动物源性食品中四环素类检测前处理优化及改进

□ 冉瑞玲 张 钦 重庆市万州食品药品检验所

目前，四环素类国家标准和进出口检验检疫相关标准中，从需要的仪器设备、环境条件条件和检测限及精密度要求的角度，GB/T 21317-2007中的高效液相色谱法可在基层检验部门得到广泛应用。

表1 加标回收率及精密度实验结果

1 样品前处理

称取均质后的样品5.00g，置于50mL聚丙烯离心管中，分别用15mL、15mL、10mL 0.1moL/LEDTA-Mcllvainc缓冲溶液及5mL三氯甲烷冰水裕超声提取三次，涡旋冷冻水平离心，合并上清液，加入三氯乙酸定容至50mL，涡旋冷冻水平离心。吸取10mL提取液以1滴/s的速度过PRIME HLB固相萃取柱，减压抽干，用10mL30%甲醇乙酸乙酯洗脱，将洗脱液旋转蒸发至近干，用30%甲醇三氟乙酸水溶液溶解残渣，过0.45μm滤膜，供液相色谱测定。

2 结果与讨论

2.1 样品液液萃取优化

本方法增加使用了三氯甲烷，使用高速离心机分层。GB/T21317-2007只选用了EDTA-Mcllvainc缓冲溶液，无法除去脂肪。

2.2 浓缩优化

GB/T21317-2007中选用的是氮吹仪浓缩洗脱液，且温度要求低于40℃。众所周知，氮吹时的气流会带走一部分目标物，使得我们平时做检品时容易无意识的放走不合格品。本方法将氮吹方式改为低压浓缩仪进行浓缩样品液，其目的在于减少流失量，提高回收率，尽可能地使样品检出量接近真值。

2.3 上机前去除蛋白质的方法

本方法采用10000rpm/min 5min水平离心机，相对普通离心机而言，更好地使样品分层，分别为最底层的三氯甲烷、中层样品纤维等、上层提取液。加入5%三氯乙酸后离心，使得沉淀的蛋白质平稳地固定在离心管底部，使样品液通过PRIME HLB柱更容易。

3 回收率及精密度试验

取阴性样品，加入水平分别为40、100、200ng/g标样，每组水平 3次平行样，同样品处理，进行加标回收率实验。实验数据如表1所列，金霉素回收率在84%～89%、土霉素回收率在 88%～92%之间、四环素回收率在86%～88%、强力霉素回收率在85%～90%之间，重复性较好，RSD值＜3% ，因此该方法的准确度和精确度均可以满足平时大批量样品的测定要求。

4 结论

本实验在GB/T 21317-2007的基础上进行了改进，提取过程中加入了三氯甲烷及三氯乙酸，有效去除了样品中的脂肪以及蛋白质，达到很好的过柱效果。分离时采用水平离心机，更好地分离提取液及样品。结果表明，GB/T 21317-2007经本文改进后，操作更容易，方便平时大批量样品的处理，回收率及精密度良好，适用于动物源性食品中四环素类残留量的检测。