张掖市重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活苗免疫效果监测

何彦春，李旭蓉，李 珊，韩庆彦，郭慧琳，滚双宝

（1.张掖市动物疫病预防控制中心，甘肃 张掖 734000；2.甘肃省动物疫病预防控制中心，甘肃兰州730046；3.甘肃农业大学，甘肃兰州730000）

禽流感是由A 型流感病毒引起的禽类传染病。H5、H7 亚型高致病性流感感染家禽后除引起家禽的高致病性和高死亡率外，还会感染人类，对公共卫生安全构成严重威胁。根据H7 流感在我国家禽中的流行态势，为进一步做好高致病性禽流感防控工作，保障养殖业生产安全和公共卫生安全，农业部适时调整高致病性禽流感免疫方案，下发了《农业部关于切实做好全国高致病性禽流感秋季免疫工作的通知》（农医发〔2017〕24号）[1]，要求在2017年秋季统一用重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗（H5N1 Re-8 株+H7N9 H7-Re1 株）替代重组禽流感病毒H5 二价或三价灭活疫苗，对家禽实施免疫。为了切实掌握禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗的免疫效果，张掖市动物疫病预防控制中心开展了小群免疫试验和2017年秋季、2018年春、秋季强制免疫后的抗体抽样监测，为高致病性禽流感预防工作提供了理论依据。

1 材料与方法

1.1 小群试验

1.1.1 试验鸡选择

选择30日龄京红1 号蛋雏鸡50 只。

1.1.2 所用疫苗

重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活苗（H5N1 Re-8 株+H7N9 H7-Re1 株），由乾元浩生物股份有限公司郑州生物药厂生产，批号：2017020。

1.1.3 免疫方法和和血样采集

首次免疫前逐只翅静脉采血，采用颈部皮下注射方法免疫，每只0.3 mL。免疫后21 d，逐只翅静脉采血，并进行第二次免疫。第二次免疫采用胸部肌内注射，每只0.5 mL。第二次免疫后21 d，再次逐只翅静脉采血。采集的血样常规分离血清被检。

1.1.4 试验试剂

禽流感病毒H7 亚型血凝抑制试验抗原（H7N9 株）、禽流感病毒H5 亚型血凝抑制试验抗原（Re-8 株）：均由哈尔滨维科生物技术开发有限公司生产，批号分别为：2017007、2017005，有效期均为2年。

1.1.5 抗体水平检测方法

按照 《 高致病性禽流感诊断技术》（GB/T18936—2003）规定的血凝和血凝抑制试验进行抗体检测。当被检血清抗体滴度≥4 log2，判为免疫合格。

1.1.6 免疫后不良反应的观察

免疫后定时观察试验鸡精神状态和采食饮水等表现，观察有无副反应发生。

1.2 全市所有鸡群强制免疫后的抗体抽样监测

1.2.1 强制免疫所用疫苗

由省兽医局集中招标采购的重组禽流感病毒（H5+H7）二 价 灭 活 苗（H5N1 Re-8 株+H7N9 H7-Re1 株），2017年秋季来自乾元浩生物股份有限公司郑州生物药厂，批号：2017020；2018年春季和秋季均来自广东永顺生物制药股份有限公司，批号分别为2018005、2018060。

1.2.2 免疫方法

按照《农业部关于切实做好全国高致病性禽流感秋季免疫工作的通知》（农医发〔2017〕24 号）附件《全国高致病性禽流感免疫方案》[1]执行，颈部皮下或胸部肌注。14～35日龄鸡，每只0.3 mL；35日龄以上鸡，每只0.5mL，两次免疫间隔3～4 周。

1.2.3 抽样时间及数量

2017年秋季、2018年春季、2018年秋季集中免疫完成后，在甘州区、临泽县、高台县、山丹县和民乐县5 个县（区）的规模养殖场（户）中抽样采集免疫血清，2017 秋季采集480 份，2018年春季采集765 份，2018年秋季采集775 份。

