石草鞋化学成分的研究（Ⅱ）

王治阳，叶同生，唐素勤

（河南省中医药研究院附属医院，河南 郑州450003）

石草鞋Hoya lyiLevl.为萝藦科植物球兰属香花球兰Hoya lyiLevl.［H.yuen-nanensisHand.-Mazz］的全草［1］，广泛分布于河南、云南、四川、青海等地。其主要含有黄酮类、蒽醌、香豆素和有机酸类。具有祛风散寒、化瘀通络、活血止痛的功效，用于风寒痹症、跌打损伤、胸前饱胀等。《四川常用中草药》：“辛微酸，温。除风湿，消食积，散瘀血。治脚强痛，胸前饱胀，跌打损伤。”现代药理作用表明其具有显著地抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、降低血管通透性、抗衰老等作用［2-3］。

课题组曾对石草鞋全草进行分离鉴定出27个单体化合物［4-5］。为了进一步阐明其有效成分，促进其资源的开发，本研究对其进一步分离、纯化、鉴定出12个化合物，所有化合物均为首次从该植物中分离得到，其中化合物1、7～8、12为首次从该属植物中分离得到。

1 材料

5973N 型质谱仪（高真空，美国Agilent 公司）；Bruker AC-300P 型超导核磁共振谱（TMS 内标，瑞士Bruker 公司）；ZND83-1型显微熔点测定仪（未校正，上海亚荣仪器厂）；柱色谱、薄层色谱硅胶（100～200，300～400目，青岛海洋化工厂）；SephadeX LH-20（瑞典Pharmacia 公司）；ZF-20D 型暗箱式紫外分析仪（巩义予华仪器有限责任公司）所用试剂均为分析纯。

石草鞋采自河南省郑州市，经河南中医药大学王民集教授鉴定为石草鞋Hoya lyiLevl.的全草。

2 提取与分离

称取石草鞋全草32.6 kg，用95%乙醇加热回流提取3次，提取时间分别为2、1、1 h。经过低压浓缩处理后，得石草鞋提取物浸膏4.3 kg。上述浸膏在超声下溶解于水中，依次采用石油醚、二氯甲烷、丙酮和正丁醇萃取，低压浓缩处理后分别得石油醚、二氯甲烷、丙酮、正丁醇萃取物306.5、283.6 g、203.8、236.5 g。将所得二氯甲烷部分过硅胶色谱柱，以石油醚-丙酮（100 ∶0～80 ∶20～50 ∶50～20 ∶80～0 ∶100）梯度洗脱，经硅胶、Sephadex LH-20等反复分离、纯化得化合物1（16 mg）、3（21 mg）、4（27 mg）、5（16 mg）、11（19 mg）、12（23 mg）。将丙酮萃取物二氯甲烷-甲醇（100 ∶0～80 ∶20～50 ∶50～20 ∶80～0 ∶100）梯度洗脱，过硅胶、Sephadex LH-20等反复分离、纯化、结晶得化合物2（18 mg）、6（24 mg）、7（23 mg）、8（16 mg）、9（47 mg）、10（21 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：白色针晶（丙酮），mp 149～150 ℃，ESI-MSm／z：153.4 ［M＋H］＋1，分子式C8H8O3。1HNMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：6.97（2H，d，J=7.8 Hz，H-2，6），6.59（2H，d，J=7.8 Hz，H-3，5），3.61（2H，s，H-7）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：119.7（C-1），134.5（C-2，6），108.5（C-3，5），148.7（C-4），40.2（C-7），174.2（-COOH）。以上数据与文献［6］基本一致，故鉴定为对羟基苯乙酸。

化合物2：白色无定形粉末（丙酮），mp 198～201 ℃，ESI-MSm／z：168.7 ［M ＋H］＋，分 子式C8H8O4。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.53（1H，d，J=7.8 Hz，H-5），7.39（1H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-6），7.03（1H，d，J=1.8 Hz，H-2），4.01（3H，s，-OCH3）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：119.4（C-1），106（C-2），149.3（C-3），143.7（C-4），121.8（C-5），108.5（C-6），171.5（C-7），50.8（-OCH3）。以上数据与文献［7］基本一致，故鉴定为3，4-二羟基苯甲酸甲酯。

