全自动尿沉渣分析仪计数体液细胞的性能评价

李春芸 陈春燕 陈 彬

体液细胞常规检验是鉴别渗出液与漏出液的重要方法之一，目前常规测定方法是用牛鲍氏手工镜检法计数，其存在的弊端是操作繁琐，重复性差，且与检验人员水平密切相关。因此，迫切需要一种更简单、快速、精密度高以及准确度高的方法替代。血常规分析仪计数体液细胞是目前使用最多的一种替代方法，但由于大部分血细胞分析仪白细胞(white blood cell，WBC)检测下限为100×106/L，且间皮细胞、肿瘤细胞对WBC的检测易造成干扰，影响结果的准确性[1-2]。IRIS IQ200型全自动尿沉渣分析仪(简称IQ200分析仪)主要用于尿液沉渣定量分析，其测定WBC和红细胞(red blood cell，RBC)的线性范围大，且IQ200分析仪具有人工修饰功能，可任意地选取荧光屏上可疑的成分图像，根据检测人员经验进行判断，重新分类。

本研究参照“2014版国际血液学标准化委员会(ICSH)体液细胞自动化计数仪性能和验证指南”对IQ200分析仪计数体液WBC和RBC进行性能评价[3-4]。评估IQ200分析仪计数体液WBC和RBC的各项性能指标(精密度，携带污染率，检出下限，相关性)，评价IQ200分析仪计数体液中WBC和RBC的应用价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2018年1-6月海口医院住院的150例患者的150份体液(胸水、腹水及脑脊液)标本，其中脑脊液33份，胸水67份，腹水50份。外观正常标本26份，微浑标本38份，黄色浑浊标本40份，血性46份。标本立即送检，并在2 h内完成计数。

1.2 仪器与试剂

采用IQ200分析仪[美国国际遥控影像系统有限公司(International Remote Imaging System，IRIS)]及配套试剂、质控品(美国IRIS公司)；牛鲍氏计数板(上海求精生化试剂仪器有限公司)；光学显微镜(日本OLYMPUS公司)；生理盐水(自配)。

1.3 检测方法

1.3.1 标本前期处理

对不同外观的标本进行前期处理，外观正常标本直接计数，血性、浑浊标本用生理盐水按1∶5～1∶100倍稀释。每份标本分成两份，一份用于手工计数，一份用于IQ200分析仪计数。计数结果乘以稀释倍数即为最终细胞数，见表1。

表1 不同外观标本采用的稀释倍数

1.3.2 空白实验

用去离子水作为样本，分别使用仪器法和手工法检测3次，计数WBC和RBC。由2名有经验的检验人员采用双盲方式完成，取2次测定结果的平均值进行报告。

1.3.3 批内精密度

选取WBC和RBC含量低值、中值及高值的3份体液标本，每份分别使用仪器法和手工法连续计数11次，各剔除1个最差的结果，分别统计每组10个结果的标准差(S)和变异系数(coefficient of variation，CV)。

1.3.4 携带污染率

分别取WBC和RBC高值体液标本连续测定3次(H1、H2、H3)，然后再测定3次低值标本(L1、L2、L3)，计算污染率，其计算为公式1：

污染率=(L1-L3)÷(H3-L3)×100% (1)

1.3.5 牛鲍氏手工计数法

标本前期处理后，再手工颠倒15次充分混匀，然后用移液管吸取少量滴入牛鲍氏计数板稍待静置5～10 min，低倍镜下计数10个大方格内RBC数和WBC数。由2名有经验的检验人员采用双盲方式完成，取2次测定结果的平均值进行报告，上述所有标本2 h内测定完毕。

1.3.6 IQ200分析仪计数法

标本前期处理后，再手工颠倒15次充分混匀后按照仪器说明书上机检测。本实验由有经验的检验人员对可疑的成分图像重新判断，并记录修饰后的定量计数结果。

1.4 统计学方法

应用SPSS 17.0软件进行统计分析，相关性采用Spearman相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种方法空白实验

