保心宁胶囊质量标准提升研究

何玉涛 林凡友 卞常芝 秦承盟

【摘 要】 目的：提升保心宁胶囊质量标准。方法：采用薄层色谱法（TLC）对保心宁胶囊中丹参、三七、枳壳进行定性鉴别，采用高效液相色谱法对保心宁胶囊中丹参酮ⅡA含量进行定量检测，色谱柱为Agilent C18柱，以甲醇-乙腈-水=（325∶100∶125）为流动相，检测波长为270nm。结果：TCL斑点清晰，分离效果好，阴性样品无干扰。丹参酮IIA在3.62～28.96 μg·mL-1范围内具有良好的线性关系（r=0.9998），平均回收率为98.81%，RSD为2.55%。结论：所建立的定性和含量检测方法能有效的检测保心宁胶囊质量，可以作为质控检测标准。

【关键词】 保心宁胶囊;质量标准;HPLC;丹参酮ⅡA

【中图分类号】R921.2 【文獻标志码】 A【文章编号】1007-8517（2019）22-0046-04

Improvement of the Quality Standard of Baoxinning Capsules

HE Yutao1 LIN Fanyou2* BIAN Changzhi2 QIN Chengmeng2

1.Renhetang Pharmaceutical Co.， Ltd.， Linyi 276600， China; Sunhover Pharmaceutical Co.， Ltd.， Linyi 276023， China

Abstract：Objective To improve the quality control standard of Baoxinning  Capsules. Method TLC was used for identification of herbal medicine Danshen， pseudo-ginseng and fructus aurantii in Baoxinning Capsules.HPLC was used for quantitative determination of tanshinone IIA in Baoxinning capsules.The Agilent C18 column was used with the mobile phase of mixture of methanol - acetonitrile - water=（325∶100∶125）， the detection wavelength was 270 nm. Result TLC sports developed were fairy clear， and the blank test showed no interference.The linear relationship of tanshinone IIA was good in the range of 3.62～28.96  μg·mL-1（r=0.9998）. The average recovery rate was 98.81%， RSD=2.55% （n=9）.Conclusion The established qualitative and content detection methods can effectively detect the quality of Baoxinning capsules， and can be used as the quality control detection standard.

Keywords：Baoxinning Capsules; Quality standard; HPLC; Tanshinone IIA

保心宁胶囊是由丹参、当归和枳壳的干浸膏及三七4味药组成，具有活血化瘀、行气止痛之功效。临床上用于心绞痛、心律失常，改善冠心病症状等[1]。本产品执行标准为卫生部药品标准中药成方制剂第十一册药品标准，检验项目极其简单，没有含量检测等定量控制指标。为了更好地控制该产品的质量，定量定性检测有效成分，特对质量标准进行提高。研究表明丹参具有较强的药理作用[2-3]，多以治疗心血管系统疾病为主，主要成分为丹参酮IIA、丹参素等，为准确控制药品质量，用甲醇提取有效成分，高效液相检测，进行丹参含量测定。三七、枳壳分别增加薄层鉴别检查项，定性检测其成分，为控制产品质量提供更有效措施。

1 仪器与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪，MS105DU型电子天平。丹参对照药材（批号120923-201615）;枳壳对照药材（批号120981-201605）;丹参酮IIA对照品（批号110766-201721）;人参皂苷Rg1对照品（批号110754-201324）;三七皂苷R1对照品（批号110745-201318）对照品均来源于中国食品药品检定研究院，甲醇、乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。保心宁胶囊样品来源于翔宇药业股份有限公司提供，批号为150101、150302、150401、150402、150403、150902、160503、161001、161102、170302。

2 方法與结果

2.1 薄层鉴别

2.1.1 三七 取本品内容物，研细，称取1.0g，加甲醇15mL，超声处理1h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5mL使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rg1对照品、三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1mL各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版四部通则0502）试验，吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-正丁醇-甲醇-水（2∶4∶1∶2）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10% 硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟。供试品色谱图中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点，而阴性供试品溶液在相应位置无斑点。

