子午流注针法联合干扰素治疗对宫颈癌合并HPV感染患者T淋巴细胞亚群的影响

翟垚青 闫文静 乔志燕

摘要目的：探討子午流注针法联合干扰素治疗对宫颈癌合并人乳头状瘤病毒（HPV）感染的临床疗效，并观察其对Th17细胞因子表达的影响。方法：选取宫颈癌合并HPV感染患者70例，随机分为对照组和观察组，每组35例。2组患者均接受紫杉醇+卡铂化疗方案以及重组人α2β干扰素均匀涂宫颈表面，观察组在上述治疗方案的基础上加用子午流注针法联合治疗，比较2组治疗临床疗效、KPS评分、外周血Th17细胞百分比的变化，并观察不良反应发生情况。结果：治疗后2组KPS评分均较治疗前提高，其中观察组提高的趋势较对照组明显，差异有统计学意义（P<005）。观察组临床总有效率为7429%，对照组临床总有效率4286%，差异有统计学意义（χ2=329，P<005）。治疗后观察组有26例HPV转阴，转阴率7429%，对照组12例转阴，转阴率3429%，差异有统计学意义（χ2=283，P<005）。治疗后2组外周血Th17百分比均较治疗前下降，观察组较对照组下降更明显，差异有统计学意义（P<005）。结论：子午流注针法可改善宫颈癌合并HPV感染的免疫抑制状态，明显提高患者的生命质量。

关键词宫颈癌；HPV感染；干扰素；子午流注针法；Th17；T淋巴细胞亚群；疗效；免疫抑制

Effect of Acupuncture Based on Midnightnoon Cycle of Qi in Combination with Interferon

on T Lymphocyte Subsets in Patients with Cervical Cancer Coinfection of HPV

Zhai Yaoqing1， Yan Wenjing2， Qiao Zhiyan1

（1 Department of Gynecology， Jiaozuo City Maternal and Child Health Hospital， Jiaozuo 454000， China； 2 Department

of Pathology， Jiaozuo City Maternal and Child Health Hospital Pathology， Jiaozuo 454000， China）

AbstractObjective：To investigate the clinical curative effect of the acupuncture based on midnightnoon cycle of qi in combination with interferon on cervical cancer coinfection of human papilloma virus （HPV）， and to observe the effects on Th17 cytokines. Methods：A total of 70 cases of patients with cervical cancer coinfection of HPV in our hospital included into the study， and were randomly divided into the control group and the observation group， with 35 cases in each group. Two groups of patients accepted chemotherapy regimens of paclitaxel + carboplatin and recombinant human interferon α2βevenly cervical surface， and the observation group combined with acupuncture based on midnightnoon cycle of qi on the basis of the above treatment. The clinical curative effect， Karnofsky Performance Status （KPS）， peripheral blood Th17 cells percentage changes of two groups were compared， and the adverse reactions were observed. Results：1）KPS scores improved in the two groups after treatment， and the increase trend of observation group was more obviously than the control group. The differences were statistically significant （P<005）. 2）The clinical total effective rate of observation group was 7429%， and that was 4286% in the control group. The differences were with statistically significant （χ2=329， P<005）. After treatment， 26 cases of HPV turned to negative in the observation group， and the negative conversion ratio was 7429%，12 cases turned to negative in the control group， and the negative conversion ratio was 3429%. The differences were statistically significant （χ2=283， P<005）. 3）After a stage of treatment， peripheral blood Th17 percentage in the two groups decreased， and the observation group decreased more obvious than the control group. The differences were statistically significant （P<005）. Conclusion：The acupuncture based on midnightnoon cycle of qi can improve the immunosuppression of cervical cancer coinfection of HPV， and can significantly improve the patient′s quality of life.

Key WordsCervical cancer； HPV infection； Interferon； Acupuncture based on midnightnoon cycle of qi； Th17； T lymphocyte subsets； Efficacy； Immunosuppression

中图分类号：R245文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.05.048

宫颈癌是女性恶性肿瘤中发病率仅次于乳腺癌的疾病，发病率呈逐年增加的趋势，目前有文献[13]证实HPV的持续性感染是宫颈癌发生的主要原因，国内外专家虽进行大量研究，但仍无法显著降低HPV的感染率。多数肿瘤合并感染的患者处于免疫抑制状态[4]，且与患者的临床预后相关，因此，我们认为改善宫颈癌合并HPV感染的免疫力将有可能成为治疗的靶方向。