化合物3：白色针晶（丙酮），mp 225～228 ℃，ESI-MSm／z：163.1 ［M ＋ H］＋，分子式C9H6O3。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.91（1H，d，J=7.8 Hz，H-4），7.35（1H，d，J=7.8 Hz，H-5），7.03（1H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-6），6.51（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），5.91（1H，d，J=7.8 Hz，H-3）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：165.8（C-2），109.2（C-3），141.7（C-4），131.5（C-5），107.6（C-6），158.6（C-7），118.5（C-8），152.6（C-9），108.3（C-10）。以上数据与文献［8］基本一致，故鉴定为7-羟基香豆素。

化合物4：白色结晶（丙酮），mp 167～149 ℃，ESI-MSm／z：229.3 ［M ＋Na］＋。1H-NMR（DMSOd6，500 MHz）δ：8.02（1H，d，J=7.8 Hz，H-4），6.71（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），6.37（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），6.24（1H，d，J=7.8 Hz，H-3），4.03（3H，s，7-OCH3），3.91（3H，s，5-OCH3）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：158.6（C-2），108.4（C-3），141.2（C-4），158.6（C-4a），152.4（C-5），95.1（C-6），159.2（C-7），89.1（C-8），106.7（C-8a），59.4（7-OCH3），54.2（5-OCH3）。以上数据与文献［9］基本一致，故鉴定为5，7-二甲氧基香豆素。

化合物5：无色粉末（丙酮），mp 143～145 ℃，分子式 C11H12O5，ESI-MSm／z：224.8 ［M ＋H］＋。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：11.73（1H，s，-OH），6.41（1H，d，J=1.8 Hz，H-6′），6.19（1H，d，J=1.8 Hz，H-4′），4.02（2H，s，2-CH2），3.81（3H，s，-OCH3），2.73（3H，s，2′-COCH3）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：169.4（C-1），158.3（C-3′），159.2（C-5′），135.4（C-1′），113.6（C-2′），109.8（C-6′），116.8（C-4′），51.4（1-OCH3），39.8（C-2），31.6（2′-COCH3）。以上数据与文献［10］基本一致，故鉴定为2-乙酰基-3，5-二羟基-苯乙酸甲酯。

化合物6：无色粉末（丙酮），mp 133～135 ℃，分子式C9H10O2，ESI-MSm／z：151.2 ［M＋H］＋。1HNMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：11.84（1H，s，2-OH），7.53（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），6.92（1H，dd，J=1.8，7.8 Hz，H-4），6.74（1H，d，J=7.8 Hz，H-3），2.61（3H，s，1-COCH3），2.17（3H，s，5-CH3）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：123.6（C-1），158.5（C-2），121.4（C-3），134.6（C-4），123.9（C-5），129.8（C-6），25.8（1-COCH3）。以上数据与文献［10］基本一致，故鉴定为2-羟基-5-甲基苯乙酮。

化合物7：棕色粉末（丙酮），mp 172～174 ℃，ESI-MSm／z：242.8 ［M＋H］＋。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：6.98（1H，d，J=7.8 Hz，H-3），6.51（1H，m，H-4），5.91（1H，m，H-5），4.03（1H，m，H-8），2.43～2.31（3H，m，H-6，9），1.96（1H，m，H-6），1.72（3H，s，H-11），1.58（1H，m，H-7），0.85（3H，d，J=11.3 Hz，H-12）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：169.3（C-10），191.7（C-1），139.5（C-5），132.4（C-3），119.6（C-4），123.6（C-2），69.2（C-8），40.3（C-9），37.1（C-7），34.9（C-6），11.3（C-12），10.9（C-11）。以上数据与文献［11］基本一致，故鉴定为glansreginic acid。

