地塞米松对仔猪十二指肠黏膜免疫的影响

谢文婷 福建省将乐县动物卫生监督所 福建将乐 365500

地塞米松是人工合成的糖皮质激素类药物，常用在猪病治疗中，具有明显的消炎、抗毒素、抗过敏、抗休克等作用；近年来的研究发现[1]，地塞米松可以诱导(未成熟)胸腺细胞发生凋亡；用小鼠作为试验动物的研究发现，外源性的地塞米松不仅诱导胸腺细胞的凋亡，而且可以使脾脏细胞凋亡。谢玉生报道[2]，地塞米松可引起机体蛋白质异生和蛋白质合成的抑制，从而影响抗体生成，降低防御效果。何连琪也提到[2]：某些药物，如糖皮质激素类的泼尼松、氢化可的松和地塞米松，可以使胸腺皮质部萎缩，胸腺细胞明显消失，淋巴细胞被解体，产生免疫损伤作用。

查找相关资料，地塞米松对仔猪十二指肠黏膜免疫的影响未见详细的报道，本试验用不同剂量地塞米松注射仔猪，研究地塞米松对仔猪肠道黏膜免疫的影响，为生产中减少地塞米松对动物生产性能的影响提供理论依据，现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物 30头30日龄仔猪购自福州周边某规模化猪场。

1.1.2 仪器 ZT-12N自动脱水机，YR-21自动染色机，YB-8LF包埋机，DM2500高级显微镜，RM2235切片机。

1.1.3 试剂 地塞米松，包装规格为1 mL：5 mg，购于揭阳市龙阳动物药业有限公司；苏木精、伊红、PAS试剂盒购于北京罗基生物技术有限公司；一抗羊抗SIgA多克隆抗体，二抗即用型快速免疫组化MaxVisionTM试剂盒均购于福州迈新生物技术开发有限公司；3,3-二氨基联苯二胺盐酸盐（DAB）显色试剂盒和多聚赖氨酸购于北京中杉金桥生物技术公司。

1.2 试验方法

1.2.1 动物分组 试验共6组，分对照组和试验组，对照组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三个小组，每组5头；试验组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三个小组，每组5头；试验组三个小组分别连续7 d注射地塞米松1 mL（5 mg）、2 mL（10 mg）、3 mL（15 mg），对照组三个小组则注射与试验组相同剂量的生理盐水。

1.2.2 组织处理 绑定动物，快速剖开腹腔，取出小肠，于生理盐水洗掉内容物，多聚甲醛固定24 h，按常规方法固定、脱水、包埋，5μm切片，24 h烘干待用。

1.2.3 HE染色 切片经自动染色机脱蜡，于蒸馏水水洗5 min，入苏木精染色6 min，自来水洗净，1%盐酸酒精分色20 s，水中浸泡20 min返蓝，入1%伊红染1 min，自来水冲洗，脱水、透明、封片。染色后测量每组肠绒毛长度、隐窝深度，并对上皮内淋巴细胞进行计数。

1.2.4 PAS染色 切片脱蜡至蒸馏水洗10 min；滴加1%阿尔辛蓝醋酸水溶液染色15 min；蒸馏水洗3次；滴加1%过碘酸氧化5 min；滴加Schiff碱侵染15 min；倾去Schiff碱，流水冲洗10 min；滴加明矾苏木素核染2 min；水洗3 min，烘干、透明、封片。后进行酸性黏蛋白阳性细胞数量计数。

1.2.5 数据统计分析 试验数据采用SPSS 16.0软件进行统计分析，差异显著后进行LSD多重比较，以P＜0.01（差异极显著），P＜0.05（差异显著）作为差异显著性判断标准，结果用平均数±标准差（Mean±SD）表示。

2 结果与分析

2.1 不同剂量地塞米松对仔猪肠绒毛的影响 由表1可知，注射1 mL、2 mL和3 mL地塞米松仔猪的肠绒毛明显变短，肠绒毛高度与对照组相比较差异极显著（P＜0.01），而且随着剂量的加大绒毛长度逐渐递减。说明地塞米松对仔猪的肠绒毛生长具有抑制作用，剂量越大抑制作用越明显。

表1 不同剂量地塞米松对仔猪肠绒毛长度的影响

2.2 不同剂量地塞米松对仔猪隐窝深度的影响由表2可知，1 mL剂量的试验组与对照组相比，仔猪肠隐窝深度差异不显著（P＞0.05），2 mL和3 mL剂量的试验组与对照组差异极显著（P＜0.01），试验组隐窝深度明显比对照组更深；各剂量试验组间相比差异显著（P＜0.05），随着剂量的增加，隐窝深度依次变深。说明地塞米松使仔猪隐窝深度变深，剂量越大症状越明显。

表2 不同剂量地塞米松对仔猪肠隐窝深度的影响

2.3 不同剂量地塞米松对仔猪肠绒毛长度和隐窝深度比值影响 由表3可知，试验组仔猪肠绒毛长度和隐窝深度比值与对照组相比差异极显著（P＜0.01）；1 mL与2 mL剂量的试验组相比差异显著（P＜0.05），与3 mL剂量组相比则差异极显著（P＜0.01）；2 mL与3 mL剂量组间差异显著（P＜0.05）。说明地塞米松使肠黏膜吸收面积减少，动物营养物质吸收能力减弱。