子午流注针法在临床被广泛运用[5]，并不断发展和完善，择时施治可以调整脏腑功效。本研究利用子午流注针法治疗宫颈癌合并HPV感染，并对其部分作用机制进行研究。

1資料与方法

11一般资料选取2014年1月至2015年1月我院合并HPV感染的宫颈癌患者70例，按随机数字表法分为对照组和观察组，每组35例。对照组患者年龄36～70岁，平均年龄（4529±948）岁，病程6个月至3年，平均病程（126±023）年，国际妇产科协会（FIGO）分期为Ⅰ期4例、Ⅱ期13例、Ⅲ期10例、Ⅳ期8例；观察组患者年龄37～71岁，平均年龄（4611±838）岁，病程5个月至25年，平均病程（114±014）年，FIGO分期为Ⅰ期5例、Ⅱ期11例、Ⅲ期9例、Ⅳ期10例。同时取同期健康体检者30名作为健康对照组，年龄34～73岁，平均年龄（4629±1002）岁，2组一般资料比较，差异无统计学意义（P>005），具有可比性。本研究经伦理委员会批准（伦理批件号2014EK021）。

12诊断标准经阴道镜检查及宫颈活检确诊宫颈癌，经快速导流杂交技术检测存在HPV感染[3]。

13纳入标准1）符合12者；2）年龄35～75岁；3）无心、脑、肺、肾等重大脏器并发症者；4）知情同意并签署知情同意书者。

14排除标准1）存在精神疾患或者认知障碍者；2）存在免疫缺陷疾病者；3）对化疗药物过敏者。

15脱落与剔除标准1）在治疗过程中因故中途退出者；2）随访中自然脱落者；3）治疗过程出现明显不良反应者；4）依从性差者。

16治疗方法对照组采用紫杉醇+卡铂联合化疗方案，首先用改良Seldinger穿刺法进行置管，静脉滴注丝裂霉素（上海上药新亚药业有限公司，国药准字号H31020504）+顺铂（德州德药制药有限公司，国药准字号H20023236）+5氟脲嘧啶（上海旭东海普药业有限公司，国药准字H31020593）。观察组在对照组基础上加用子午流注针法，以本地时间为时间依据，依照“阳日阳时开阳经之穴，阴日阴时开阴经之穴”的开穴原则进行开穴，每日按时开穴的时间体见表1。具体操作方法：患者双侧肢体取穴，保持仰卧位，用75%乙醇对穴位局部进行消毒，用华佗牌针具进行针刺，平补平泻手法，每次留针30 min，1次/d，以10次为1个疗程，连续进行3个疗程治疗，每个疗程间隔开3 d。2组均进行为期6个月随访。

17观察指标

171KPS评分KPS评分是对肿瘤患者健康状态进行评估的一种手段，从正常，无症状和体征至死亡分为11个级别，每个级别对应的分值不同，正常，无症状和体征代表10分，能进行正常活动，有轻微症状和体征代表9分，勉强进行正常活动，有一些症状或体征代表8分；生活能自理，但不能维持正常生活和工作代表7分；生活能大部分自理，但偶尔需要别人帮助代表6分；常需要人照料代表5分；生活不能自理，需要特别照顾和帮助代表4分；生活严重不能自理代表3分；病重，需要住院和积极的支持代表2分；病重，需要住院和积极的支持治疗代表1分；死亡代表0分。得分越低，健康状况越差，若低于60分，许多有效的抗肿瘤治疗就无法实施。

172Th17细胞百分比取2组宫颈癌患者治疗前以及随访6个月后和健康组外周血5 mL，用人淋巴细胞分离液将上述血液中的单核细胞分离出并调整密度为1×106/mL，取200 μL置于10%胎牛血清RPMI 1640培养基中进行培养，加入事先混合完成的工作液，工作液内含有刺激剂佛波醇乙酯及离子霉素等，将培养瓶置于37 ℃，5%CO2环境中培养4～6 h，培育结束后用磷酸盐缓冲液冲洗，以5 000 r/min速度下离心，收集细胞后加入5μL异硫氰酸荧表1“子午流注纳甲法”择时按日开穴时间时辰时间日干甲己乙庚丙辛丁壬戊癸辰7～9支沟支沟阳溪商阳昆仑昆仑阳陵泉侠溪后溪后溪巳9～11商丘隐白经渠经渠阴谷然谷太冲太冲大陵大陵午11～13阳溪阳溪委中通谷足临泣足临泣中渚后溪、京骨、阳池阳池、厉兑厉兑未13～15尺泽鱼际太溪太溪劳宫太冲、太溪少冲少冲商丘商丘申15～17委中委中液门足临泣、合谷少泽少泽解溪解溪二间二间酉17～19中冲太溪、太白大敦大敦灵道灵道大都大都尺泽尺泽

光素对CD4（CD4FITC）进行标记，加入5 μL藻红蛋白对IL17（IL17AAPC）细胞进行标记，随后采用流式细胞检测技术进行Th17细胞的检测。

18疗效判定标准采用FIGO评定标准对肿瘤治疗效果进行判定[6]，完全缓解（CR）：肉眼下未见肿瘤组织，且无新病灶出现；部分缓解（PR）：肿瘤组织体积较治疗前缩小50%以上，且无新病灶出现；病情稳定（SD）：肿瘤组织体积较治疗前未达50%，且无新病灶出现；病情进展（PD）：治疗前后肿瘤组织大小无变化或出现新病灶。HPV疗效标准：1）转阴；2）无效。

