十二时辰软膏剂制备工艺研究

刘思延 阚永军 胡娟 庞文生

【摘 要】 目的：研究十二時辰软膏剂的最佳制备方法，确定最佳基质处方、成型工艺条件。方法：以高温试验、低温试验、离心实验和外观性状为评价标准，比较不同基质的软膏剂处方的稳定性，选出最佳基质处方进行单因素考察，在此基础上采用Box-Behnken设计，选出最佳软膏基质配比;以药物与基质的不同比例制备药膏，确定十二时辰软膏剂的最佳含药量，并观察软膏剂的外观性状。结果：最佳基质配方为以聚山梨酯为乳化剂的O/W型基质，最佳基质的配比为单硬脂酸甘油酯：吐温-80：白凡士林（0.8∶4∶3）。最佳载药量为20%。结论：探讨了十二时辰软膏剂的初步成型工艺，为增加治疗糖尿病足的制剂品种提供了一定的研究基础。

【关键词】 十二时辰;软膏;Box-Behnken;制备工艺

【中图分类号】R283.6 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2019）22-0062-05

Study on the Preparation Process of Clematis Florida Thunb.var.Plena DE.Don Ointment

LIU siyan1 KAN yongjun2 HU juan1 PANG wenshen1*

1. Fujian University of Traditional Chinese Medicine， Fuzhou 350122， China;2. Fujian Second People's Hospital Affiliated to Fujian University of Traditional Chinese Medicine， Fuzhou 350003， China

Abstract：Objective The best preparation method for the Clematis florida Thunb.var.Plena DE.Don ointment was studied to determine the optimal matrix formulation and molding process conditions. Methods In this experiment， high temperature test， low temperature test， centrifugation test and appearance traits were used as evaluation criteria to compare the stability of ointment formulations of different matrices， so as to select the best matrix prescription. A single factor study of the optimal matrix formulation， and based on this， using the Box-Behnken design， in order to select the best ointment matrix ratio; The ointment is prepared by mixing the drug with the matrix in different proportions， thereby determining the optimal drug content of the Clematis florida Thunb.var.Plena DE.Don ointment and observing the appearance of the ointment. Results The best matrix formulation is O/W matrix with polysorbate as emulsifier. The optimum ratio of the matrix is glyceryl monostearate： Tween-80： white petrolatum （0.8∶4∶3）. The optimal drug loading is 20%.Conclusion This experiment determined the preliminary molding process of the Clematis florida Thunb.var.Plena DE.Don ointment and provided a certain research basis for increasing the preparation of the diabetic foot.

Keywords：Clematis florida Thunb.var.Plena DE.Don; ointment; Box-Behnken; Preparation Process

十二时辰是闽东地区具有民族特色的畲药，据黄泽豪等[1]考证，产于福建福安的畲药十二时辰其原植物是重瓣铁线莲Clem-atis florida Thunb.var.Plena D.Don。该药在《福安畲医畲药》[2]、《滇南本草》[3]、《全国中草药汇编》[4]和《中华本草》[5]中均记载性温、味辛。辛味能行，能活血祛瘀，性温能温通血脉，通则不痛，故在畲医中取其良好的“通经活络，活血止痛”等功效，用于治疗跌打损伤所致的血脉经络不通，不通则痛之关节肿痛等，引申用于由于瘀血阻滞脉络不通的糖尿病足（脱疽），以期达到瘀去络通，从而达到改善或延缓糖尿病足的症状或进程。根据糖尿病足的致病机制以及十二时辰的性味功效，开发研制十二时辰外用制剂，为畲药十二时辰的进一步研究利用提供理论依据，促进民族药的开发，同时也为糖尿病足治疗提供新的途径。胡娟等[6]研究畲药十二时辰水煎剂对小鼠的急性毒性，初步评价十二时辰口服用药的安全性，为十二时辰软膏剂的安全性评价提供研究基础。本实验以高温试验、低温试验、离心实验和外观性状为评价标准，比较不同基质的软膏剂处方的稳定性，选出最佳基质处方进行单因素考察，在此基础上采用Box-Behnken设计，选出最佳软膏基质配比;以药物与基质的不同比例制备药膏，确定十二时辰软膏剂的最佳含药量，并观察软膏剂的外观性状。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 HH-6型数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司）;KQ-500DV数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;YP502N电子天平（上海精密科学仪器有限公司）。

