血浆硫氧还蛋白还原酶水平检测对宫颈癌早期诊断的价值研究*

顾益凤，朱自力，史跃燕，刘红利

(南通市肿瘤医院检验科，江苏南通 226361)

宫颈癌是当今女性最为常见的恶性肿瘤之一，近年来呈现出低龄化、高发病率的趋势[1]。定期安排健康人群体外检测肿瘤标记物是发现早期宫颈癌的一种有效手段，同时肿瘤标记物也可用于病情监测、预后评估。鳞状细胞癌抗原(SCCA)是我国现阶段许多医院辅助诊断宫颈癌的主要肿瘤标记物，但诊断效能存在一定的局限性。硫氧还蛋白还原酶(TrxR)是吡啶核苷酸二硫化物还原酶家族的一员，研究发现其与肿瘤的发生、发展及化疗耐药关联，已成为诊断、治疗肝癌、前列腺癌、肺癌、甲状腺癌等[2-5]的新靶点。但它在宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈癌患者血浆中的表达变化鲜有报道。本文主要研究硫氧还蛋白还原酶在宫颈病变患者血浆中的表达情况，验证其可否作为诊断宫颈上皮内瘤样变和早期宫颈癌的肿瘤标记物。

1材料与方法

1.1 研究对象 收集2018年1～9月南通市肿瘤医院妇科宫颈病变患者96例(CIN患者18例和宫颈癌患者78例)，年龄33～71岁，平均年龄52岁。入组标准：所有患者均为初诊，手术前未经过其他治疗；经过病理确诊的CIN及宫颈鳞状细胞癌患者和宫颈腺癌患者；个人无肿瘤病史及近期输血史；于手术前一天采集患者血浆。健康对照为同期20例健康体检者，年龄24～76岁，平均年龄54岁。本研究已通过南通市肿瘤医院伦理委员会的批准。

1.2 主要试剂及仪器 TrxR检测仪器为酶标仪(Thermo Scientific公司Multiskan Mk3)，试剂盒由武汉尚宜康健科技有限公司提供。SCCA检测仪器为化学发光仪(Snibe公司Maglumi 4000 plus)，试剂由Snibe公司提供。

1.3 实验方法 空腹抽取静脉血2 ml于肝素钠抗凝管，3 000 r/min离心10 min，分离出血浆。运用酶联免疫吸附法检测TrxR的水平，采用电化学发光法检测同批血浆SCCA的水平。TrxR，SCCA的临界值分别为4 μg/L，2.5 μg/L，检测值超过临界值为阳性。

1.4 统计学分析 采用SPSS19.0软件进行数据分析，血浆TrxR和SCCA的水平以中位数(四分位数)[M(P25，P75)]表示，采用Mann-WhitneyU检验、分析比较不同组间TrxR和SCCA水平的统计学差异。用MedCalc软件作ROC曲线，通过ROC曲线判断血浆TrxR和SCCA在CIN及宫颈癌诊断中的诊断效能。以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 血浆TrxR和SCCA水平检测 见表1。CIN组与健康对照组相比TrxR水平显著增加，差异有统计学意义(U=33.5，P<0.001)；宫颈癌组与健康对照组相比TrxR水平显著增加，差异有统计学意义(U=17.0，P<0.001)，宫颈癌组血浆TrxR水平亦显著高于CIN组，差异均具有统计学意义(U=15.8，P<0.001)。CIN组与健康对照组相比SCCA水平增加，差异有统计学意义(U=48.1，P<0.01)，宫颈癌组与健康对照组相比SCCA水平显著增加，差异有统计学意义(U=27.2，P<0.001)，宫颈癌组SCCA水平亦高于CIN组，差异具有统计学意义(U=24.1，P<0.001)。

表1 三组血浆TrxR和SCCA水平检测结果比较

2.2 ROC曲线分析 运用ROC曲线分析TrxR和SCCA对宫颈癌的诊断效能，见图1。

图1 血浆TrxR与血清SCCA诊断宫颈癌的ROC曲线分析

TrxR诊断宫颈癌的ROC曲线AUC是0.840(95%CI：0.761～0.902)，敏感度为92.3%，特异度为68.4%， 约登指数为60.7%；而SCCA诊断宫颈癌的ROC曲线AUC是0.822(95%CI：0.740～0.886)，敏感度为65.4%，特异度为86.8%，约登指数52.2%。两者诊断宫颈癌的效能TrxR要优于SCCA。

2.3 TrxR与SCCA水平在不同病理分期间的比较 见图2。宫颈癌I/II期患者和III/IV期患者血浆TrxR水平比较差异无统计学意义(U=662.0，P=0.500 4)，而宫颈癌I/II期患者和III/IV期患者血浆SCCA浓度比较差异有统计学意义(U=452.0，P=0.004 8)。

