鸡同时接种重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗和鸡新城疫活疫苗后30 d内抗体动态研究

杨登林，杨颖，黄丽

（1.四川省绵阳市梓潼县玛瑙镇畜牧兽医站，绵阳 622157；2.四川省绵阳市梓潼县大新乡畜牧兽医站，绵阳622159；3.四川省绵阳市梓潼县动物疫病预防控制中心，绵阳 622150）

0 引言

为探究新城疫和重组禽流（H5+H7）二价苗同时注射接种，能否达到对鸡新城疫和重组禽流感（H5+H7）的免疫保护效果，进行以下试验研究。

1 试验用疫苗与器材

1.1 鸡新城疫活疫苗

含鸡新城疫病毒低毒力弱毒LaSota株（CVCCAV1615），每羽份疫苗含有的新城疫弱毒病毒≥106.0TCID50，性状为淡黄色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱落，加稀释液后迅速溶解，山东华宏生物工程有限公司生产，批号为201701001。

1.2 重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫（H5N1Re-8+H7N9H7-Re1株）

灭活前Re-8株鸡胚液HA效价不低于1∶512、H7-Re1鸡胚液HA效价不低于1∶256。性状乳白色均匀乳剂，广东永顺生物制药股份有限公司生产，批号为2017018。

1.3 试验用器材

96孔微量反应板、加样槽、吸管、烧杯、移液器、TDL80-2B离心机、离心管、UPC-Ⅲ-10T自动纯水仪、SKP-电热恒温培养箱、微量震荡器、托盘天平等。

2 试验用抗体检测试剂

鸡新城疫血凝抑制试验抗原（Blood coagulation inhibition test antigen in chicken new city）、鸡新城疫抗体检测试剂盒，货号：EPPPR-1002，哈尔滨维科生物科技股份有限公司生产。

禽流感病毒H7亚型血凝抑制试验抗原，批号20170803；禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验抗原，批号20170428，均由哈尔滨维科生物技术开发公司生产。

3 试验鸡分组与检测方法

3.1 试验鸡选择

在某养鸡户随机选择60日龄且未经过任何疫苗接种的鸡40只，由专人饲养管理，饲喂相同的饲料，自由饮水。试验前对所选中的鸡进行全面健康检查：体重在0.6 kg/只左右，呼吸为22～25次/min，心跳为150～200次/min，体温在40.5～42 ℃，食欲正常，精神状态良好；经翅静脉采血检测，鸡新城疫、禽流感病毒H7亚型和禽流感病毒H5亚型抗体均呈阴性。

3.2 动物分组

将这40只鸡随机分成4组：第1组（简称A组）10只鸡，在每只鸡胸部肌肉注射2羽份鸡新城疫活苗；第2组（简称B组）10只鸡，在每只鸡胸部肌注2 mL重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫；第3组（简称C组）10只鸡，在每只鸡左侧胸部部肌肉注射2羽份新城疫活苗，同时在其右侧胸部部肌注射2 mL重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫；对照组10只，在每只鸡左侧胸部肌肉注射生理盐水2 mL，在其右侧胸部肌注生理盐水2 mL。

3.3 方法

在接种后7 d、14 d、21 d、28 d时采集每只鸡翅静脉血5.0 mL，用血凝抑制试验测定鸡新城疫、禽流感病毒H7亚型和禽流感病毒H5亚型抗体。

4 数据统计与分析

新城疫抗体检测方法按照国家标准《GB/T166550-2008新城疫诊断技术》进行，禽流感检测方法按照国家标准《GB/T18936-2003高致病性禽流感诊断技术》进行。观察各组鸡接种新城疫疫苗和重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗后抗体的动态变化，将所得样品Log2值数据，用SPSS10.0软件的One-Way ANVOA方法进行统计学分析。

5 试验结果

5.1 临床接种副反应

各试验组的鸡在接种疫苗后72 h内，没有出现临床不良反应，其体温、呼吸、脉搏、饮食情况均在正常范围内。

5.2 A组、C组、对照组鸡血清新城疫抗体动态

据鸡新城疫抗体检测试剂盒说明书提供的方法进行检测，结果显示A组10份样品7 d时HI疫苗的平均抗体滴度高于6.8（log2），在14～28 d时抗体阳性均高于80%，C组鸡群10份样品7 d时HI疫苗的平均抗体滴度高于6.7（log2），在14～28 d时抗体阳性率均高于80%，试验对照组HI抗体均值为0，数据见表1。

表1 鸡血清新城疫抗体血凝抑制试验（HI）抗体水平均值（log2）

5.3 B组、C价组、对照组鸡血清禽流感病毒（H7+H5）亚型抗体动态

据禽流感病毒H7亚型和禽流感病毒H5亚型抗体检测试剂盒说明书提供的判定标准，结果显示B组10份样品7 d时HI抗体均值为6.4（log2），在14～28 d时抗体阳性率达80%以上，C组鸡群、10份样品7 d时HI抗体均值为6.6（log2）在14～28 d时抗体阳性率达80%以上，试验对照组HI抗体均值为0。数据见表2。