1.2 试剂 无水乙醇（批号：180814，西陇科学股份有限公司）;白凡士林（批号：170809，西陇科学股份有限公司）;丙三醇（批号：20150407，国药集团化学试剂有限公司）;十二烷基硫酸钠（批号：E1512039，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）;单硬脂酸甘油酯（批号：C10214212）、羊毛脂（批号：M58218033）、硬脂醇（批号：C10003568）、吐温-80（批号：C10262067）、尼泊金乙酯（批号：C10107393）均购自上海麦克林生化科技有限公司。

1.3 药材 十二时辰药材产自福建福安畲药种植基地。

2 方法与结果

2.1 十二时辰药液的提取 称定十二时辰药材（粉碎过三号筛）10.00g，置锥形瓶中，加入50%乙醇，料液比（g/mL）为1∶30，浸泡20min，超声提取30min，摇匀过滤，减压浓缩至干，备用。

2.2 软膏剂的制备 称取处方量的羊毛脂、白凡士林、单硬脂酸甘油酯、硬脂醇作为油相，水浴加热至80℃，称取处方量的吐温-80、十二烷基硫酸钠、甘油作为水相，用蒸馏水溶解十二时辰提取物与水相混合，水浴加热至80℃，将油相缓缓加入水相中， 按同一方向搅拌至冷凝。

2.2.1 软膏剂评价方法的建立 高温实验（Y1）评分标准：取膏体适量装入西林瓶中，密封，于40℃恒温箱中放置24 h后，取出恢复至室温，取样观察是否出现软化、油水分层等现象。无明显变化3分，出现软化2分，有油滴析出1分，油水分层0分。

低温实验（Y2）评分标准：取膏体适量装入西林瓶中，密封，于20℃冰箱中箱中放置24 h后，取出，恢复室温取样观察。无明显变化3分，变硬2分，有油滴析出1分，油水分层0分。

离心实验（Y3）评分标准：称取软膏适量，置于离心管中，以3500 r/min离心10 min，取样观察，是否出现油水分层、药物沉淀等现象。无变化3分，变粗2分，析出油滴1分，油水分离、药物沉淀0分。

外观性状评（Y4）分标准：膏体均匀、细腻易涂布3分;膏体颗粒感、易涂布2分;膏体质硬、不易涂布或膏体偏稀1分;油水分层0分。

以高温实验、低温实验、离心实验结果评分和外观性状多指标综合评分相加得到总分（Y）。Y=Y1+Y2+Y3+Y4

2.2.2 软膏劑辅料及基质的考察 软膏剂是药物与适宜基质均匀混合制成的具有一定稠度的半固体外用制剂。其中基质不仅是软膏的赋形剂，同时对药物的释放和吸收有重要的影响，常用基质分为油脂性、水溶性和乳剂型3类，本研究结合文献方法[7-12]根据各组分的性质，以“2.2.1项”下建立的软膏评价方法对基质进行预实验组方研究，筛选不同类型的软膏剂基质，结果见表1。

由表1可知，在不同基质的类型的处方中，以聚山梨酯为乳化剂的O/W型基质在7组预实验中综合得分较高，在此基础上采用单因素设计，以“2.2.1项”下建立的评价方法为标准，选取单因素实验中对软膏剂型影响较大的三种因素进行Box-Behnken设计优化设计。

2.2.3 Box-Behnken设计优化基质处方 根据单因素实验结果，以单硬脂酸甘油酯用量（A）、吐温-80用量（B）、白凡士林用量（C）为3个考察因素，以Y为评价指标，进行实验设计，实验设计及结果见表2。

2.3 Box-Behnken结果分析

2.3.1 线性拟合 采用Design ExPert 8.0.6软件，对表2数据进行Linear、2FI、Quadratic、Cubic模型拟合处理，以相关系数（R2）和置信度（P）为模型判断标准，结果发现Quadratic模型置信区间P<0.0001，R2=0.9409，拟合的响应面回归模型具有极显著差异，模型的预测值与实验值的相关性高，可以很好地描述实验结果，拟合2次项方程：Y=11.06-0.25A+0.75AB+1.25AC+1.75BC-2.18 A2-2.68B2-1.17C2。