2.1.2 丹参 取本品内容物，研细，称取4.0g，加甲醇40mL，加热回流提取1h，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇5mL使溶解，作为供试品溶液。取丹参酮IIA 1.0 g、丹参对照药材1.0 g，同法制成对照品及对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版四部通则0502）试验，吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮（95∶5）为展开剂，展开，取出，晾干，日光下检视。供试品色谱图中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性供试品溶液在相应位置无斑点。

2.1.3 枳壳 取本品内容物，研细，取约0.5 g，加甲醇10 mL，超声处理30min，滤过，滤液挥干，残渣加乙醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。另取枳壳对照药材0.2 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版四部通则0502）试验，吸取上述溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶6∶2）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105 ℃加热约5 min，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱图中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而阴性供试品溶液在相应位置无斑点。见图1。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱为 thermo C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）;流动相为甲醇-乙腈-水=（325∶100∶125），检测波长270 nm，流速1.0 mL·min-1，柱温为室温25 ℃，进样量为10 μL。理论板数按丹参酮IIA峰计不低于3000。

2.2.2 溶液的制备

2.2.2.1 供试品溶液的制备 取本品内容物适量，研细，称取0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，超声处理（功率140W，频率42kHz）30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.2.2 对照品溶液的制备 取丹参酮IIA对照品适量，精密称定，加甲醇制成高浓度的对照品储备液，取对照品储备液适量再加甲醇稀释至每1mL约含15μg的溶液，即得对照品溶液。

2.2.2.3 阴性供试品溶液制备 取除丹参外的其余处方量药材，按制备工艺方法制备缺丹参的阴性样品，按上述供试品溶液制备方法制成缺丹参的阴性样品溶液。

2.2.3 专属性试验 分别精密量取对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪中测定。结果表明理论板数按丹参酮IIA峰计算大于3000，丹参酮IIA和样品中其它组分峰可基线分离，且与其相邻色谱峰的分离度大于1.5;阴性供试品溶液对主峰检测无干扰，表明该方法专属性良好。如图2所示。

2.2.4 线性试验 精密吸取丹参酮IIA对照品溶液储备液适量，分别加甲醇稀释成浓度为3.62 μg·mL-1、7.24 μg·mL-1、14.48 μg·mL-1、18.1 μg·mL-1、21.72 μg·mL-1、28.96 μg·mL-1的溶液，分别精密吸取10μL，注入高效液相色谱仪，测定其峰面积。以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：A=60.395C-20.83，r=0.9998。结果表明丹参酮IIA在3.62～28.96 μg·mL-1范围内具有良好的线性关系。

2.2.5 精密度试验 取对照品溶液重复进样6次，测定峰面积。结果表明：丹参酮IIA的峰面积的RSD为0.22%，表明该方法的系统精密度良好。

2.2.6 稳定性试验 将150402批供试品溶液于室温条件下放置12h，分别于0、1、2、4、6、8、12h精密量取10μL注入液相色谱仪测定。结果表明，在室温条件下放置12h内，所得丹参酮IIA的峰面积的RSD为0.29 %，供试品溶液在12h内稳定性良好，保心宁胶囊的丹参酮IIA含量为0.22mg·粒-1。

2.2.7 回收率试验 取同一批样品（批号：150402，含量为0.22 mg·粒-1，每粒0.45g），设计高、中、低3个不同浓度，高、中、低浓度丹参酮IIA对照品加入量与所取供试品中待测定成分量之比控制在1.5∶1、1∶1、0.5∶1，各分别制备3份供试品溶液进行测定。结果见表1，丹参酮IIA的平均回收率为98.81%，RSD为2.55%。