19统计学方法本课题所得数据均在SPSS 200统计软件进行处理，计量资料以（±s）表示，采用t检验，计数资料以率表示，采用χ2检验，以P<005为差异有统计学意义。

2结果

212组KPS评分比较治疗后2组KPS评分均较治疗前提高，其中观察组提高较对照组明显，差异有统计学意义（P<005）。见表2。

222组临床有效率比较观察组临床有效率为7429%，对照组临床有效率4286%，差异有统计学意义（χ2=329，P<005）。见表3。

232组HPV转阴率比较治疗后观察组有26例HPV转阴，转阴率7429%，对照组12例转阴，转阴率3429%，差异有统计学意义（χ2=283，P<005）。

242组Th17细胞百分率比较2组随访6个月后2组外周血Th17百分率虽仍较健康组高，但均较治疗前明显下降，观察组较对照组下降更明显，差异有统计学意义（P<005）。见图1。

3讨论

宫颈癌的发病率近年来一直居高不下，对女性的生命安全产生严重危害。HPV感染是宫颈癌发生发展的独立危险因子，而持续性的免疫功能下降则是HPV持续性感染的危险因子[78]，Bhavsar等[9]证实免疫能力高低与癌症患者的预后存在正相关。故我们认为调节患者的免疫功能以抵御HPV感染是治疗宫颈癌患者的重要措施。

子午流注理论源自《黄帝内经》，是天人相应观点的充分体现，后世医贤在临床实践中不断将其完善，逐步形成了目前较为完善的理论及实践体系。《黄帝内经》中认为人身之气血周流出入皆有定时，人体气血的虚盛具有周期性变化，此规律与天干、地支、阴阳五行相配合形成择时定期开阖五腧穴的一种方法，此法充分体现了中医针灸学注重时间条件取穴的特色，正如明代医家杨继洲《针灸大成》中曰：“刚柔相配，阴阳结合，气血循环，时穴开阖”。在气血灌注之时对特定的穴位进行刺激，充分调节气血阴阳，疏通经络，促进机体功能恢复。子午流注法被广泛运用于临床治疗各类疾病，疗效好，越来越受到患者的青睐。董淑艳和冯万才[10]利用子午流注法对中风后遗症患者进行治疗，结果显示该疗法可明显提升患者的日常生活能力（ADL）；孙云廷等[11]对慢性乙酸胃溃疡模型大鼠进行子午流注针法干预，结果显示子午流注针法可明显加速大鼠溃疡创面的愈合，与模型组比较，差异有统计学意义（P<005）；有研究發现子午流注纳甲法可明显提高乙肝患者的丙氨酸转氨酶复常率以及HBVDNA阴转率，其疗效明显优于单纯使用拉米夫定的对照组（P<005），这提示子午流注针法对抑制乙型肝炎病毒的复制、提高肝功能有理想效果[1213]。诸如此类的临床报道不胜枚举，诸多医家从临床及动物实验证实了子午流注法的有效性及可行性。本研究利用子午流注针法对宫颈癌合并HPV感染患者进行治疗，结果显示该疗法不但提高了患者的关于肿瘤的临床有效率，提升了KPS评分，且明显增加了HPV的转阴率。

Th17是近年来发现的CD4+淋巴细胞亚群，其结构与作用于Th1及Th2不同，Th17参与了机体自身免疫及炎性反应改变的过程，在部分疾病中Th17还是发病的主要调节者[1417]。宫颈癌合并HPV感染患者大多表现为免疫抑制及炎性反应，幼稚CD4+T细胞在一定条件下分化为Th17细胞，产生了IL17效应因子，而IL17是重要的促炎因子之一，与相应受体结合后发挥促进炎性反应发展、免疫应答等多种功能，因此调控Th17细胞分化有重要的临床价值。在对该疗法作用机制探讨中我们检测了2组宫颈癌患者外周血Th17细胞比例的变化，同时与健康组进行对照比较。本研究结果显示，2组宫颈癌合并HPV感染患者外周血中Th17的表达频率明显高于健康对照组，由此我们推断Thl7、IL17等在宫颈癌合并HPV感染中可能起到作用，随访6个月后2组外周血Th17百分比虽仍较健康组高，但均较治疗前明显下降，观察组较对照组下降更明显，差异有统计学意义（P<005），这进一步提示Th17可能是宫颈癌合并HPV感染一个重要因素，而子午流注针法发挥临床疗效可能与下调Th17的表达有关。因此我们认为纠正Th17的功能失调可能是治疗宫颈癌的一个靶点。

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