用去离子水作为样本，手工法计数WBC和RBC均为0，仪器法计数WBC和RBC均为0。

因此IQ200分析仪计数体液WBC和RBC的检测下限可达到0，同手工法计数。

2.2 两种方法计数体液细胞精密度

两种方法分别计数高值、中值及低值细胞11次后，各剔除一个最差结果，其平均值，标准差，变异系数见表2。

表2显示，在两种方法检测中，细胞数越少，精密度越差。仪器法和手工法比较，IQ200分析仪计数体液WBC、RBC变异系数均＜10%，比手工法低，可见IQ200分析仪计数体液细胞精密度高，适用于体液细胞计数。

2.3 IQ200分析仪携带污染率

WBC携带污染率为0.03%，RBC携带污染率为0。IQ200分析仪计数体液WBC和RBC的携带污染率较低，在计数体液细胞时，可以不必清洗后再测定，见表3。

2.4 两种方法计数体液细胞的相关性分析

IQ200分析仪与手工法计数体液WBC相关性呈高度相关r=0.943，如图1所示。

表2 手工法和IQ200分析仪计数体液细胞的变异系数CV(%，

表2 手工法和IQ200分析仪计数体液细胞的变异系数CV(%，

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表3 IQ200分析仪携带污染率

图1 IQ200分析仪与手工法计数体液WBC相关性散点图

IQ200分析仪与手工法计数体液RBC相关性呈高度相关r=0.982，如图2所示。

图2 IQ200分析仪与手工法计数体液RBC相关性散点图

3 讨论

牛鲍氏手工镜检法计数是计数体液细胞的常规方法和金标准，但存在的缺点是操作繁琐，重复性差，耗时长，对检验人员水平要求较高。2014版国际血液学标准化委员会体液细胞自动计数仪性能和验证指南建议自动细胞计数仪准确计数体液细胞的验证方法[4]。

目前，有多种血液分析仪应用于浆膜腔积液细胞的计数，但体液中间皮细胞，肿瘤细胞对WBC的检测造成干扰，特别是间皮细胞，有些分析仪会把间皮细胞归类在WBC中计数，造成WBC计数增加，而影响结果[5-6]。一些血液分析仪由于其背景计数高，对体液细胞计数有一定的局限性，尤其当低细胞浓度时影响更加明显[7]。低细胞数导致了自动化检测的精密度下降，其CV甚至＞20%，越接近自动化分析仪的最低检出限，细胞计数的准确性和精密度越差[8-9]。由于低值细胞计数常见于各种体液，尤其是脑脊液，因此必须验证仪器准确计数低值细胞的性能[4]。IQ200分析仪空白试验WBC可达到0，其最低检出限可达到0。当体液细胞过少时，IQ200分析仪比血液分析仪更有优势，血液分析仪在细胞＜1×106/L时，仪器不能准确测出。许多研究报道显示，血液分析仪仅用于浆膜腔积液细胞的计数，不能用于脑脊液的计数。IQ200分析仪不仅适用于浆膜腔积液，而且也适用于脑脊液的计数，但其不足之处在于不能对WBC进行分类。

IQ200分析仪使用流式细胞原理和先进的自动粒子识别(APR)分析系统。应用流式细胞技术，每个检测样本在鞘液包裹下进入一个流动样本室，再进行连续摄影成像，将摄像所得的有形成分与记忆库中有形成分进行对比，从而判断有形成分的种类及精确计数有形成分的数量。同时IQ200分析仪具有人工修饰功能，可任意地选取荧光屏上可疑的成分图像，根据检测人员对形态判定的经验进行判断，重新分类，并且可以计算出对应的数量，修饰功能可以极大提高检测准确性。

IQ200分析仪具有很好的精密度，无论是高值、中值及低值体液细胞数，其变异系数均＜10%。IQ200分析仪还具有较低的互染率，RBC互染率为0，WBC互染率为0.03%；与手工计数法之间均呈高度相关(WBC r=0.943、RBC r=0.982)。故IQ200分析仪计数体液WBC和RBC具有检出下限低、精密度高及携带污染率低，与手工计数法相关性高的特点，且简便、重复性好，适用于体液WBC和RBC计数。