2.3.2 方差分析 由表3可知，此模型P<0.0001，R2=0.9409，说明该模型非常显著可以很好地描述试验结果。同时模型的失拟项P=0.4428>0.05，表明失拟项没有显著性差异，模型的实际值与预测值不拟合发生的概率低，该模型显著且拟合方程对试验结果预测性好。上述拟合方程中各项系数绝对值的大小直接反映了各因素对指标值的影响程度，系数的正负反映了其影响的方向。各因素对模型影响顺序依次為B>A>C，即吐温-80>单硬脂酸甘油酯>白凡士林，其中B、C的P值均小于0.0001，对模型具有极显著性影响，吐温-80、白凡士林是影响软膏剂的主要因素。在各因素交互作用中AB、AC、BC、A2、B2、C2的P值均小于0.05，表明各个因素之间存在较为显著的交互作用。

2.3.3 效应面绘制及预测 效应面3D图以及二维等高线图可直观地反应最优条件下各因素的取值和因素间交互作用的强弱。二维图等高线呈椭圆形且越密集，表明影响因素交互作用强，响应值大，响应面3D图越弯曲、陡峭表明交互作用明显。反之，交互作用弱。本实验根据“2.3.2项”下结果，绘制效应面的3D图及二维图，见图1。由二维图可知各因素取值均在较佳范围内，表明在单因素筛选的基础上进行优化设计具有一定的科学性。其中A、B、C之间存在较强的交互作用和方差分析的结果相一致。A、B、C为影响软膏的主要因素，Design-ExPert软件优选出软膏最佳基质单硬脂酸甘油酯：吐温-8：白凡士林（0.8∶4∶3），共制备软膏30g。

2.4 验证实验 为验证模型可靠性，按上述优化工艺进行验证试验，平行制作三批软膏剂，综合评分分别为12、12、11，预测值为12，偏差为2.78%。说明该模型稳定可靠，结果表明，Box-Behnken法建立的模型具有良好的预测性。

2.5 软膏载药性能的考察 在确保软膏剂的外观及稳定性前提下，按照“2.2.2项”及“2.3.3项”下处方和方法分别制备不同载药量（10%、20%、30%）的软膏，对软膏进行综合评分，考察软膏的载药性能，由表4可知，软膏载药量在10%～20%时软膏外观均匀细腻，易涂布，理化性质稳定，Y较高。软膏的性能较为稳定，当载药量达到30%时，软膏的性能变化明显，载药量初步定为20%。为了保证制剂的疗效，应尽可能减少基质的用量，増加药物的用量，最终确定载药量为20%。

3 讨论

实验前期对十二时辰的提取方式进行考察，以出膏率为评价指标，确定了以50%乙醇作为提取溶剂，料液比（g/mL）为1∶30，浸泡20min，超声提取30min。

以综合评分（Y）为评价指标对不同基质处方进行筛选，确定以聚山梨酯为乳化剂的O/W型基质最为稳定，高、低温实验无软化、变硬、油滴析出等现象出现，离心实验无油水分层且膏体细腻易于涂布，综合评分最高。在单因素实验中，白凡士林、单硬脂酸甘油酯、吐温-80、羊毛脂均对软膏剂的成型及稳定性有较大影响，选取影响最大的三个因素白凡士林、单硬脂酸甘油酯、吐温-80进行Box-Behnken设计。软膏基质配比为单硬脂酸甘油酯：吐温-80：白凡士林（0.8∶5∶2），所得软膏高温实验油水分层，膏体较粘稠不易涂布;配比为0.6∶4∶4，高温实验析出油滴，低温变硬，膏体易于涂布但略有颗粒感;配比为0.8∶4∶3，此时十二时辰软膏药物混合均匀、基质稳定、膏体细腻易涂布。故确定软膏基质的最佳配比为单硬脂酸甘油酯：吐温-80：白凡士林（0.8∶4∶3），制备软膏30g。

软膏剂的乳化温度控制应在80℃左右，温度过高水相成分不稳定，温度过低融化时间较长。基质的加热融化时间以30 min为准，时间过短则膏体偏于稀稠不易成型;时间过长则膏体较硬不易于涂布。

综上所述，软膏的配方为白凡士林3g，单硬脂酸甘油酯0.8g，羊毛脂0.9g，硬脂醇1g，吐温-804g，甘油3g，蒸馏水16g，十二烷基硫酸钠0.5g。最佳载药量为20%。本实验确定了十二时辰软膏剂的初步成型工艺，为增加治疗糖尿病足的制剂品种提供了一定的研究基础。

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（收稿日期：2019-09-16 编辑：刘 斌）