硫酸庆大霉素C组分HPLC测定方法研究

汪柳芹 昌智华 黄琼姑

（海南亚洲制药股份有限公司 海南 海口 570216）

引言

对于庆大霉素组分的分析检测一直是药品检验人员和科研人员努力想解决的难题之一，主要有以下两点原因：一是庆大霉素是强极性、难挥发性的化合物，在反相色谱中难以保留和分离；二是分子中缺少发色基团或荧光物质，因而难以采用常规的UV检测器来对其进行检测。

本研究采用低温分流法检测硫酸庆大霉素C组分，拟从优化ELSD低温分流法仪器色谱条件，建立一个操作简单、质量可控，重现性好的硫酸庆大霉素C组分测定方法。

1.材料与方法

1.1 仪器

Agilent 1260 Infinity Ⅱ型高效液相色谱仪（包括：泵、自动进样器、柱温箱）；Agilent Openlab CDS 2.2工作站；SEDEX 75型蒸发光散射检测器（迪马公司）；十万分之一电子天平（梅特勒-托利多）；KQ2200型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；微孔滤膜抽滤装置；色谱柱:Ultimate LPC18（4.6×250mm，5µm；月旭科技公司）。

1.2 试剂

甲醇（HPLC级），Thermofisher公司；三氟乙酸（HPLC级），Anaour公司；二次蒸馏水；庆大霉素标准物质（C1a：15.2%；C2：16.9%；C2a：10.3%；C1：15.9%），中国食品药品检定研究院，批号：130326-201716；小诺霉素标准物质（含量：51.8%），中国食品药品检定研究院，批号：130342-201404；西索米星标准物质（含量：56.0%），中国食品药品检定研究院，批号：130635-201301。

表2 硫酸庆大霉素供试品-1和供试品-2测试结果

1.3 色谱条件

流动相：0.2mol/L三氟乙酸水溶液-甲醇（96:4），pH：0.76，单流路；流速：1.2ml/min；色谱柱：Ultimate LPC18，色谱柱规格：4.6×250mm，5µm；检测条件：漂移管温度50℃，载气种类：空气，载气压力：3.5bar；维持电压稳定（ELSD检测器最好连接稳压器）。

1.4 标准溶液的配制

精密庆大霉素标准物质172.52mg置于20ml容量瓶，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为庆大霉素标准溶液（3）；精密量取庆大霉素标准溶液（3）5ml,置10ml容量瓶，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为庆大霉素标准溶液（2）；精密量取庆大霉素标准溶液（3）2ml，置10ml容量瓶，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为庆大霉素标准溶液（1）。庆大霉素标准溶液系列浓度见表1。

表1 庆大霉素标准溶液系列浓度

2.结果

测试硫酸庆大霉素样品溶液，测试结果见表2。

3.结论

本实验通过对药典2015版硫酸庆大霉素C组分测试方法—蒸发光低温分流法实验条件进行摸索，对流路、色谱柱、流速、电压稳定等多种影响因素进行了优化，提高了分析的准确性。