1.2.4 检测试剂和检测方法

同1.1.3 和1.1.5。

2 结果

2.1 小群试验结果

2.1.1 免疫后不良反应

经持续观察，除免疫后当天采食量稍有减少外，试验鸡再未见免疫后不良反应发生。

2.1.2 免疫前H5、H7 亚型禽流感抗体检测结果

50 只试验鸡免疫前H5、H7 亚型禽流感抗体检测结果均＜1 log2

2.1.3 H5 亚型禽流感免疫抗体检测结果

50份被检血清中，首免疫21 d 后合格37份，合格率为74.00%；二免21 d 后合格50 份，合格率为100.00%。

2.1.4 H7 亚型禽流感免疫抗体检测结果

50份被检血清中，首免21 d 后合格38 份，合格率为78.00%；二免21 d 后合格50 份，合格率为100.00%。

2.2 强制免疫后的群体抗体抽样监测结果

2.2.1 H5 亚型禽流感免疫抗体监测结果

2017年秋防、2018年春防、2018年秋防后各全市5 县 （区）共采集规模场鸡血清各480 份、765 份、775 份，抗体合格各420 份、706 份、725份。合格率分别为87.50%（420/480）、92.29%（706/765）、93.55%（725/775）。

2.2.2 H7 亚型禽流感免疫抗体监测结果

2017年秋防、2018年春防、2018年秋防后全市5 县（区）共采集规模场鸡血清各480 份、765份、775 份，抗体合格各416 份、697 份、702 份。合格率分别为86.67%（416/480）、91.11%（697/765）、90.58%（702/775）。

3 结论

3.1 小群试验监测结果表明：禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗 （H5N1 Re-8 株+H7N9 H7-Re1 株）免疫后H5、H7 亚型禽流感免疫抗体合格率均在70%以上，达到了农业部规定标准。首次免疫后21 d ，H5 亚型禽流感抗体合格率为74.00%，H7 亚型禽流感抗体合格率为78.00%；二次免疫后21 d，H5 和H7 亚型禽流感抗体合格率均达到100.00%。

3.2 张掖市2017年秋防结束后H5、H7 免疫抗体合格率分别达到了87.50%和86.67%；2018年春防结束后H5 和H7 亚型禽流感抗体合格率分别达到了92.29%和91.11%；2018年秋防结束后H5和H7 亚型禽流感抗体合格率均分别达到了93.55%和90.58%。总体监测结果与杨泽林等[2]报道的结果相近。从一年半的集中免疫抗体监测结果来看，使用“H5+H7”二价灭活疫苗免疫效果确实，但还存在个别养殖场户免疫抗体不达标的问题。针对部分县区的个别养殖场仍存在免疫抗体水平不达标的情况，应及时查找原因，采取及时补免、加强监测等措施，确保免疫合格率保持较高水平。

3.3 2017年4月，张掖市卫生部门在全市不同家禽交易市场中应用PCR 方法对外环境样品 （粪便、饮水、烫鸡水、鸡笼擦拭物等）开展抽样监测，检出阳性样品若干份。随后有个别密切接触人员发生H7N9 流感感染。接到卫生部门通报后，全市动物疫控部门立即在全市规模养禽场、屠宰交易户、散养户开展了H7N9 流感抗体检测。在113 个规模养禽场的4639 份血样中检出血清学阳性样品25 份；87 个屠宰交易户1108 份鸡血样检出血清学阳性样品34 份；187 个散养户的3402 份鸡血样未检出血清学阳性样品。对检出血清学阳性样品的鸡群及时进行了扑杀消毒等综合性防控措施。2017年秋季全市用重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活苗免疫以来，全市在家禽交易市场和养禽场中再未检出H7N9 流感病原学阳性样品，再未发生人员感染情况。这充分说明，重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活苗的应用有效阻断了该流感病毒在家禽中的传播，并成功阻断了病毒由禽向人的传播。