叶下珠薄层鉴别方法研究

陈舒忆 李美位 唐艺

【摘 要】目的：采用薄层色谱法，建立叶下珠的薄层鉴别方法，为其质量控制提供依据。方法：以甲醇为提取溶剂，叶下珠为对照药材，没食子酸为对照品，醋酸为展开剂在聚酰胺薄膜上展开，喷以1%三氯化铁乙醇溶液显色，对叶下珠进行薄层色谱鉴别研究。结果： 供试品溶液在与对照药材和对照品相应位置上显相同颜色的清晰斑点。结论：本方法简便、快捷，重现性好，检出斑点清晰，可作为叶下珠的薄层鉴别方法。

【关键词】叶下珠;薄层鉴别;质量标准

中图分类号： R284.1 文献标识码： A文章编号： 2095-2457（2019）03-0035-002

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2019.03.011

Thin layer chromatography identification of Phyllanthus urinaria Linnaeus

CHEN Shu-yi LI Mei-wei TANG Yi*

（Guiyang Inspection Center for Food and Drug，Guiyang Guizhou 550081，China）

【Abstract】Objective To establish a thin layer chromatography identification method of Phyllanthus urinaria Linnaeus，and to provide experimental basis for quality control standard. Method Methanol was used as extracting solvent. Phyllanthi urinariae herba was used as contrast material， gallic acid was used as the reference material. Phyllanthus urinaria Linnaeus was identified with acetic acid as mobile phase， polyamide film as stationary phase and chloride ferric （1%） as color developing reagent. Result The test solution showed clear spots of the same color at the corresponding positions with the contrast material and the reference material. Conclusion The method was simple， rapid， and reproducible， the spots were clear and easy to be identified. It can be used for TLC identification of Phyllanthus urinaria Linnaeus.

【Key words】Phyllanthus urinaria Linnaeus; TLC; Quality standard

叶下珠为大戟科植物叶下珠 Phyllanthus urinaria Linnaeus 的干燥全草，为民间习用中药材，全草药用，有泻火明目、清热，利湿，解毒，消肿等功效，在临床上用于慢性乙型病毒性肝炎的治疗[1]。叶下珠的活性成分中，没食子酸含量最高，有抗病毒作用[2]。叶下珠已被多省收载为中药材地方标准，但薄层鉴别的研究较少。薄层鉴别是快速、灵敏、高效地鉴别中药材真伪的方法，故本文对叶下珠的薄层鉴别方法进行了研究，进一步完善了叶下珠的质量标准。

1 仪器与材料

赛多利斯BSA224S电子天平;超声波清洗器;微量毛细管;聚酰胺薄膜（国药集团化学试剂有限公司）;硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂）;双槽玻璃层析缸。

叶下珠对照药材（批号：121374-201802，中国食品药品检定研究院），没食子酸对照品（批号：110831-201605，中国食品药品检定研究院）。甲醇、乙醇、醋酸、丙酮、三氯化铁、乙醚、石油醚、氯仿、硫酸、乙酸乙酯、甲酸均为分析纯。

样品采至于贵州各个县市及周边省份。样品来源有铜仁思南、凯里麻江、凯里平茶、毕节威宁、四川泸州、福建泉州、四川成都、云南昭通、广西钦州、广东梅州。

2 方法与结果

称取叶下珠0.5g，加甲醇5ml，超声处理10分钟，振摇10分钟，离心，取上清液，浓缩至1ml，作为供试品溶液。称取叶下珠对照药材0.5g，按供试品制备方法制得对照药材溶液。另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液作为对照品溶液。

参照《中国药典》（2015年版）薄层色谱法，分别吸取供试品、对照药材溶液3μL，点样于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂展開，晾干后喷以1%三氯化铁乙醇溶液显色，日光下检视。结果见图1。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

3 讨论

本文考察了不同的提取方法、展开体系、点样量、环境条件等因素对薄层色谱结果的影响。

3.1 不同提取方法的比较

试验比较了4种溶剂提取方法，（1）取样品加50%甲醇超声提取，离心，上清液浓缩作为供试品溶液[3-4]。（2）取样品加甲醇超声提取，离心，上清液浓缩作为供试品溶液。（3）取样品加乙醇振摇提取，滤过，滤液浓缩，加硅胶装柱，弃去乙醚洗脱液，收集乙醇洗脱液，浓缩作为供试品溶液[5]。（4）取样品加无水乙醇超声提取，离心，上清液蒸干，石油醚浸泡后弃去，残渣加乙醇作为供试品溶液[6]。综合考虑提取效果及操作便捷等因素，在相同薄层条件下，选取方法（2）作为叶下珠薄层鉴别的提取方法。

3.2 不同展开体系比较

综合文献研究，本文实验考察了（1）聚酰胺薄膜为载体，醋酸为展开剂，1%三氯化铁乙醇溶液显色的展开体系[3];（2）硅胶G薄层板为载体，氯仿-甲醇（7.5∶1）为展开剂，10%硫酸乙醇溶液加热显色的展开体系[5];（3）硅胶G薄层板为载体，正己烷-乙酸乙酯（2：1）为展开剂，10%硫酸乙醇溶液加热显色，紫外光灯365nm下检视的展开体系;（4）聚酰胺薄膜为载体，乙醇为展开剂，1%三氯化铁乙醇溶液显色的展开体系[6];（5）硅胶G薄层板为载体，氯仿-乙酸乙酯-甲酸（6∶4∶1）为展开剂，2%三氯化铁乙醇加热显色的展开体系[4]等。结果表明，以聚酰胺薄膜为载体，醋酸为展开剂，1%三氯化铁乙醇溶液显色的展开体系分离效果最好，斑点清晰，重现性好。

3.3 不同点样量的比较

试验分别对1μL、2μL、3μL、5μL点样量进行了考察。结果表明，当点样量过小时，没食子酸检出斑点不清晰，选择3μL为最佳点样量。

3.3 不同环境条件的比较

分别考察不同温度和湿度对薄层鉴别结果的影响。温度考察40℃，25℃，10℃;湿度考察80%，60%，40%。结果显示，不同的温湿度条件对结果影响很小，斑点稳定性和重现性强。

薄层色谱作为一种专属性高、便捷高效的鉴别方法，在中药分析中应用非常广泛。综上，本文研究建立了叶下珠的薄层鉴别方法，为叶下珠的定性鉴别提供参考，对叶下珠标准的完善和提高具有一定的指导意义。

【参考文献】

[1]刘亚梅.叶下珠复方联合拉米夫定治疗拉米夫定耐药性乙型肝炎20例[J].陕西中医，2010，31（1）：15-17.

[2]杨琳媛，赵燕，吕卓.HPLC法测定不同产地叶下珠中没食子酸的含量[J].陕西中医.2014，35（10）：1416-1417.

[3]冀德富，郭东艳，裴妙荣，崔春利.叶下珠的薄层鉴别及其多酚类成分的含量测定[J].中国实验方剂学杂志.2009，15（11）：14-16.

[4]徐晓梅，谭本仁，朱兴保等.复方叶下珠滴丸質量标准及稳定性研究[J].中药新药与临床药理.2014，25（4）：483-487.

[5]湖南省食品药品监督管理局.湖南省中药饮片炮制规范[S].湖南：湖南科学技术出版，2009：377.

[6]河北省食品药品监督管理局.河北省中药材炮制规范[S].北京：学苑出版社，2003：44.