表2 鸡血清亚型抗体血凝抑制试验检测样品抗体HI均值（Log2）

5.4 B组、C组、对照组鸡血清抑制试验抗体动态

据鸡血清抑制试验抗体检测试剂盒说明书提供的方法检测，结果显示B组10份样品7 d时HI抗体均值为6.6（log2），在14～28 d时抗体阳性率达80%以上，C组鸡群10份样品7 d时HI抗体均值为6.8（log2），在14-28d时抗体阳性率达80%以上，试验对照组HI抗体均值为0。见表3。

表3 各试验组鸡血清亚型抗体检测样品抗体HI均值（log2）

5.5 HI抗体平均值

A组和C价组在接种后7 d、14 d、21 d、28 d，7 d时HI抗体平均值为6.5 （log2）以上，14 d、21 d、28 d时HI抗体平均值8.3（log2）以上。

B价组和C价组在接种后7 d、14 d、21 d、28 d，禽流感病毒H7亚型和禽流感病毒H5亚型抗体7 d时HI抗体平均值为6.6（log2）以上，14 d、21 d、28 d时HI抗体平均值8.3（log2）以上。

B价组在接种后7 d、14 d、21 d、28 d时，禽流感病毒H7亚型和禽流感病毒H5亚洲型抗体7d时HI抗体平均值为6.4（log2）以上，14d、21d、28d时HI抗体平均值8.5（log2）以上。

C价组在接种后7d、14 d、21 d、28 d时，禽流感病毒H7亚型和禽流感病毒H5亚型抗体7d时HI抗体平均值为6.6（log2）以上，14 d、21 d、28 d时HI抗体平均值8.3（log2）以上。

6 分析与结论

从表1、表2、表3可以看出，在接种后的整个控制试验期间，试验开始前所有被选择实验用鸡和试验开始后对照组鸡血清中均未检出新城疫、禽流感病毒H7亚型和禽流感病毒H5亚型抗体，说明整个试验期间，A组、B组、C价组鸡所产生的抗体均源自接种鸡新城疫、重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗后而产生，鸡均不存在自然感染新城疫、禽流感病毒H7亚型和禽流感病毒H5亚型病毒后而产生相应抗体的可能性[1]。

从得出的A组抗体阳性率变化分析，鸡新城疫、重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗在分别或同时接种后对A组抗体的阳性率没有任何影响；从表1的A组抗体Log2均值还可以看出，在7～28 d期间，两试验组之间A组抗体HI值，Log2均值比较差异不显著（P＞0.5），两试验组分别与对照组之间Log2均值比较差异显著，说明A组和重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗分别或同时接种鸡对其A组抗体的产生没有任何负面影响[2]。

从得出的禽流感病毒H7亚型和禽流感病毒H5亚型型抗体阳性率变化分析，无论重组禽流感病毒（H5+H7）二价苗单独还是和A组疫苗同时接种，在接种后7 d亚型抗体阳性率均能达到60%，在接种后14～28 d，亚型抗体阳性率均能达到100%，且从表2的抗体 Log2均值还可以看出，在7～28 d期间，两试验组之间抗体均值比较差异不显著（P＜0.5），两试验组分别与对照组之间Log2均值比较差异显著，说明A组疫苗和重组禽流感（H5+H7）二价苗单独或同时接种鸡，在接种后7～28 d内对禽流感病毒H7亚型和禽流感病毒H5亚型抗体的产生没有任何负面影响。

从得出的禽流感病毒H7亚型和禽流感病毒H5亚型抗体阳性率变化分析，重组禽流感（H5+H7）二价价苗和A组疫苗同时接种鸡，从抗体阳性率分析可看出A组疫苗对重组禽流感（H5+H7）二价苗中亚型抗体的产生有轻微的促进作用，但从表3还可以看出，重组禽流感（H5+H7）二价苗单独还是和A组疫苗同时接种鸡，两试验组之间亚型抗体 Log2均值比较差异不显著，而两试验组分别与对照组之间亚型抗体Log2均值比较，差异显著，说明两试验组之间亚抗体阳性率的差异可能是个别鸡个体差异所致；至少在接种21 d后都具有国家规定的70%以上的抗体阳性率[3]。

7 结束语

随着农村畜牧业的日益发展，畜禽饲养量迅速增加，通过试验结果支持新城疫和重组禽流（H5+H7）二价苗同时注射接种，既能达到减轻防疫员的工作强度和工作时间，又能达到对鸡新城疫和重组禽流感（H5+H7）的免疫保护效果。