金银忍冬鲜果实提取物的GC-MS分析

高欣妍，王海英*，刘志明

(1.东北林业大学 林学院，黑龙江 哈尔滨150040；2.东北林业大学 材料科学与工程学院，黑龙江 哈尔滨150040)

金银忍冬[Loniceramaackii(Rupr.) Maxim.]，又名金银木，为忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬属落叶灌木；高6 m，叶纸质；花冠先白色，后变黄色；果实为暗红色圆形浆果，越冬不落；花期5—6月，果熟期8—10月[1-2]。忍冬(L.japonicaThunb.)干燥花蕾，药材商品名称金银花[3-5]。金银忍冬与忍冬为同属植物，有关金银忍冬花蕾、果实化学成分研究较多，对其挥发性成分研究较少。金银忍冬果实越冬不落，具有潜在的开发利用价值。苏慧[6]研究结果表明从金银忍冬果实中提取的环烯醚萜类总苷具有良好的保肝、降糖活性。袁升洁[7]研究结果表明金银忍冬果实提取物中含有开环马钱素二甲基乙缩醛(secologanin dimethylacetal)、开环马钱素(secologanin)、7S-O-甲基莫诺苷(7S-O-methylmorroniside)、马钱素(loganin)、开环马钱素酸(secologanin acid)、马钱素酸(loganic acid)、6’-O-β-D-呋喃芹糖基獐牙菜苷(6’-O-β-apiofuranosyl sweroside)。柴多武[8]研究结果表明金银忍冬果实提取物中含有齐墩果酸，具有抗肿瘤活性。王玉莉等[9]将金银忍冬果实提取物经柱层析、重结晶等，鉴定了多种皂苷类化合物，分别为乌苏醇、熊果酸乙酯、异常春藤皂苷元、常春藤皂苷元等。王广树等[10]进行了金银忍冬果实中化学成分的研究。青梅等[11]采用超声技术提取金银忍冬果实中的绿原酸。绿原酸具有较强的抗菌、抗病毒作用，是被学者们广泛关注的药理成分。姬晓灵等[12]研究了宁夏生长的金银忍冬果实中挥发性成分。李金英等[13]研究了2种忍冬果实挥发物质组成。金银忍冬果实具有药理活性的化合物主要有黄酮类化合物、有机酸类化合物、三萜皂苷类化合物、环烯醚萜类化合物以及挥发油等。本实验采用索氏提取法，正己烷为提取溶剂，结合气相色谱-质谱(GC-MS)技术进行金银忍冬鲜果实提取物的成分分析，为金银忍冬鲜果实提取物在药用、与木醋液调配抑菌制剂的开发利用提供基础数据。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂和仪器

采集植物经鉴定为忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬属金银忍冬[Loniceramaackii(Rupr.) Maxim.]。金银忍冬果实于2015年10月采自东北林业大学校园。

提取溶剂选择提取植物天然产物常用溶剂正己烷，来源于天津市东丽区天大化学试剂厂，为二级品分析纯(AR)。色谱分析试剂为常用试剂甲醇，天津市科密欧化学试剂有限公司生产，色谱纯。

索氏提取装置，定制；旋转蒸发仪(RE-2000A型)，巩义市予华仪器有限责任公司。气相色谱-质谱联用仪(7890A-7000B型)，美国Agilent公司。

1.2 金银忍冬鲜果实提取物的制备

采用索氏提取装置提取金银忍冬鲜果实，溶剂为正己烷。称取金银忍冬鲜果实样品30 g，用滤纸小心包好碾碎的金银忍冬鲜果实，并用细线扎紧后放入滤筒内，向滤筒内加入100 mL正己烷溶剂，使样品完全浸没在正己烷中。放入水浴锅内，连接好索氏提取装置的各部分，接通冷凝水，( 83±2)℃水浴加热，索氏提取4 h。采用旋转薄膜蒸发法除去正己烷，得到金银忍冬鲜果实提取物。称量所得提取物质量，计算得率。

1.3 金银忍冬鲜果实提取物的GC-MS分析

用甲醇将金银忍冬鲜果实提取物配制成10 mg/L的甲醇溶液，利用气相色谱-质谱(GC-MS)联用仪对试样进行分析。色谱分析条件：HP-5MS毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；FID检测器；初始温度40 ℃(保持2 min)，以10 ℃/min的升温速率升到280 ℃(保持2 min)；进样口温度250 ℃；进样量1.0 μL；不分流，氦气载气，流速1 mL/min。质谱分析条件：EI电离源，接口温度280 ℃，离子源温度230 ℃，电子能量70 eV，扫描范围为30～500 u。

