气相色谱串联质谱法测定果蔬中赤霉素

□赵海玲 邱宏萌 雷 琼 朱丰秀 江西省赣州市疾病预防控制中心

赤霉素，是一种广谱性的植物生长调节剂，被广泛应用于植物生长和发育的各个阶段。赤霉素虽属于低毒的植物生长调节剂，但大量使用时会产生一定的毒性。美国、欧盟和日本等国家规定水果和蔬菜中赤霉素最高残留限量为0.2mg/kg[1]。

目前，检测赤霉素方法有高效液相色谱法[2-3]、气相色谱法[4]、气相色谱串联质谱法[5]、液相色谱串联质谱法[6]、液相色谱-质谱/质谱法。赤霉素是内源性激素之一，在植物中含量很少。质谱检测灵敏度高，重复性好，尤其适合痕量植物样品的检测。

1 材料与方法

1.1 仪器和试剂

2010SE气相色谱质谱联用仪，日本岛津公司；HC-3018R高速冷冻离心机，安徽中科中佳科学仪器有限公司；PB303-S电子天平，梅特勒-托利多公司；vorter-genie2涡旋混匀器，美国SI公司；匀浆机；超声波清洗器；氮吹仪。

MCS固相萃取柱，500mg/6mL；HLB固相萃取柱，200mg/6mL。

甲酸（分析纯），氯化钠（分析纯），盐酸（优级纯），甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯）。

标准物质：赤霉素购自Dr.EhrenstorferGmbH（Germany）。

1.2 样品处理

1.2.1 提取

称取5.00g试样于50mL离心管中，加入20μL甲酸和20mL乙腈，匀浆1min，10000r/min冷冻离心5min，移取上清液至新的50mL离心管中，加入3g氯化钠（饱和有结晶），涡旋混匀2min，10000r/min冷冻离心2min，吸出5mL乙腈相于15mL离心管中，40℃氮气吹干，加入0.2mL甲醇涡旋溶解，再加入3mL40mmol/L的盐酸溶液混匀，10000r/min冷冻离心5min，上清液待净化。

1.2.2 净化

用5mL甲 醇、5mL水、5mL40mmol/L的盐酸溶液活化MCS柱，将上清液转移至MCS柱内，待样品过柱后，用5mL水淋洗除杂质，真空抽干5min，加入3mL甲醇洗脱收集于15mL离心管中，抽干得洗脱液，40℃氮气吹干，加入1.0mL甲醇超声溶解残留物，待GCMS测定。

1.3 色谱质谱条件

气相色谱质谱仪条件：Rts-5ms毛 细 管 色 谱 柱，30m×0.25mm×0.25μm； 进 样 口 温 度，230℃； 柱温，初温100℃，以15℃/min升至280℃保持2min；载气，氦气，纯度≥99.999%，流速1mL/min；电离模式，电子轰击源（EI），电子能量70eV；离子源温度，200℃；传输线温度，280℃；溶剂延迟，4min；进样方式，不分流进样；进样量，1μL；检测方式，选择离子扫描（SIM）采集，选择离子m/z为 121、136、284、328、346。

2 结果与分析

2.1 提取液的选择

本方法选取了乙腈和80%甲醇-水溶液提取，回收率分别为91.5%和85.2%。考虑到固相萃取柱净化，甲醇提取液容易堵柱，而乙腈干扰物质少，所以选用乙腈作为提取液，提取过程中加入氯化钠进行盐析，有利于分析物提取。

2.2 净化条件的选择

2.2.1 净化方式

本方法选用MCS固相萃取柱和HLB固相萃取柱净化，回收率分别为91.2%和87.5%。两种萃取柱的损失都比较少，基于MCS萃取柱去除杂质的效果更好，所以选用MCS固相萃取柱净化。

2.2.2 洗脱液

分别用3mL100%甲醇、80%甲醇-水溶液、50%甲醇-水溶液洗脱，回收率均能达90%以上，100%甲醇洗脱，氮吹干，效率高，所以选用100%甲醇作为洗脱液。

2.3 方法评价

2.3.1 方法的线性范围和检出限

空白基质样品经1.2样品前处理后，配 制 0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μg/mL赤霉素标准溶液，其相关系数为0.996，线性范围在0.1～10μg/mL，方法检出限为0.1μg/mL（S/N=3）。

2.3.2 方法的回收率和精密度

选取3种果蔬样品黄瓜、苹果、葡萄添加高、中、低3个浓度的赤霉素标准溶液，进行回收率和精密度实验，结果见表1。

2.4 实际样本检测

2016年采集了赣州市市售水果样品75份，检测6种植物生长调节剂残留量（4-氯苯氧乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸、多效唑、赤霉素、噻苯隆、氯吡脲），9份样品检出，其中2份检出4-氯苯氧乙酸，5份检出2,4-二氯苯氧乙酸，3份检出多效唑，5份检出氯吡脲，未检出赤霉素和噻苯隆。检测结果与2015年吉林省市售水果中植物生长调节剂残留量监测结果接近。

表1 3种蔬菜水果中赤霉素回收率和精密度（n=6）

3 结语

本方法研究建立了气相色谱串联质谱测定果蔬中赤霉素残留量的方法。样品前处理采用乙腈提取，提取液经MCS固相萃取柱净化，不仅有效去除干扰物质，而且得到较高的回收率。方法检出限满足国内外限量要求，是一种较好的检测赤霉素残留的方法。