图2 宫颈癌I/II期患者和III/IV期患者血浆TrxR和SCCA水平

2.4 宫颈癌患者血浆TrxR水平与宫颈癌临床参数的关系 见表2。宫颈癌患者TrxR浓度与患者年龄、FIGO分期、病理类型无关(均P>0.05)，而与细胞分化程度呈现负相关，差异具有统计学意义(U=496.0，P=0.034)。

表2宫颈癌患者血浆TrxR水平与临床参数间的关系[M(P25，P75)]

临床特征nTrxR[M(P25,P75)]UP年龄(岁) FIGO分期 病理类型 分化程度 <44≥44I-II期III-IV期鳞癌腺癌低分化中、高分化3444473171728505.99(4.02,12.39)5.99(4.08,14.01)6.06(4.03,12.69)6.10(4.06,13.48)6.12(4.10,12.90)6.07(4.08,13.02)6.28(4.90,14.38)5.86(4.56,11.59)684.5 662.0 227.5 496.00.525 0.500 0.720 0.034

3讨论宫颈癌的发生是由多种因素作用的病理生理过程，其病理机制尚未完全清楚。在尚未有效预防宫颈癌的情况下，早期诊断并得于及早治疗仍然是宫颈病变患者的最佳选择。SCCA是临床上辅助诊断宫颈癌的主要肿瘤标志物，其对于早期宫颈癌和CIN的诊断敏感度和特异度不高。当前与宫颈癌发生相关的各种基因标志物不断涌现[6]，但还是存在着诊断效率不高，或者不便临床常规应用[7]。探寻早期即可高效诊断CIN和宫颈癌的肿瘤标志物是广大医学工作者的研究方向之一。从原核生物到人类的各种体细胞，TrxR广泛存在，它是人体内调控细胞异常增生水平的关键含硒酶，具有多种生物学活性，与肿瘤的发生、发展有着密切关系。有研究表明，在肿瘤发生的早期，TrxR的升高对维持细胞氧化还原稳态的调节起着关键作用，其能抵抗致癌物质的氧化应激损伤；一旦细胞癌变发生，高水平的TrxR又与肿瘤细胞生长和抵抗凋亡进展相关联[8]。因此，TrxR可以作为一个方便、快捷的新型肿瘤诊断标志，科研工作者也相继在乳腺癌[9]、肝癌[10]、非小细胞肺癌[11]中得到了验证。RAHSAN等[12]发现肿瘤细胞可释放TrxR到外周血中，且与肿瘤组织中TrxR浓度呈正相关。李方超等[13]发现肺癌患者血浆中TrxR水平较健康人明显升高。本研究通过检测TrxR在CIN和宫颈癌患者血浆中的水平，发现其在CIN和宫颈癌中都高表达，与健康对照组相比差异均有统计学意义，而且宫颈癌组高于CIN组，差异亦存在统计学意义，由此推断TrxR可作为宫颈癌和CIN诊断的一个可靠标志物。进一步运用ROC曲线分析，结果显示血浆TrxR诊断宫颈癌的特异度略低于SCCA，但敏感度显著高于SCCA，这非常适用于宫颈癌的早期筛查。TrxR诊断宫颈癌的约登指数高于SCCA，说明TrxR对宫颈癌的诊断效能高于传统肿瘤标志物SCCA，TrxR可作为辅助诊断宫颈癌的一个明星标志物。通过对TrxR和SCCA两个标志物与FIGO病理分期关系的分析，我们发现TrxR与病理分期无显著相关性，而SCCA与临床病理分期存在相关性，随着病理分期的升高，SCCA水平也显著升高。这说明在宫颈癌的筛查中，检测TrxR水平将有助于早期宫颈癌的发现。本研究还分析了血浆TrxR水平在不同临床病理特征间的差异，结果发现宫颈癌患者的不同年龄、病理分期和病理类型与TrxR水平变化无密切关联，这与张百华等[14]研究的TrxR水平在非小细胞肺癌不同病理参数中的表达特征相一致。但是在本研究中发现血浆TrxR水平与肿瘤细胞的分化程度呈现出一定的关联，由此推断TrxR的检测或许能够评估机体内异常增生的发生风险和程度，从而在肿瘤形成的更早期抓取肿瘤信号，便于肿瘤的早期诊断和及早治疗。但考虑到两者的差异不是特别显著，分析其原因可能与本次样本量不大有关，仍需扩大样本量来进一步的验证。相比其他基因标志物诊断宫颈癌，使用ELISA法检测TrxR水平方便快捷得多，且费用也低，可用于早期宫颈癌的大规模筛查[15]。

综上所述，血浆TrxR水平的检测有助于宫颈癌及癌前病变的尽早发现，TrxR对于宫颈癌的诊断效率优于肿瘤标志物SCCA。由于本次研究样本数量有限，且为单中心研究，统计结果或许存在一定程度的偏差，需后期进一步扩大样本量、多中心的临床验证。