化合物8：黄色油状物（丙酮），分子式C16H22O4，ESI-MSm／z：278.9 ［M ＋H］＋。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.69（2H，m，H-3，6），7.58（2H，m，H-4，5），4.03（2H，d，J=7.8 Hz，H-2′），2.48（1H，m，H-3′），1.03（6H，d，J=7.8 Hz，H-4′，5′）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：129.6（C-1），129.6（C-2），128.3（C-3），131.6（C-4），131.6（C-5），128.3（C-6），68.3（C-2′），30.2（C-3′），21.5（C-4′），21.5（C-5′），170.3（-COOH）。以上数据与文献［12］基本一致，故鉴定为邻苯二甲酸二异丁基酯。

化合物9：无色油状物（丙酮），分子式C8H10O，EI-MSm／z：145.2 ［M＋Na］＋。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.03（1H，s，H-6），6.81（2H，d，J=7.8 Hz，H-4），6.57（2H，d，J=7.8 Hz，H-3），4.81（1H，s，1-OH），3.29（3H，s，5-CH3），2.53（3H，s，2-CH3）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：149.3（C-1），122.5（C-2），131.6（C-3），122.9（C-4），131.9（C-5），112.6（C-6），15.2（2-CH3），20.1（5-CH3）。以上数据与文献［13］基本一致，故鉴定为2，5-dimethylphenol。

化合物10：无色粉末（丙酮），分子式C11H18O3，ESI-MSm／z：199.1 ［M＋H］＋。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：4.61（1H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-6），3.92（1H，brs，H-9b），3.74（1H，m，H-9a），2.61（1H，m，H-8b），2.49（1H，m，H-8a），1.97（1H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-5b），1.68（3H，s，H-7，1.61（1H，t，J=7.8 Hz，H-5a），1.35（3H，s，H-10 ），1.08（3H，s，H-11）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：19.5（C-1），131.6（C-2），158.3（C-3），38.6（C-4），46.8（C-5），70.5（C-6），10.2（C-7），31.7（C-8），57.3（C-9），24.5（C-10），30.9（C-11）。以上数据与文献［13］基本一致，故鉴定为robinlin。

化合物11：无色针晶（丙酮），分子式C11H14O5，ESI-MSm／z：226.0 ［M＋H］＋。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：9.37（2H，brs，H-3，H-5），9.06（1H，brs，H-4），6.83（2H，s，H-2，H-6），4.17（2H，t，J=7.8 Hz，H-1′），2.03（2H，m，H-2′），1.57（2H，m，H-3′），1.03（3H，t，J=7.8 Hz，H-4′）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：118.9（C-1），115.9（C-2），153.6（C-3），141.7（C-4），153.6（C-5），115.9（C-6），170.2（C-7），64.7（C-1′），29.6（C-2′），18.7（C-3′），13.5（C-4′）。以上数据与文献［14］基本一致，故鉴定为没食子酸正丁酯。

化合物12：白色油状物（丙酮），分子式C16H22O4，ESI-MSm／z：279.1 ［M ＋H］＋。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.68（2H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-3，6），7.54（2H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-4，5），3.48（4H，t，J=7.8 Hz，H-2′，2″），1.76（4H，dq，J=7.8，1.8 Hz，H-3′，3″），1.29（4H，m，H-4′，4″），0.91（6H，t，J=7.8 Hz，H-5′，5″）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：128.4（C-1），128.4（C-2），128.6（C-3），130.6（C-4），130.6（C-5），128.6（C-6），64.3（C-2′），29.5（C-3′），21.8（C-4′），14.2（C-5′），64.3（2″），29.5（3″），21.8（4″），14.2（5″），171.3（-COO）。以上数据与文献［14］基本一致，故鉴定为邻苯二甲酸二正丁酯。

4 讨论

本研究从石草鞋中分离得到12个化合物，其中7个为萝藦科植物中已报道的化合物，均是该科植物中分布较广的特征性成分。国外学者研究表明化合物9 2，5-dimethylphenol 具有抗病毒、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤、调节免疫能等活性［15］。化合物11 robinlin 具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗衰老、降低血管通透性的作用［16］。推测香豆素、有机酸和黄酮类等成分可能是石草鞋的药效物质基础。而深入的化学成分和药理活性研究将有助于揭示其发挥临床疗效的物质基础和作用机理。