的试剂与定标液都有雅培公司提供。

1.2.4 聚合酶链式反应法（PCR）。PCR属于分子生物学技术，可以把特定的DNA片段加以放大，被当成生物体外的特殊DNA复制。采用的裂解液提取DNA模版中的总反应体系控制在20ta，所有反应管被放到5700自动荧光检测仪中，分别在 93˚C、55˚C、72˚C 等不同温度下，预变 2min，而 93˚C作为预变性参考标准。

1.3 统计学分析

此次实验所有数据全部由SPSS21.0版统计软件进行处理，计量资料采用±s表示，采用t检验进行组间数据对比；比率（%）表示计数资料，采用χ2检验比较组间资料，以P＜0.05代表差异有统计学意义。

2.结果

对比不同检测方法符合数，见表1。

3.讨论

检测乙型肝炎病毒感染主要检测血清学与病毒学，血清学检测指标包括病毒表达产物以及抗原抗体系统，病毒学检测指标包括血清HBV-DNA[2]。当前慢性乙肝检测的四种方法就是酶联免疫吸附试验法、胶体金层析法、免疫电子发光试验法和聚合酶链式反应法。

在实际检测中，酶联免疫吸附试验法的特点是反应时间短，使用仪器简便，技术级别低，是慢性肝病检测的首选方法[3]。不同形式的抗原体构建了不同的检测抗体，再采用不同的诊断试剂，最终检测结果也就不尽相同。临床一致主张，基因工程表达的抗原特异性与敏感性都强于全病毒抗原包被的试剂，原因在于全病毒的病毒抗原来源于细胞的培养，培养的细胞中可能包含其他类蛋白，给病毒的特异性与敏感性带去影响；但是在保证提取与纯化工艺的前提之下，全病毒抗原特异性与敏感性也有可能比表达抗原要高[4]。免疫电子发光试验法属于快速免疫的分析方法，此方法最开始用来诊断早孕，伴随技术的成熟，此方法被用来检测多种传染病与寄生虫感染，譬如：狂犬病毒、恶性疟原虫[5]。胶体金层析法是将微孔膜当作固相的载体，抗原或者抗体被附载到微孔膜上，再加到待测样本之中，把胶体金标记物的标示结果定为反应结果[6]。聚合酶链式反应法是新型检测技术，其优势是精准、迅速、灵敏度高，同时可以平行开展大量样本的检测，所以此方法可被广泛推广运用[7]。

表1. 对比不同检测方法符合数

本次试验研究结果表明，聚合酶链式反应法检测慢性肝病的总符合率明显高于酶联免疫吸附试验法、胶体金层析法与免疫电子发光试验法，对比后面三种方法的检测总符合率，差异无统计学意义。目前在临床实践中，聚合酶链式反应法尚未成为广泛运用的技术，原因在于此方法实验时间过长，有较高制作成本，制作过程也较为复杂，标准化数据库存的构建难度较大。

综上所述，检测慢性肝病的几种方法当中，不同的检测方法，有着不同的原理、成本与总符合率，在实际运用过程中，应当开展综合性评估，以挑选最佳且普遍的检测方法，目前医学界尚未形成成熟的评定检测方式的方法，所以有待继续探索检测方法。