2.2.8 耐用性试验 分别使用正常色谱条件，不同柱温（25±5）℃、不同波长（270±2）nm、不同流速（1.0±0.1） mL·min-1、不同流动相比例、不同色谱柱thermo C18 （250mm × 4.6mm，5μm）、Agilent C18 （250mm × 4.6mm，5μm）进行测试，分别计算对丹参酮IIA含量进行考察。结果所有丹参酮IIA含量的RSD为1.54%，含量耐用性较好。

2.2.9 样品含量测定 测定10批保心宁胶囊，依次吸取对照品溶液和供试品溶液10 μL，注入高相液相色谱检测丹参酮IIA含量。结果见表2。

从以上10批保心宁胶囊样品的含测结果可知，每粒样品中丹参酮IIA的含量范围为0.19～0.29mg，考虑到丹参药材产地、采收季节、工业大生产中有效成分转移率、有效成分稳定性等因素对样品中丹参酮IIA含量的影响，为保证产品在有效期内有效成分含量符合质量标准要求，暂定每粒样品中含丹参以丹参酮IIA计不得少于0.12 mg。

3 讨论

3.1 TLC鉴别 在保心宁胶囊原有标准中，鉴别项仅规定了最大吸收波长及一个显色鉴别，不能准确控制产品有效成分，经查阅文献及实验研究，对保心宁胶囊中的三七、丹参和枳壳都增加了TLC鉴别项。分别查阅不同文献[4-6]研究不同的展开剂对鉴别的影响，考察高温高湿等条件对TLC方法进行耐用性验证，制定最有效的鉴别方法，经考察阴性供试品对样品的定性鉴别无干扰，该方法的专属性较强。

3.2 含量检测 丹参为方中君药，主要成分为丹参酮IIA、丹参素等，因此将丹参中丹参酮IIA作为本品质量控制的指标成分。本文以甲醇为提取剂，采用高效液相色谱法测定丹参中丹参酮IIA含量。采用紫外分光光度计对丹参酮IIA溶液进行全波长扫描，结果在270nm波长处有最大吸收，故选择270nm作为本品的测定波长。分别考察甲醇-乙腈-水（325∶100∶125）、甲醇-水（75∶25）为流动相，结果以甲醇-乙腈-水（325∶100∶125）为流动相时，丹参酮IIA峰形对称，分离度大于1.5，理论板数大于3000，故确定甲醇-乙腈-水（325∶100∶125）为流动相。该方法经方法学验证，丹参酮IIA在3.62～28.96μg·mL-1范围内线性关系良好，平均回收率为98.81%，耐用性RSD为1.54%，对10批样品含量进行检测结果稳定，说明该方法准确度高，耐用性强，能有效控制保心宁胶囊的质量。

综上所述，采用高效液相色谱法对保心宁胶囊中丹参酮IIA含量进行检测，专属性好，准确度高;并对处方中的三七、丹参和枳壳都增加了鉴别项进行定性控制，能有效控制保心宁胶囊的质量，对保心宁胶囊质量标准的制定有一定提升作用。

参考文献

[1]翟宏宇，王海洋，杨献玲，等.保心宁片HPLC特征图谱研究及8个指标性成分的含量测定[J].药物分析杂质，2017，37（9）：1633-1639.

[2]陈晨，王慧洁，刘芙蓉，等.丹参酮ⅡA白蛋白纳米粒的制备及其体外抗肿瘤药效研究[J].中国中药杂志，2017，42（4）：696-701.

[3]杜娟，杨小敏，周佳慧，等.丹参中各活性部位对心肌保护作用的对比评价[J].中国药学杂志，2018，53（9）：690-694.

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[5]郑永萍，江先合，施文平.丹参五味子片的薄层色谱鉴别[J].中国现代药物应用，2014，8（5）：3-4.

[6]皮达，谭舒舒，罗小泉，等.陈皮、枳壳和化橘红中黄酮苷类成分的薄层鉴别[J].时珍国医国药，2018，29（9）：2184-2187.

（收稿日期：2019-09-04 編辑：刘 斌）