2 结果与分析

2.1 金银忍冬鲜果实提取物的GC-MS分析

采用索氏提取法以正己烷为溶剂提取得到的金银忍冬鲜果实提取物为淡黄色透明油状液体，得率为0.77%。金银忍冬鲜果实提取物样品的总离子流色谱图如图1所示。通过面积归一化法计算出各组分的GC含量，总GC含量76.47%的化合物被鉴定，共鉴定出13种化合物，分析结果如表1所示。

图1 金银忍冬鲜果实提取物的总离子流色谱图

表1 金银忍冬鲜果实提取物的GC-MS分析

从表1可知，金银忍冬鲜果实提取物主要由烷烃类(35.75%)、酯类(27.34%)、酮类(10.89%)、酚类(1.76%)、醇类(0.73%)等化合物组成。GC含量最高的化合物是二十四烷(21.74%)，其次为苯甲酸-2,6-双[(三甲基甲硅烷)氧基]-三甲基甲硅烷酯(13.06%)，也称为三甲基甲硅烷醇三硅甲烷氧基水杨酯。2,4-双(1,1-二甲基乙基)-苯酚(1.76%)，也称为2,4-二叔丁基苯酚，为抗氧化剂的重要中间体。周宝利等[14]研究结果表明2,4-二叔丁基苯酚对番茄植株及叶霉病具有调控作用，0.1 mmol/L为田间施加最适浓度。王再强等[15]研究结果表明2,4-二叔丁基苯酚对秀丽隐杆线虫有较好毒杀作用。张玉[16]研究结果表明叔丁基对苯二酚(TBHQ)、茶多酚(TP)、维生素E(VE)、吡咯喹啉醌(PQQ)、葡萄原花青素(GPC)5种抗氧化剂，总抗氧化能力和清除DPPH自由基能力均表现为TP>GPC>TBHQ>VE。范琛[17]研究结果表明维生素C抗氧化活性高于维生素E。金银忍冬鲜果实提取物以及与木醋液的抗氧化活性、抑菌活性、杀虫活性等生物活性比较，有待进一步研究。

2.2 金银忍冬果实提取物的挥发性成分及应用

姬晓灵等[12]研究了宁夏生长的金银忍冬干果实中挥发性成分。乙醚为提取溶剂,气相色谱-质谱(GC-MS)分析金银忍冬干果实乙醚索氏提取物挥发性成分。色谱峰面积归一化法计算了各成分的GC含量。共鉴定出32种化合物，主要由烷烃类、酯类、酮类、醇类、有机酸类、皂苷类、醚类、酚类、烯烃类等化合物组成，其中GC含量最高的化合物是甲基己基过氧化氢(1.31%)。李金英等[13]研究了2种忍冬果实挥发物质组成。顶空固相微萃取 HS-SPME 装置采集金银忍冬鲜果实的挥发性成分，气相色谱-质谱(GC-MS)分析结果表明金银忍冬鲜果实的挥发性成分主要由醛类、醇类、酮类、酯类、萜烯类、烷烃类等化合物组成，共鉴定出16种化合物，其中GC含量最高的化合物是2-己烯醛(50.74%)。金银忍冬果实提取物因产地、提取方法等挥发性成分各异。新鲜样品、风干样品对挥发性成分种类均有影响。金银忍冬果实提取物挥发性化合物种类，如烷烃类、酯类、酮类、醇类等为共有化合物种类。金银忍冬果实提取物挥发性成分的提取工艺优化，有待进一步研究。

3 结 论

以正己烷为溶剂，采用索氏提取法提取金银忍冬鲜果实中活性组分，通过气相色谱-质谱(GC-MS)分析其挥发性成分。GC-MS分析结果表明金银忍冬鲜果实提取物主要由烷烃类(35.75%)、酯类(27.34%)、酮类(10.89%)、酚类(1.76%)、醇类(0.73%)等化合物组成。GC含量最高的化合物是二十四烷(21.74%)，其次为苯甲酸-2,6-双[(三甲基甲硅烷)氧基]-三甲基甲硅烷酯(13.06%)，也称为三甲基甲硅烷醇三硅甲烷氧基水杨酯。2,4-双(1,1-二甲基乙基)-苯酚(1.76%)，也称为2,4-二叔丁基苯酚，为抗氧化剂的重要中间体，具有抑菌、杀虫等生物活性。