肉兔人工授精技术操作规程

张建忠

一、配套仪器设备

1.采精设备。塑料杯、集精杯、兔用胶皮假阴道、凡士林。

2.镜检设备。显微镜、载玻片、盖玻片、擦镜纸。

3.保温设备。恒温水浴锅（35～38℃，用于保证取出精液的温度）、恒温烘箱、双制冷电子冰箱（可根据需要调温、用于精液保温和运输）。

4.稀释液。精液稀释液粉剂，用双蒸水稀释。

5.输精设备。兔用输精枪、输精枪套管。

6.其他。蒸馏器、酒精棉、温度计等设备。

二、种兔前期准备

1.种母兔准备。种母兔配种前要进行催情处理。其催情方法一是调控兔舍光照，光照强度控制在开灯后把手放入兔笼内能看清掌纹为宜，光照时间为每天在18小时以上；二是用药物催情（催情散或孕马血清）。初产种母兔：配种前用催情散拌料饲喂（1包催情散拌20公斤饲料），连续补充光照3～5天，当母兔外阴大红时进行配种。经产种母兔：从母兔产仔后23天开始，连续补充光照5天至仔兔断奶。仔兔断奶当天给母兔注射孕马血清促性腺激素，按0.3毫升/只的剂量注射，注射后2天内观察母兔外阴，当外阴大红时进行配种。

2.采精器准备。采精器包括塑料杯外壳、兔用胶皮假阴道内胎和集精杯三部分。将集精杯放入内胎的孔中，再将内胎塞入外壳中，集精杯露出外壳，另一端的集精杯开口处向外翻转套在外壳上，扎紧，使其不漏水、不透气，并经消毒处理。然后从外壳后部缓慢注入50℃的温水。采精器准备好后，放入 54℃的双制冷电子冰箱内，然后带入种兔舍准备采精。

三、精液采集

1.抓种兔。先挑选体质健壮、性欲旺盛的公兔；然后左手抓诱导母兔耳朵及颈皮，右手拿假阴道及套在假阴道上的集精杯，伸到母兔腹下。

2.采精。公兔阴茎进入假阴道后，抽动数秒后向前一挺，后躯蜷缩向一侧倒去，表示其射精完成。采精者应立即将假阴道口端抬高，使精液流入集精杯，然后迅速把采精器从母兔腹下取出，竖直采精器，取下集精杯，放入36℃双制冷电子冰箱内。

四、精液检测

1.送检。采精结束后，立即把双制冷电子冰箱送回化验室，把集精杯连同试管架放入36℃的恒温水浴锅中。取干燥清洁载玻片，用胶头滴管吸取1滴精液涂于载玻片上，放在160倍显微镜下进行镜检。

2.品质检测。（1）外观观察：肉眼观察精液颜色（正常为灰白色或乳白色）、精液混浊度（似云雾滚动表示活力大、密度大），闻气味（正常为无臭味）。（2）镜检观察：观察精子活力。活力检查时，精液不能太少，过少容易风干。可加1～2滴精液于载玻片上，再加数滴稀释液，观察精子运动。精液中有3/5以上的精子呈前进式运动，才能用于精液稀释和输精。

五、精液稀释

1.稀释倍数。按检测的精子活力分值来选择合适的稀释倍数。一般分值为5的稀释5～10倍，分值为4的稀释5倍，分值为3的稀释2倍。

2.精液稀释剂的配制。取一包精液稀释剂粉，使其完全溶解在100毫升双蒸水中。双蒸水温度控制在36℃，盛放稀释剂的器皿用双蒸水冲洗干燥后，可以使用双蒸水润洗1遍（双蒸水放置时间很长的话，必须煮沸，以排除水中二氧化碳，保证水的pH值）。

3.稀释。用玻璃棒引流，缓慢将配制好的精液稀释液沿集精杯壁流入精液中，然后轻轻摇匀。

4.保存。必须现配现用，同时要缩短从采精到输精的时间，以有效提高受孕概率。

六、输精

1.抓种母兔。可两人协同操作，助手一只手抓母兔耳朵及颈皮，把母兔放到输精车上，另一只手按住母兔背腰。输精者左手拇指与其余四指抓住母兔尾根向上提并外翻，使母兔后躯悬空、外阴充分暴露。

2.输精手法。输精者右手持枪，用枪头拨开母兔外阴，沿阴道背部向下进枪，遇到阻力时，输精枪后退再试探性向前进，调整枪头角度，经产母兔枪头向下，初配母兔枪头向上，一般稍用力可过关。插入适宜深度为12～14厘米。兔为双子宫动物，太深易单侧子宫受孕，过浅精子不能到达受精部位。

3.输精完成。输完精后，缓慢拔出输精枪，在母兔后躯轻拍一下，再注射经生理盐水稀释的促排3号0.5微克，刺激母兔排卵。

4.注意事项。（1）避免强制输精：当母兔挣扎，背腰拱起，后肢触及物体、努责时不可强制输精，以免给母兔造成损伤。（2）严格消毒：输精枪在吸取精液前，用精液稀释液清洗两遍，甩净精液稀释液后再倒入精液，1次只倒20毫升，减少在输精过程中紫外线、震荡等对精液的损伤。输精前排尽枪内空气，1支输精管只用于1只母兔。（3）减少精液震荡：在输精过程中，减少对精液的震荡。因为在震荡时，精液中的二氧化碳会溢出、氧气溶入，使精子活动量增加，消耗精子能量，会加快精子衰竭死亡。（4）在操作室进行精液稀释时，工作人员严禁吸烟，因为烟气对精子具有很大的杀伤力。

七、输精后管理

1.保持兔舍安静。输完精后，为了更好地让母兔受孕，所有人员必须撤出兔舍，给母兔营造一个安静舒适的环境。在输精前加料以及采精前加料，保证水、料充足。

2.母兔摸胎。输精以后，仍要保持每天18小时的光照，直至母兔摸胎。母兔在配种后12～15天进行摸胎，以确认母兔是否受孕。

（重慶市忠县畜牧兽医服务中心 邮编：404300）