表3 仔猪肠绒毛长度和隐窝深度比值

2.4 不同剂量地塞米松对仔猪肠绒毛黏液细胞的影响 AB/PAS染色结果表明，含有AB阳性的酸性黏多糖阳性细胞即Ⅱ型黏液细胞，染色结果细胞质呈蓝色。1 mL剂量的试验组Ⅱ型黏液细胞数量与对照组差异不显著（P＞0.05），黏液细胞的数量并没有多大的变化；2 mL和3 mL剂量试验组肠绒毛上皮Ⅱ型黏液细胞数量与对照组差异极显著（P＜0.01），黏液细胞的数量随着剂量的增加而逐渐减少，即酸性黏多糖分泌减少（见表4）。

表4 不同剂量地塞米松对Ⅱ型黏液细胞数量的影响

2.5 不同剂量地塞米松对仔猪肠绒毛上皮内淋巴细胞个数的影响 由表5可得，1 mL和2 mL剂量试验组与对照组相比差异不显著（P＞0.05），而3 mL剂量试验组与对照组差异显著（P＜0.05），说明试验组上皮内淋巴细胞数量比对照组显著减少。结果表明，仔猪在长时间大剂量地塞米松的作用下，使仔猪十二指肠上皮内淋巴细胞减少，降低了肠道黏膜免疫应答能力。

表5 不同剂量地塞米松对仔猪肠绒毛上皮内淋巴细胞数量的影响

3 讨 论

1）小肠是动物营养物质吸收和转运的主要部位，而营养物质在动物体内的吸收受多种因素的影响，其中肠道黏膜形态是影响营养物质吸收的主要因素之一。肠黏膜细胞中存在糖皮质激素及其类似物的受体，糖皮质激素可影响黏膜细胞的发育，进而影响动物营养物质的吸收，使得动物机体营养物质匮乏、饲料中营养物质大量浪费，更甚者导致动物机体免疫机能紊乱。在规模化饲养环境下，应激尤其是长期及急性应激可严重影响畜禽产品品质，影响畜禽养殖业的效益[3]。大量研究表明，面对应激，动物主要通过下丘脑-垂体-肾上腺（hypothalamic-pituitaryadrenal axis，HPA axis），以级联方式分泌相关激素，进而调整机体代谢，使机体产生相应的应激反应，其中糖皮质激素是HPA轴分泌一系列激素中直接作用于靶细胞及靶组织的关键激素，并且对HPA轴有反馈抑制作用[4]。利用糖皮质激素构建的应激模型，在家禽应激研究中常见[5]，且研究表明，外源性糖皮质激素及类似物可减少动物内源皮质激素的分泌[5]，李家驹等[6]研究发现皮下注射糖皮质激素能显著降低肉仔鸡血浆内源皮质酮含量，注射后肉仔鸡出现腹泻及羽毛凌乱现象。

2）研究表明，肠绒毛高度和隐窝深度反映了肠道功能状态，肠绒毛长度增加，吸收表面积增大，消化吸收功能增强，腹泻率降低，生长发育加快[7]；隐窝深度反映了细胞的生成率，隐窝越深，细胞成熟率下降，分泌能力减弱[8]；Mitchell等[9]研究表明，肠道黏膜形态相关指标中，肠绒毛高度、绒毛高度与隐窝深度的比值，与肠黏膜吸收面积与动物营养物质吸收能力的增强呈正相关[10]；小肠是蛋白质消化和吸收的主要场所，Ⅱ型黏液细胞的酸性分泌物有利于润滑食物，易与蛋白酶形成复合物，起到稳定酶的作用，所以要求有较高的酸性黏多糖[11-12]；肠黏膜上皮内淋巴细胞位于肠上皮细胞间和绒毛顶端，是一组CD8+抑制性T淋巴细胞，其免疫应答以Th1和IgG为主，在防御肠道病原体入侵方面发挥重要作用[13-14]，IEL的主要功能是细胞杀伤和抑制黏膜部位的过敏反应，在于免疫应答抑制和损伤上皮细胞的消除，是黏膜免疫系统的一个免疫效应部位，参与黏膜免疫应答[15]，因此，IEL的数量可以反映小肠局部黏膜免疫屏障的完整及免疫防御功能的完善程度。

3）本次试验结果也表明，长时间大剂量注射地塞米松，仔猪肠道绒毛变短，吸收面积减少；隐窝变深，肠黏膜细胞分泌下降，消化吸收能力减弱；随着剂量加大，分泌的酸性黏多糖越少；上皮内淋巴细胞减少，肠道免疫应答能力降低。皮质激素能促进胃酸分泌和胃蛋白酶的生成，抑制黏液分泌，阻碍组织修复，因而可诱发或加剧胃和十二指肠溃疡的发生，引起出血甚至穿孔。王芳等[16]报道临床上短期常规应用Dex引起的不良反应主要以消化系统为主，表现为呕吐、膈肌痉挛、下腹部绞痛等，而且大部分病例在给药后数分钟至24 h出现上述反应；可见本次试验结果与临床上报道的地塞米松可引起消化系统的不良反应具有相似性。Taylar和Harrison也曾报道[17]，严重性哮喘患者使用氢化可的松磷酸钠时可发生同样的副作用。因此，在临床上和科研中应用地塞米松时应严格掌握适应症和给药剂量，合理使用，尽可能避免地塞米松不良反应的发生，确保用药安全有效，减少生产经济上的损失。

4 结 论

本试验研究不同剂量地塞米松对仔猪肠绒毛长度、隐窝深度、酸性黏多糖数量及上皮内淋巴细胞数量的影响，结果表明地塞米松可使仔猪肠道的消化吸收能力减弱，肠道免疫应答能力降低。